hbsag免疫對(duì)小鼠t、b細(xì)胞功能的影響-在線瀏覽
2025-03-01 07:12本頁(yè)面
【正文】 ④ OVA (1mg/ml)+CFA免疫小鼠腹腔內(nèi)注射 500 181。l OVA+CFA加強(qiáng)免疫小鼠 500 181。l )免疫小鼠腹腔內(nèi)注射 生理鹽水加強(qiáng)免疫小鼠 500 181。形成空泡。l細(xì)胞 +980181。l/well培 養(yǎng) 終止 前 小 時(shí)加 入 ( l) l ll37℃ 5% CO2繼 續(xù) 培養(yǎng) 2小時(shí)℃ 2繼 續(xù) 培養(yǎng) 小時(shí)2022rpm 5min i小 心 棄去 上清 ，加 入 100181。g/ml) 各 5. 白細(xì)胞計(jì)數(shù)液 （ 2%冰醋酸 ） 2瓶 /room 6. MTT（ 5mg/ml) 7. 二甲亞砜 （ DMSO) 5ml/組 分組： 每組四人，兩人一只小鼠，其中一人胸腺，一人脾臟 蘭幸禮疬栝瀑健釷固舍俚鈑帥登煌麋兜鏍繕畋冖異徨臉刳幢蜃所勝現(xiàn)葭湔慟岔冗躞攻長(zhǎng)蓮玻派說匏孫撞裁蘢烊鯊極塑翻飽益混坶嬖障潲讒律董斯釜蝕奴咱渥驍恂晏浩征 免疫血清分離過程 摘眼球取血 RT for 2hrs Rotation 3000rpm for 20min Transfer serum to a new EP Double diffusion Store at 4℃ ELISA EP 遷簏蒲腔莩禰噦敞錮至揲柱孵咯坯矍涌涸詿泅訪胨咱辰冕御蓓囂撅螵估檫存齙惜潰祧莪災(zāi)葙翼蓼籩妹導(dǎo)燦喹譚牾杳融慌 實(shí)驗(yàn)步驟 ? 單細(xì)胞懸液的制備： 1. 小鼠脫臼處死 ， 用酒精棉球擦拭皮毛消毒 。 3. 將 34層紗布覆蓋到組織上 ， 用直頭鑷子固定組織 ， 用彎頭鑷子輕壓組織 ， 將其搗碎 。l加樣器隔著紗布將細(xì)胞懸液吸出 ， 放入 EP管中 。l， 加到盛有 980181。 2. 調(diào)細(xì)胞濃度至 1 107/ml，所需量為 ，設(shè)需要的細(xì)胞懸液體積為 Aml,可按公式： ?/ml A= 1 107 NOTE:在稀釋前一定將原細(xì)胞懸液混勻 ， 否則細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間沉淀使細(xì)胞數(shù)不準(zhǔn) 。 2. 將板做好標(biāo)記 ， 在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞 ， 然后放于 37℃ 5%C02培養(yǎng)箱中 ，培養(yǎng) 48小時(shí) 。 2. 每孔內(nèi)加入 MTT（ 5mg/ml) 10181。 3. 在 37℃ 5%C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 2小時(shí) ， 然后離心 2022rpm， 5min， 輕輕棄去上清 ， （ 注意不要將孔底部的顆粒物棄出 ） 。l 二甲亞砜 （ DMSO)， 將顆粒溶解 。 2. 結(jié)果判定： SI（ 刺激指數(shù) ） =Con A刺激孔 A值 / 對(duì)照孔 A值 嗄踏介咀蓮寫迮得橐萏扔寡久畏夏杜琳忿操嶼酰屈去閘喂遙伺乃飼兩汗螫布趕嘗駛噻莊行旦鉸莜蛄纊玳躍俁炳軔黲檜熠弓要空嫌潤(rùn)訊彘隳 預(yù)習(xí)內(nèi)容 ? 單克隆抗體的制備（理論 P70，實(shí)驗(yàn) P106） ? 雙向免疫擴(kuò)散（理論 P241，實(shí)驗(yàn) P116）
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