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正文內(nèi)容

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2025-05-10 13:45本頁面
  

【正文】 配液2: 磷酸氫二鉀溶液 三水合磷酸氫二鉀加去離子水定容至1L。配液4: 1M氫氧化鈉 。配液6: 復(fù)溶工作液用去離子水將2濃縮復(fù)溶液按1:1體積比進(jìn)行稀釋(1份2濃縮復(fù)溶液+1份去離子水)用于提取樣本的復(fù)溶,復(fù)溶工作液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。八、樣本前處理步驟樣本處理前須知處理任何樣本時(shí),都必須注意:(a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。(d)未處理的樣本冷凍保存。(f)稀釋后的衍生化試劑可于4℃保存半年。┅┅加入5ml甲醇水溶液(見配液5),用振蕩器振蕩5min,3000g以上離心10min,去除全部上清液;(本步驟可降低樣本基質(zhì)干擾)┅┅加入4ml的去離子水,用渦旋儀渦動(dòng)溶解, 1M 鹽酸溶液(見配液3)和100ml 衍生化試劑(見配液1),用振蕩器充分振蕩;┅┅在37 oC過夜孵育(大約16h);┅┅分別加入5ml (見配液2)、 1M氫氧化鈉溶液(見配液4)和10ml的乙酸乙酯,用振蕩器劇烈振蕩30s;┅┅3000g以上,室溫(2025 oC/6877℉)離心10min;┅┅取5ml乙酸乙酯相至10ml干燥的玻璃試管中,于50~60℃氮?dú)饬飨麓蹈?;┅┅?ml的正己烷(或正庚烷)用渦旋儀渦動(dòng)30s,再加入(見配液6),用渦旋儀渦動(dòng)1min充分混勻;┅┅3000g以上,室溫(2025 oC/6877℉)離心10min;┅┅除去上層有機(jī)相,取下層水相50181。九、檢測步驟測定前應(yīng)須知:使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫(2025℃)。在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。操作步驟:將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(2025℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。洗滌工作液在使
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