【正文】 學(xué)污染 ? 全部：能夠采集到種公畜全部的精液 一、采精前的準備 （一）采精場地 ? 采精要有一定的采精環(huán)境，以便雄性動物建立起鞏固的條件反射，同時防止精液污染。以乳牛的普及率最高，發(fā)展最快，技術(shù)水平較高。 一、人工授精的發(fā)展概況 人工授精的發(fā)展經(jīng)歷下列三個階段 ： ? ： 1780年，意大利生理學(xué)家 Spallanzani，第一次成功地用狗進行了人工授精試驗。第四章 人工授精 目錄 ? 第一節(jié) 概述 ? 第二節(jié) 采精 ? 第三節(jié) 精液品質(zhì)檢查 ? 第四節(jié) 精液的稀釋與保存 ? 第五節(jié) 輸精 ? 第六節(jié) 冷凍精液 第一節(jié) 概述 概念 ? 人工授精是利用器械采集雄性動物的精液。經(jīng)檢查和處理后，再用器械將精液輸入到發(fā)情雌性動物的生殖道內(nèi)，以代替自然交配而繁殖后代的一種技術(shù)。 ? ：上世紀 4060年代，人工授精的應(yīng)用蓬勃發(fā)展成為繁殖改良家畜的重要手段。 ? 3．冷凍精液階段： 50年代英國的 Smith和 Polge研究牛精液的冷凍保存方法，人工授精技術(shù)進入了一個新的發(fā)展階段。采精場地應(yīng)該寬敞、平坦、安靜、清潔，場內(nèi)設(shè)有采精架以保定臺畜，或設(shè)立假臺畜，供公畜爬跨進行采精，采精場應(yīng)與人工授精操作室和公畜舍相連。 ? 公豬采精室 （二）臺畜的準備 ? 臺畜有真假臺畜之分 ? 真臺畜是指使用與公畜同種的母畜、閹畜或另一頭種公畜作臺畜。選發(fā)情的母畜比較理想，經(jīng)過訓(xùn)練的公、母畜也可作臺畜。 （三）調(diào)教種公畜爬跨假臺畜 ? 利用假臺畜采精，要事先對種公畜進行調(diào)教，使其建立條件反射。 公畜調(diào)教時應(yīng)注意的事項 ? ，要反復(fù)進行訓(xùn)練，耐心誘導(dǎo)，切勿施用強迫、恐嚇、抽打等不良剌激，以防止性抑制而給調(diào)教造成困難； ； ，早上精力充沛，性欲盛； 、地點要固定，每次調(diào)教時間不宜長； (三 )器械準備 ? 采精所需要的器械要事先準備好，力求清潔無菌，在使用之前要嚴格消毒， 每次使用后必須洗刷干凈。 這和精液的質(zhì)量和數(shù)量都有密切的關(guān)系。 ? 在采精前，需以不同誘情方法使公畜有充分的性興奮和性欲，一般采取讓公畜在臺畜附近停留片刻，進行幾次假爬跨。 ? 假陰道法適用于各種家畜和部分小動物，手握法是當(dāng)前公豬采精普遍應(yīng)用的方法，按摩法主要用于禽類和犬類，電剌激法主要用于野生動物的采精。 ? ? 假陰道是一筒狀結(jié)構(gòu)，主要由外殼、內(nèi)胎、集精杯及附件組成。此外，還有固定內(nèi)胎的膠圈，保定集精杯用的三角保定帶，充氣用的活塞和雙聯(lián)球等一些附件。 ? 假陰道應(yīng)具備五個條件： 1)適宜溫度：采精時假陰道內(nèi)腔溫度應(yīng)保持在 3840℃ ，集精杯也應(yīng)保持 3435℃ 。 3)適當(dāng)潤滑度：涂抹潤滑劑的部位是假陰道前段 1/31/2處到外口周圍，但涂布不可過長過多。 5)無破損漏洞：假陰道不得漏水或漏氣。是目前廣泛使用的采集的一種方法。 ? 待陰莖充分勃起時，順勢牽引向前，就能導(dǎo)致公豬射精。 ? 分段采精：棄掉含副性腺分泌物多、精子較少、精液清亮白色的第一段和精液較稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液濃、精子多、呈乳白色的第二段。適用于各種動物。 ? 電剌激采精應(yīng)將公畜以站立或側(cè)臥姿勢保定。然后調(diào)節(jié)控制器，選擇好頻率，開通電源。 三、采精頻率 ? 采精頻率是指第周對雄性動物的采精次數(shù)。 ? 牛：每周 2天采精，當(dāng)日采 2次 ? 豬：隔日一次，最好 3天一次 ? 羊：每周 3天，當(dāng)日采 2次。 云霧狀的明顯程度代表高濃度的精液中精子活力的高低。 ? 取 25ul稀釋后的精液 ,將吸咀放于蓋玻片與計數(shù)板的接縫處。 注意：讓稀釋后的精液通過毛細作用自行吸入！ 用吸管稀釋后精液注入計數(shù)室 共有兩個對稱的計數(shù)室 用移液器注入精液 精子計數(shù) ? 將 計數(shù)板固定在顯微鏡的推進器內(nèi)，用 100倍放大找到計數(shù)室，再用 400倍找到計數(shù)室的第一個中方格。 進行精子計數(shù)的中方格數(shù)可以是四角一中心共 5個中方格 也可以是從左角到右下角五個中方格 以圖示次序計數(shù)，精子的頭部為準，依數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左右不數(shù)右的原則進行計數(shù)格線上的精子。 ? 美蘭、純蘭或紅墨水。右手拿一載玻片或蓋玻片，使其與左手拿的載玻片呈向右的 45度角，并使其接觸面在精液滴的左側(cè)。抹片后，使其自然風(fēng)干。 染色 ? 將載玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上%的龍膽紫或其它染色劑 510滴， 5分鐘后，用洗瓶或自來水輕輕沖去染色劑，甩去水分涼干。 畸形率種類 ? 頭部膨大、頭部小于正常、雙頭、頭部不完整 ? 尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、雙尾、斷尾 ? 有近端原生質(zhì)小滴 畸形精子 視野中的畸形精子 雙頭和雙尾精子 第四節(jié) 精液的稀釋 一、精液稀釋的目的 ? 精液稀釋是向精淮中加入適宜于精子存活的稀釋液。 二、精液稀釋液的成分及作用 ? 1．營養(yǎng)物質(zhì) ? 2．保護性物質(zhì) ? 1)緩沖劑 ? 2)防冷抗凍物質(zhì) ? 3)抗菌物質(zhì) ? ? ? 1)酶類 ? 2)激素類 ? 3)維生素類 ? 4)有機酸、二氧化碳等 二、精液稀釋液的成分及作用 ? 1．營養(yǎng)物質(zhì) ? 2．保護性物質(zhì) ? 1)緩沖劑 ? 2)防冷抗凍物質(zhì) ? 3)抗菌物質(zhì) ? ? ? 1)酶類 ? 2)激素類 ? 3)維生素類 ? 4)有機酸、二氧化碳等 三、稀釋液的配制方法 ? 用品的清洗與消毒 ? 藥品的稱量、水的量取 ? 基礎(chǔ)液的配制：溶解 — 過濾 — 消毒（水浴或直接加熱） — 放涼 ? 稀釋液的配制：基礎(chǔ)液按比例加入抗生素、卵黃 ? Ⅰ 液：按比例加入卵黃和抗生素的稀釋液 ? Ⅱ 液：按比例加入抗凍劑 四、稀釋倍數(shù)和稀釋方法 1．稀釋倍數(shù)確定 ? 精液適宜稀釋倍數(shù)與家畜種類和稀釋液種類有關(guān)。一般牛 46倍，豬 13倍，免 35倍。因此所謂的 N倍稀釋，實際上是 1:(N1)， 但這種方法有利于進行相關(guān)計算。 ? 第一次稀釋倍數(shù)的計算：應(yīng)為最終稀釋后體積的 50%。最后一次稀釋時， 1:1稀釋，可以保證稀釋后防凍劑的濃度為 Ⅱ 液的 1半。 第四節(jié) 精液保存 一、精液的保存方法 ? 現(xiàn)行精液保存的方法按保存的溫度分： ? 常溫保存（ 1525℃ ） ? 低溫保存（ 05℃ ） ? 冷凍保存（ 79 196℃ ）三種。 二、低溫保存 ? 原理：低溫能抑制精子的代謝和微生物的繁殖，但迅速降溫會使精子遭受冷休克，加低溫保護劑和緩慢降溫并保持較低溫度，可使精液保存數(shù)天。 ? 保存溫度： 25℃ 低溫保存的關(guān)鍵性環(huán)節(jié) 含卵磷脂、抗生素的稀釋液 等溫稀釋 緩慢降溫 保持恒溫（ 24 ℃ ） 在保質(zhì)期內(nèi)使用，用前進行活力檢查 二、常溫保存 ? 原理：精子自身所產(chǎn)生的酸性物質(zhì)和稀釋液中的酸性物質(zhì)使精液的 PH降低到一定的水平，能夠抑制精子的代謝，從而延長精子的存活時間。 ? 稀釋液成分：抗生素、單糖、緩沖劑 ? 保存溫度： 1525℃ 常溫保存的關(guān)鍵 含緩沖劑、營養(yǎng)、抗生素的稀釋液 等溫稀釋及緩慢降