sod和pod酶活性的變化-在線瀏覽
2025-04-10 13:21本頁面
【正文】 ，它是一種藍(lán)色物質(zhì)，在 560nm波長下有最大吸收。通過在反應(yīng)液中加入不同量的 SOD酶液，光照一定時間后測定 560nm波長下各液光密度值，抑制 NBT光還原相對百分率與酶活性在一定范圍內(nèi)呈正比。 三、試劑 1. (PBS， )： A母液 :（ mL）； B母液 :（ mL）； （ ） 的配制： : ，稀釋 2. ：稱取 Met用磷酸緩沖液（ ） 定容至 100ml。 4. 60μM核黃素溶液：稱取 核黃素用磷酸緩沖液定容至 100ml， 避光保存。 【 實驗步驟 】 1. 酶液提取 稱取 （可視情況調(diào)整）樣品（新鮮葉片或根系）洗凈后置于預(yù)冷的研缽中，分三次加入 （ ml、 ml、 ml） 50mmol/L預(yù)冷的磷酸緩沖液（ ）在冰浴上研磨成勻漿，轉(zhuǎn)入離心管中在 4℃ 、 12022g下離心 20min，上清液即為 SOD粗提液。 （ 2）分別取 3ml反應(yīng)混合液和 100μl（可視情況調(diào)整）酶液 于指形管中此即反應(yīng)管；同時做 兩支對照管 ， 其中 1支試管加3ml反應(yīng)混合液和 100μl PBS（不加酶液）作為最大光還原管，另 1支加 3ml反應(yīng)混合液和 100μl PBS同時用錫箔紙包好遮光用于測定時調(diào)零。 【 注意事項 】 1. 酶液提取須在 4℃ 下進行，提取后立即進行測定，冰箱中放幾小時活性也會下降； 2. NBT反應(yīng)液配好后過濾除去不溶物立即使用，若置于冰箱中要避光保存，充分搖勻然后使用。 光照培養(yǎng)箱內(nèi)壁裱糊錫箔紙，使箱內(nèi)均勻光照約達(dá) 40μmolm2s1，同時使照光時間一樣，選擇試管盡量一致，照光結(jié)束后測一個拿一個（最好晚上做）（溫度高時照光時間縮短，溫度低時延長）； 5. 測定活性時加入的酶量，以能抑制反應(yīng)的 50％為佳。） （反應(yīng)液中加酶液與 PBS調(diào)零差異不大，反應(yīng)液調(diào)零與其它兩個則有一定差異。） 6. 測定數(shù)值應(yīng)在 — 。此產(chǎn)物在 470nm處有最大光吸收，故可通過測 470nm下吸光值變化測定過氧化物酶活性。 2. 酶活性測定 （ 1）反應(yīng)混合液的配制：取 100mlPBS（ ， ） 緩沖液于燒杯中，加入 （ 2甲氧基酚）于磁力攪拌
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