chapter親和層析ppt課件-在線瀏覽
2025-02-23 13:27本頁面
【正文】 配基時，由于 空間位阻作用 ，難于與配對的大分子親和吻合，常在母體與配基之間引入適當長度的 連接臂 。 ? 即通過某種方法 (如溴化氰法、疊氮法等 )，使母體引入某一 活潑的基團 ，才能以共價鍵與配基偶聯(lián)。商品名為偶聯(lián)凝膠 。spac er a rmsSm all l igand (1,000 )R isk of ster ic inter ference w it h b inding be twee n m atri x and target m ole culeO ft en n eed sp acer armbu t w atch o ut for ad so rption to th e sp acer!S pace r ar m 親和色譜原理 圖 親和色譜操作示意圖 把具有特異 親和力的一對分子的任何一方作為配基，在不 傷害其生物功能 的情況下，與不溶性載體結合，使之固定化，裝入層析柱中（如圖 a）。 這時，混合液中只有能與配基發(fā)生結合反應形成絡合物的目的物質(zhì)（圖中 不能發(fā)生結合反應的雜質(zhì)分子（圖 △分子）直接流出。 解吸 親和色譜原理 一般情況下 ， 需根據(jù)目標產(chǎn)物選擇合適的親和配基 來修飾固體粒子 ， 以制備所需的 親和吸附介質(zhì)（ 固定相 ） 。 親和色譜介質(zhì) 作為載體的物質(zhì)應具有（ 6點）： ①不溶性的 多孔網(wǎng)狀 結構，滲透性好； ②物理和化學 穩(wěn)定性高 ，有較高的機械強度，使用壽命長； ③具有 親水性 ，無非特異性吸附； ④ 含有 可活化的反應基團 ， 利于親和配基的固定化； ⑤ 抗微生物和酶的侵蝕； ⑥ 最好為粒徑均一的球形粒子 。 可被應用的基質(zhì)（載體 ） ： （按性能優(yōu)劣排序） 瓊脂糖凝膠、聚丙稀酰胺凝膠、葡聚糖凝膠、纖維素。 如抑制劑，底物，抗體，輔酶等。 2）具有與基質(zhì) 共價結合 的基團。 如果在配基與載體之間連接間隔臂，可以增大配基與載體之間的距離，使其與生物大分子發(fā)生有效的親和結合。 常用：溴化氰（ CNBr）、環(huán)氧氯丙烷、 1,4丁二醚、戊二醛、高碘酸鹽、苯醌等。 如用 CNBr 作用于葡聚糖和瓊脂糖的糖羥基 2）引入連接臂 （ space arm） 又稱手臂（ spacer） “ 接臂 ” 的目的： 克服 影響配基與生物大分子的結合的 空間障礙 。 目前帶有各種手臂的系列載體已有商品供應。 在吸附濃度較低的范圍內(nèi) ， 吸附等溫線近似為線形 Freundlich型吸附等溫式 其中 cm的指數(shù)值越小 ， 表示親和結合力越強 ， 當指數(shù)值小于 ， 吸附平衡可以用矩形等溫式近似 。 CB分子的多個 芳環(huán) 使其具有一定 疏水性 ， 可以與蛋白質(zhì)非極性表面發(fā)生疏水性相互作用； CB分子的 發(fā)色基團 具有與 NAD+和 NADP+相類似的構象和尺寸 ， 可以與核苷酸依賴酶發(fā)生特異性結合； CB分子帶有 磺酸基 ， 具有陽離子交換基的性質(zhì) ， 可以和蛋白質(zhì)發(fā)生靜電相互作用 。 P328 親和層析包
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