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2025-03-04 07:41本頁面
【正文】 和組分保持在原來的位置上，同時盡量保持原來的性質，如抗原性等。 3/4/12 細胞生物學 研究方法 23 ?（ 2）包埋： ?使樣品中各種細微結構在切片過程中都得到均勻良好的支撐； ?使切成的超薄切片仍能保持連續(xù)完整并且有足夠的強度； ?能耐受干燥以及觀察時的電子轟擊、高溫和真空揮發(fā)。 ? 目前常用的包埋劑是環(huán)氧樹脂。 切片厚度通常是40～ 50 nm。 ? 切片須撈在覆有支持膜 （ 如透明塑膠膜 ） 的載網 （ 銅網或鎳網 ） 上才能在電鏡下觀察 。它不能像光鏡切片染色可獲得彩色圖像。 3/4/12 細胞生物學 研究方法 27 AP: appressorium I S: infection sac SH: subcuticular hyphae infection behavior in pectin layers in scabinoculated leaves 3/4/12 細胞生物學 研究方法 31 技術（ scanning electron microscope，SEM） ? 掃描電鏡的電子槍發(fā)射出的電子束被電磁透鏡匯聚成極細的 電子“探針” ，在樣品表面進行“掃描”， ? 電子束可激發(fā)樣品表面放出二次電子（ 同時也有一些其他信號 ）。 ? 二次電子由探測器收集，并在那里被閃爍器轉變成光信號，再經光電倍增管和放大器又轉變成電壓信號來控制熒光屏上電子束的強度。 3/4/12 細胞生物學 研究方法 32 3/4/12 細胞生物學 研究方法 33 3/4/12 細胞生物學 研究方法 35 第二節(jié) 細胞組分的分析方法 ? 一、用超速離心技術分離細胞器與生物大分子及其復合物 ? 二、 細胞內核酸、蛋白質、酶、糖類與脂質等的顯示方法 ? 三、 特異蛋白抗原的定位與定性 ? 四、 細胞內特異核酸序列的定位與定性 ? 五、 利用放射性標記技術研究生物大分子在細胞內的合成動態(tài) ? 六、 定量細胞化學分析技術 3/4/12 細胞生物學 研究方法 36 一、用超速離心技術分離細胞器與生物大分子及其復合物 ? 用低滲、超聲破碎或研磨等方法可使細胞膜破損，形成細胞核、線粒體、葉綠體、內質網、高爾基體、溶酶體等細胞器和細胞組分的混合勻漿。 3/4/12 細胞生物學 研究方法 37 ? 密度梯度離心 是將要分離的細胞組分小心地鋪放在含有密度逐漸增加的、形成密度梯度的、高溶解性的惰性物質（如蔗糖）溶液的表面。 ? 各顆粒、組分的沉降速率與它們的形狀和大小有關，通常以沉降系數(shù)（ S值）表示。 3/4/12 細胞生物學 研究方法 38 二、細胞內核酸、蛋白質、酶、糖類與脂質等的顯示方法 (細胞化學的顯示方法 ) ?利用一些顯色劑與被檢測物質中一些特殊基團特異性結合的特征，通過顯色劑在細胞中的定位及顏色的深淺來判斷某種物質在細胞中的分布和含量。 ? PAS反應則可確定多糖的存在 。四氧化鋨和蘇丹 III可以證明脂肪滴的存在。 ? AgNO3可特異地顯示 rDNA的存在； ? 在進行細胞中某種酶的定性研究時，由于大多數(shù)固定劑對酶都有鈍化作用，樣品制備或采用冷凍切片，或以冷丙酮、甲醛進行短期固定，以盡量保持酶的活性 . 3/4/12 細胞生物學 研究方法 40 3/4/12 細胞生物學 研究方法 41 Identification of H2O2 generation by using energy filtering electron microscopy(EFEM) TEM EFEM:Ce mapping EFEM:O mapping EFEM:P mapping appressorium Peration peg H2O2 + Ce3+ Ce（ OH)2OOH Ce（ OH
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