菌種操作規(guī)程ppt課件-在線瀏覽
2025-02-27 10:18本頁面
【正文】 將上層混濁液倒出靜置（下層成塊的土棄之）使土沉淀，倒出上層清液后，再加適量水攪拌，沉淀。沉淀出來的土烘干，碾碎，經(jīng) 80目篩過濾后備用 砂土管的制備 方法 ? 將處理好的沙和土按 2： 1(或其它比例 )混合均勻，分裝于 10mm 100mm硬質玻璃試管中，每支砂土管裝量為 ，用新做的棉塞塞好，并外包牛皮紙，123～ 125℃ 濕熱滅菌 30min，間歇滅菌 6次，每隔24小時一次，最后一次消好后置 135～ 145℃ 烘箱干烘一小時，然后進行抽樣無菌檢查，每 10支砂管抽1支，將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中， 36～ 38℃ 培養(yǎng) 48小時，若仍有雜菌，則需要全部重新滅菌，再作無菌試驗，直至證明無菌，方可備用。斜面孢子一般培養(yǎng) 7～ 9天，孢子成熟。發(fā)酵搖瓶試驗生產(chǎn)能力符合要求。 79天 11天 斜面孢子 搖瓶發(fā)酵 放瓶 ? 指標要求： DW≥（對照） 94%； TL≥（對照） 94%；AA≥ 45%，指標符合要求，方可使用，并填寫 《 搖瓶考察配制記錄 》 和 《 原材料搖瓶考察 》 。 ? 將馬鈴薯碎塊放在鋁鍋內，加入一定量的蒸餾水，置于電爐上煮沸 30分鐘，邊煮邊攪拌，防止馬鈴薯結底。 ? 將定容后的培養(yǎng)液放置電爐上加熱，將稱量好的瓊脂，邊攪拌邊加入，待瓊脂全部融化后，取下培養(yǎng)基進行分裝。 ? 將準備好的不銹鋼筐放在消毒車上推入消毒柜內，按蒸汽消毒柜使用方法用蒸汽消毒， 119～ 121℃ ，保溫 30分鐘，接種用具保溫 60分鐘。 母斜面接種及培養(yǎng) ? 母斜面接種由兩人操作，一人為主操作安瓿管，一人為輔操作大試管。 ? 用毛細吸管吸取 ，攪拌均勻，然后吸取 ～ ，每支安瓿管接 3支大試管。 ? 將接種后的母斜面放置培養(yǎng)間，溫度 28℃ ，濕度 50～70%，培養(yǎng) 7～ 9天，觀察生長情況，并填寫 《 母斜面生長記錄 》 和 《 溫度濕度原始記錄 》 。 子斜面接種及培養(yǎng) ? 子斜面接種由兩人操作，一人為主操作，一人為輔操作。主操作將母斜面和子斜面的棉塞逐個打開，并在酒精燈火焰上燒瓶口至無水霧為止。一支母斜面接種一般接1～ 2支子斜面。 ? 子斜面生長成熟后，取下，無菌試驗正常則用 %新潔而滅溶液滅菌后再用牛皮紙扎口后放置冰箱低溫保藏備用，保藏期不超過 15天；無菌試驗不正常則按廢樣液處理辦法處理并填寫 《 廢樣液處理記錄 》 。 ? 定容后用 10N的 NaOH調節(jié) PH至 ～ ，按每瓶100mL的量分裝于 500mL直口三角瓶內，塞好棉塞，用雙層紗布扎口后，再用牛皮紙扎口，放置在不銹鋼筐中，蓋上牛皮紙，準備消毒。 母瓶接種及培養(yǎng) ? 母瓶接種由兩人操作，一人為主操作子斜面，一人為輔操作母瓶，主操作用接種鏟取孢子于茄氏瓶中，一支鏟子只能用于一只子斜面，將 3～ 5支子斜面的孢子接入裝有 80mL無菌水的帶玻璃珠三角瓶中，放置搖床上 180～ 220轉 /分鐘搖 10～ 15分鐘制成孢懸液 。 1℃ 培養(yǎng) 44～ 50小時左右，待菌絲長好后取下，準備并瓶。 ? 母瓶進罐前，要在無菌條件下并瓶，一般情況下 10～ 12瓶合并為一個種瓶，約 1000～ 200mL。 ? 并瓶后，每五個三角瓶殘液并為一瓶，接種于肉湯培養(yǎng)基中做無菌試驗；在接種小罐后將種瓶中的殘液接種于肉湯培養(yǎng)基中做無菌試驗，將肉湯培養(yǎng)基放置 36～ 38℃ 培養(yǎng)間培養(yǎng)，觀察變化情況，作為一種無菌監(jiān)測，為事后分析作準備。 母瓶菌絲質量標準 ? 外觀 淺黃色至棕黃色、刺球狀或花狀。 ? 菌絲階段 Ⅱ ～ Ⅲ 階段。 ? 鏡檢 沒有污染雜菌。 ? 接到消毒人員通知后接種。 ? 接種人員穿好衣服后，一人將浸泡工業(yè)酒精的火焰圈套在小罐接種口上
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