細胞生物學研ppt課件-文庫吧資料
2025-01-21 07:41本頁面
【正文】 鏡筒及記錄系統(tǒng)內的高真空； ? ④ 記錄系統(tǒng)：電子成像須通過熒光屏顯示用于觀察，或用感光膠片記錄下來。由高頻電流加熱鎢絲發(fā)出電子，經高電壓使電子加速，經過聚光鏡匯聚成電子束 ； ? ② 成像系統(tǒng)：包括物鏡、中間鏡與投影鏡等。 ? 此放大倍數稱為 有效放大倍數 ；如繼續(xù)用光學手段放大也不會得到任何有意義的信息，因此稱之為“空放大”。 3/4/12 細胞生物學 研究方法 ? 2．電子顯微鏡的分辨本領與有效放大倍數 ? 人眼的分辨率一般為 mm，光學顯微鏡的分辨率約為 ，其放大倍數為 mm／ ，即1000倍。由于光源的不同，又決定了電鏡與光鏡的一系列不同點： ? 用電磁透鏡聚焦；電鏡鏡筒中要求高真空；圖像需用熒光屏來顯示或感光膠片作記錄。將改變焦點獲得一系列細胞不同切面上的圖像，經疊加后便可重構出樣品的三維結構。 ? 激光共焦點掃描顯微鏡 成像異常清晰 ，分辨率可以比普通熒光顯微鏡的分辨率提高 ～ 。兩種濾光片必須選擇配合使用。熒光具有專一性，一般都比激發(fā)光弱，為能觀察到專一的熒光，在物鏡后面需加阻斷 (或壓制 )濾光片。 3/4/12 細胞生物學 研究方法 熒光光源 —— 般采用超高壓汞燈 (50一 200W)，它可發(fā)出各種波長的光，但每種熒光物質都有一個產生最強熒光的激發(fā)光波長，所以需加用激發(fā)濾片 (一般有紫外、紫色、藍色和綠色激發(fā)濾片 )，僅使一定波長的激發(fā)光透過照射到標本上，而將其他光都吸收掉。 ? 熒光顯微鏡技術包括 免疫熒光技術 和熒光素直接標記技術。 10 3/4/12 細胞生物學 研究方法 11 （二） 熒光顯微鏡 技術 ? 熒光顯微鏡技術是以紫外線為光源，使被檢物發(fā)出熒光然后在顯微鏡下觀察其形狀極其所在位置的鏡檢術。 微分干涉顯微鏡更適于研究活細胞中較大的細胞器。這大大便利了活體細胞的觀察，因此相差鏡檢法廣泛應用于倒置顯微鏡。我們知道，人眼只能區(qū)分光波的波長（顏色）和振幅（亮度），對于無色通明的生物標本，當光線通過時，波長和振幅變化不大，在明場觀察時很難觀察到標本。 相差顯微鏡的物鏡后裝有一塊“相差板”，偏轉（有光程差）的光線分別通過相差板的不同區(qū)域，由于相差板上部分區(qū)域有吸光物質，所以又使兩組光線之間增添了新的光程差，從而對樣品不同密度造成的相位差起“夸大”作用。密度大則光的滯留時間長，密度小則滯留時間短。 ?這樣便能形成足夠的反差或產生不同波長的光譜以區(qū)分該種細胞組分。 3/4/12 細胞生物學 研究方法 7 ?普通光鏡樣品的制備： ?樣品經過固定劑（如甲醛等）固定后，包埋到包埋劑（如石蠟等）中，然后切成厚約 5um的薄切片。若在油鏡下， N可達 ， D則可達 ，所以普通光鏡的最大分辨率是 um。它們之間的關系是： ? D＝ ? 通常 α最大值可達 140176。人眼的分辨力約為 100200μm。 3/4/12 細胞生物學 研究方法 ? （一）普通復式 光學顯微鏡 技術 5 ?分辨率 (resolving power):指區(qū)分開兩個質點間的最小距離。1 第三章 細胞生物學研究方法 ? 第一節(jié) 細胞形態(tài)結構的觀察方法 ? 第二節(jié) 細胞組分的分析方法 ? 第三節(jié) 細胞培養(yǎng)、細胞工程與顯微操作技術 3/4/12 細胞生物學 研究方法 2 第一節(jié) 細胞形態(tài)結構的觀察方法 ? 一、光學顯微鏡技術 ? 二、 電子顯微鏡技術 ? 三、 掃描隧道顯微鏡 3/4/12 細胞生物學 研究方法 3 一、光學顯微鏡技術 3/4/12 細胞生物學 研究方法 4 ? ① 光學放大系統(tǒng)，為兩組玻璃透鏡：目鏡與物鏡； ? ② 照明系統(tǒng)：光源、折光鏡和聚光鏡，有時另加各種濾光片以控制光的波長范圍； ? ③ 機械和支架系統(tǒng)，主要是保證光學系統(tǒng)的準確配制和靈活調控
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