微生物遺傳變異與菌種保藏增加內(nèi)容-在線(xiàn)瀏覽
2025-03-03 00:15本頁(yè)面
【正文】 ? 斜面 /肉湯 ? 培養(yǎng)單孢子 /單細(xì)胞懸液 ? 誘變劑處理 ? 計(jì)算存活率 ?平板分離 ? 觀(guān)察形態(tài)變異，挑單菌落 ? 移至斜面 ? 初篩 ? 復(fù)篩 ? 小試 ? 良種保藏 ? 中試 4 誘變的主要環(huán)節(jié) （ 1）誘變劑的選擇 （ 2）出發(fā)菌株的選擇 （ 3） 單孢子或單細(xì)胞懸液的制備 （ 4）設(shè)計(jì)和采用效率高的篩選方案和方法 （ 1）誘變劑的選擇： 1）了解誘變劑的性質(zhì)、作用機(jī)理和使用方法。 3）處理劑量：測(cè)致死率。 （ 2）出發(fā)菌株： 育種的原始菌種應(yīng)具備： 1）對(duì)誘變劑的敏感性高； 2）生產(chǎn)中選育過(guò)的自發(fā)變異菌株； 3）本身具有一些有利性狀； 4）對(duì)代謝產(chǎn)物有一定積累； 5）已經(jīng)發(fā)生過(guò)某些變異。 2）制備： 物理誘變劑 —— 生理鹽水（ %NaCl) 化學(xué)誘變劑 —— 緩沖液。 加０ .3%吐溫 80（表面活性劑），用無(wú)菌脫脂 棉過(guò)濾。 方法 梯度平板法（抗性菌株） 紙片法（抗性菌株） 透明圈法（淀粉酶產(chǎn)生菌株等） 變色圈法（氨基酸生產(chǎn)菌株） 2）復(fù)篩 ：（見(jiàn) P250） 較精確的生物化學(xué)分析方法 — 做搖瓶測(cè)定 三、營(yíng)養(yǎng)缺陷型的篩選 （一）概念 （二）篩選方法 （一）概念 1. 三種遺傳型個(gè)體 篩選用的培養(yǎng)基 1. 三種遺傳型個(gè)體 （ 1）營(yíng)養(yǎng)缺陷型（ auxotroph） ： 經(jīng)誘變產(chǎn)生的一些合成能力出現(xiàn)缺陷，而必須在培養(yǎng)基內(nèi)加入相應(yīng)有機(jī)養(yǎng)分才能正常生長(zhǎng)的變異菌株。 bio 。 如： lys+。 （ 3） 原養(yǎng)型 (prototroph) ： 指 auxo突變菌株回復(fù)突變或重組后產(chǎn)生的菌株，與野生型的表型相同。 2）完全培養(yǎng)基（ plete medium,CM） [+]： 滿(mǎn)足一切 auxo生長(zhǎng)的天然或半組合培養(yǎng)基。 （二）篩選方法 誘變處理 auxo的濃縮 auxo的檢出 auxo的鑒定 auxo的應(yīng)用 1. 誘變處理（同前 ) auxo的篩選程序： 細(xì)菌培養(yǎng) ? 離心洗滌 ? 誘變處理 ? CM后培養(yǎng) ? 洗滌 ? MM加 PN ? 涂布于 CM平板 ? 影印培養(yǎng) ? 挑取 ? 鑒定 ? 菌種保存。 2）方法：菌培養(yǎng)在含抗生素的 MM基中。 （ 3）差別殺菌法： 基本培養(yǎng)基上只有野生型生長(zhǎng)，加熱殺 死野生型營(yíng)養(yǎng)體，保留 auxo芽孢。 3. auxo的檢出 （ 1）逐個(gè)檢出法 （ 2）影印平板培養(yǎng)法 （ 3）限量補(bǔ)充法 （在 mm中
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