疫共沉淀原理及注意事項(xiàng)-在線瀏覽
2025-06-17 02:36本頁面
【正文】 COIP原理圖解 proteinA/G瓊脂糖珠復(fù)合物 ?Protein A是一種金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁蛋白質(zhì)，能特異性地與人和哺乳動物抗體（主要是 IgG）的 Fc區(qū)結(jié)合。 如果用蛋白質(zhì) X的抗體免疫沉淀 X，那么與 X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì) Y也能沉淀下來。 免疫共沉淀 ?（ CoImmunoprecipitation， CoIP） 單系金 一 實(shí)驗(yàn)原理 以（抗體和抗原）之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究（蛋白質(zhì)相互作用）的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整（ 細(xì)胞內(nèi)生理性 ）相互作用的有效方法。 問題：細(xì)胞怎樣保持生理狀態(tài) 不變性？ YX抗 X COIP應(yīng)用與 IP區(qū)別 ?測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合 ?確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔 COIP與 IP只取決于檢測焦點(diǎn)是初級靶分子（抗原）還是次級靶分子（相互作用蛋白） 實(shí)驗(yàn)基本原理 ? ? X的抗體 ? Protein A或 G(于Agarose bead上 ) 若細(xì)胞中有與興趣蛋白結(jié)合的目的蛋白，就可以形成復(fù)合物：“ Y—X—抗 X抗體 —Protein A或G ? 、聚丙烯酰胺凝膠電泳，復(fù)合物又被分開。 ?目前多用 protein A/G預(yù)先結(jié)合在 argarose beads上。 二 COIP特征 優(yōu)點(diǎn) （ 1 相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài) （ 2 蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的，可以避免人為的影響 （ 3 可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物 二 COIP特征 局限性 （ 1 可能檢測不到 低親和力和瞬間 的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用 （ 2 兩種蛋白質(zhì)的結(jié)
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