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2025-06-22 18:23本頁(yè)面
【正文】 電泳方向 電泳 小分子 大分子 ６．染色和脫色 電泳完畢需通過染色和脫色評(píng)定其結(jié)果的優(yōu)劣，此外根據(jù)不同的研究目的，也可將凝膠直接進(jìn)行放射自顯影及電印跡。 mR=dpr/dBPB 夾在兩塊玻璃板之間的凝膠 電泳緩沖液 電泳緩沖液 加在槽中的經(jīng)SDS處理的樣品 分子量小 分子量大 電源 標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量 未知蛋白 在一定的凝膠濃度下，多肽鏈分子量的對(duì)數(shù)與多肽鏈的相對(duì)遷移率成線性關(guān)系，所以可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求未知多肽鏈分子量 。 2. 注意不能隨便傾倒 單體溶液 ，應(yīng)加入過量的催化劑使其完全聚合成無毒性的聚丙烯酰胺后再棄置。如果無法獲得無色透明的 TEMED，只能適當(dāng)增加用量以保證聚膠速度。保存固體過硫酸銨應(yīng)密閉干燥。另外在配制凝膠溶液時(shí)過硫酸銨不易過量，否則會(huì)使蛋白質(zhì)在電泳過程中被氧化 (主要指天然無變性劑凝膠 )。增加過硫酸銨或 TEMED的用量，將使丙烯酰胺聚合鏈長(zhǎng)度縮短，凝膠會(huì)變得脆弱而失去應(yīng)有的柔性。 6. 溫度的影響 聚膠的最佳溫度為 23~25 ℃ ，需要注意灌膠前單體溶液 (通常置于 4℃ 冰箱 )及玻璃板或管 (有時(shí)從烘箱取出 )也要平衡至此溫度。 7. 氧氣的影響 氧氣會(huì)與被激活的單體自由基作用抑制聚合過程，因此需在加激活劑前對(duì)單體溶液脫氣。通常在較好的真空度 (＜ 125torr)脫氣至少 15 min 。 SDS加入后不會(huì)對(duì)凝膠的聚合產(chǎn)生影響，但尿素會(huì)使凝膠孔徑變小，這一特性可用來分離小分子蛋白質(zhì)或多肽。采用核黃素時(shí)聚膠時(shí)間需更長(zhǎng)，但它一般用于等電聚焦即根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷性質(zhì)進(jìn)行分離，對(duì)孔徑大小要求不高，因此不必等很長(zhǎng)時(shí)間 (完全聚合需 8 h)。 11. SDS與蛋白質(zhì)的結(jié)合按質(zhì)量成比例 （即： SDS/g蛋白質(zhì)），蛋白質(zhì)含量不可以超標(biāo)，否則 SDS結(jié)合量不足。不能利用這次的標(biāo)準(zhǔn)曲線作為下次用。 ? 13. 有的蛋白質(zhì)（如：電荷異?；蚪Y(jié)構(gòu)異常的蛋白質(zhì)；帶有較大輔基的蛋白質(zhì)）不能采用該法測(cè)相對(duì)分子量。因此，對(duì)于這一類蛋白質(zhì)， SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法測(cè)定的只是它們的亞基或是單條肽鏈的相對(duì)分子量。 常見問題及處理辦法 １．紋理和拖尾現(xiàn)象 由于樣品溶解不佳引起的，克服的方法可以在加樣前離心，增加一些增溶輔助試劑如尿素。 ３．電泳時(shí)間比正常要長(zhǎng) 可能由于凝膠緩沖系統(tǒng)和電極緩沖系統(tǒng)的 pH選擇錯(cuò)誤。 ５ .指示劑成微笑符號(hào) （指示劑前沿呈現(xiàn) 向下 的曲線形），由于電泳槽的裝置不合適，尤其是凝膠和玻璃板組成的“三明治”底部有氣泡或
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