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2024-12-17 09:37本頁(yè)面
【正文】 毛細(xì)管兩端加上直流電壓，樣 品中不同大小的 DNA片段開(kāi)始從負(fù)極向正極移動(dòng)， 移動(dòng)的速度受到片段自身大小影響，片斷越短移動(dòng)得越快。 不同的樣品制備方法選用不同的熒光素和試劑的組合，樣品制備可在 96孔或 384孔板進(jìn)行 ： 操作人員根據(jù)所使用的標(biāo)記方法、電泳的毛細(xì)管長(zhǎng)度、電泳膠的種類(lèi)等，在數(shù)據(jù)采集 (Data Collection)軟件中選擇正確的運(yùn)行模塊和分析模塊。 AppliedBiosystems 3130簡(jiǎn)明使用手冊(cè) 第 1 頁(yè) 共 32 頁(yè) AppliedBiosystems 3130/3130XL 簡(jiǎn)明使用手冊(cè) DATA COLLECTION 美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司中國(guó)公司 AppliedBiosystems 3130簡(jiǎn)明使用手冊(cè) 第 2 頁(yè) 共 32 頁(yè) 否 否 否 是 是 是 是 儀器準(zhǔn)備 P7 需要空間定位？ 運(yùn)行測(cè)序樣品？ 進(jìn)行空間定位 P11 進(jìn)行光譜校正 P12 需要光譜校正？ 運(yùn)行片斷 分析樣品？ 上機(jī)運(yùn)行 P29 編制測(cè)序樣品板文件 P20 編制片斷分析樣品板文件 P27 結(jié)果分析 ，參考相關(guān)手冊(cè) AppliedBiosystems 3130簡(jiǎn)明使用手冊(cè) 第 3 頁(yè) 共 32 頁(yè) 一． DNA 測(cè)序或片段分析的流程 ： ： 樣品制備即是在 DNA片斷上用化學(xué)的方法標(biāo)記熒光素 。 標(biāo)記上熒光素后就可以對(duì) DNA片斷進(jìn)行檢測(cè)和確認(rèn)了，一般每一 DNA分子標(biāo)記一個(gè)熒光素分子，最多有五種熒光素可用于 DNA樣 品的標(biāo)記。 ： 操作人員把樣品板放到儀器上并開(kāi)始運(yùn)行，儀器便會(huì)根據(jù)設(shè)定好的順序，用相應(yīng)的電泳程序分析樣品板上的樣品。電泳的結(jié)果是使長(zhǎng)度不同的 帶電 DNA 片斷互相分離，并且按片段的長(zhǎng)短的順序通過(guò)檢測(cè)窗口，產(chǎn)生信號(hào)，短片段先到達(dá)檢測(cè)窗口。 AppliedBiosystems 3130簡(jiǎn)明使用手冊(cè) 第 4 頁(yè) 共 32 頁(yè) ： CCD檢測(cè)器把檢測(cè)到的熒光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，并把它傳送給安裝了 Data Collection軟件的計(jì)算機(jī)工站。 AppliedBiosystems 3130簡(jiǎn)明使用手冊(cè) 第 5 頁(yè) 共 32 頁(yè) ： 接著 ， 工作站會(huì)自動(dòng)地從數(shù)據(jù)庫(kù)中提取這些數(shù)據(jù)，并根據(jù)不同的運(yùn)行模式，完成對(duì)樣品 DNA的堿基序列或片斷信息的分析，然后把分析完成后的結(jié)果數(shù)據(jù)以樣品文件的形式保存于計(jì)算機(jī)的硬盤(pán)中。 電泳信號(hào)圖的 X軸表示時(shí)間， Y軸表示相對(duì)熒光強(qiáng)度，圖上不同顏色的信號(hào)線代表了樣品制備時(shí)所使用的不同的熒光素 （對(duì)于測(cè)序結(jié)果，每種顏色代表一種堿基）， 圖中的每個(gè)峰代表一個(gè) DNA片斷。 ? 開(kāi)啟 UPS 電源 ， 確保 UPS 處于電池供電狀態(tài)， 穩(wěn)定 5 分鐘； ? 打開(kāi)顯示器和電腦的電源開(kāi)關(guān)，登錄 到 WIN XP 桌面 ； ? 檢查確保儀器的 加熱爐門(mén) 和 儀器 左右 前門(mén) ； ? 打開(kāi)儀器電源開(kāi)關(guān)，儀器 進(jìn)行一系列的 初始化后 ， 綠色狀態(tài)燈亮 ，儀器啟動(dòng)完成。 ? 等待 Service Console窗口中的指示燈全部變成綠色后， DC軟件 的界面 打開(kāi) ，過(guò)程如下： AppliedBiosystems 3130簡(jiǎn)明使用手冊(cè) 第 9 頁(yè) 共 32 頁(yè) 沖洗 Water Seal： 在 20ml的注射器里裝上 20ml去離子水（水溫 40186。 安裝毛細(xì)管 ： ? 在 DC軟件中，選擇 GA Instrumentsga3130 instrument name. ? 在工具欄中，選擇 Wizards Install Array Wizard. ? 按照向?qū)崾静僮? ? 安裝 好 毛細(xì)管 以后運(yùn)行毛細(xì)管空間定位程序 spatial calibration 注意： ? 不要拉扯毛細(xì)管 ? 使用原包裝來(lái)儲(chǔ)存 使用過(guò)的 毛細(xì)管，其末端分別放在緩沖液槽和小玻璃瓶中 ? 安裝毛細(xì)管時(shí)要戴無(wú)粉手套 更換新的 膠 ： AppliedBiosystems 3130簡(jiǎn)明使用手冊(cè) 第 10 頁(yè) 共 32 頁(yè) ? 在 DC軟件中，選擇 GA Instruments ga3130 instrument name . ? 在工具欄中，選擇 Wizards,然后選擇 Replenish Polymer Wizard進(jìn)行 同種類(lèi)型的膠的更換，選擇Change Polymer Type Wizard進(jìn)行不同類(lèi)型 的膠的更換。 準(zhǔn)備緩沖液 ： ? 把 5ml 10X緩沖液與 45ml MilliQ水混合成 1X緩沖液； ? 按下 Tray按鈕，待自動(dòng)進(jìn)樣器停止移動(dòng)后開(kāi)門(mén)； ? 取下緩沖液槽，水槽和廢液槽，拆開(kāi)并用水清洗； ? 晾干，在各槽中加入相應(yīng)的溶液； ? 擦干各槽后將其放回儀器 相應(yīng)的位置上 ； ? 取 下陽(yáng)極緩沖液杯，倒空后先用水淋洗再用 1X緩沖液洗； ? 加入緩沖液； ? 將陽(yáng)極緩沖液杯裝回原處。 ( Spatial Calibration ): 什么是毛細(xì)管空間定位？ 毛細(xì)管空間定位程序把每道毛細(xì)管的熒光信號(hào)落在 CCD上的位置標(biāo)記出來(lái)，從而使 DC軟件能夠找到這些信號(hào)。 如何作毛細(xì)管空間定位？ ? 選擇 GA Instruments ga3130 instrument name Spatial Run Scheduler.
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