【正文】 集的流感樣病例標本 ， 每日送縣 級 疾 控 中心，置 70℃或以下保存。 （ 4）全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室 的工作人員 接到標本后， 24小時內(nèi) 將 “ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標本原始登記送檢表” （表 2） 錄入 到“中國 流感 /人禽流感 監(jiān)測信息系統(tǒng)” 的“ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標本登記一覽表” （見表 3） 中 。近 年 來隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展，發(fā)現(xiàn)通過雞胚所分離的流感病毒，其抗原性與原始標本有所不同，而通過 MDCK 細胞 所 分離的 流感病毒 ，其抗原性與原始標本相似。 但 MDCK細胞分離的病毒不 能 用于疫苗生產(chǎn) 。 全國流感監(jiān)測網(wǎng) 絡(luò)實驗室 收 到標本后，應(yīng)在 24 小時內(nèi)進行標本處理和病毒接種 ，不能及時接種的應(yīng)置－ 70℃ 或以下凍存。將 原始標本一分為三份 ，一份 （ 40％） 用于雞胚接種，一份 （ 30％） 用于 MDCK 細胞接種，一份 （ 30％） 保存待復核。 （ 2） MDCK 細胞的 接種 和收獲 將處理后的標本接種 于 已長單層 的 MDCK 細胞 上， 每日觀察細胞病變 ，一般為 7 9 天 。 即使無 細胞病變也應(yīng)于 第 7天收獲 。 隨 MDCK 細胞 傳 代數(shù) 的 增加，其對流感病毒的敏感性下降 。 （ 3） 雞胚 的接種和 收獲 將處理 后的標本接種于 9日齡 雞胚 的 羊膜腔和尿囊腔， 33℃ ～ 35℃ 培養(yǎng) 72小時 。 經(jīng) HA 試驗 陰性者 ， 將羊水和尿囊液混合， 繼續(xù) 盲傳 1代 （ 72 小時） ，如 仍為 陰性 ， 則雞胚病毒分離為陰性， 標本 可 棄 去 。 4． 病毒鑒定 （ 1）紅細胞凝集試驗（ HA） MDCK 細胞 或雞胚收獲的 標本首先用 雞、 豚鼠或人紅細胞進行紅細胞 凝集試驗（ HA），確定病毒滴度， “ O”相毒株采用豚鼠或人紅細胞進行 HA 試驗， 具體方法見附件 5。 若 傳 1～ 2 代后， HA滴度仍 8者， 可 應(yīng) 用 B型引物和能區(qū)分 A型流感病毒不同亞型的引物進行 RT－ PCR 鑒定 。 10 （ 2）紅細胞凝集抑制（ HI）試驗 HA 試驗完成 后，用國家流感中心每年提供的抗 A（ H1N1）、抗 A（ H3N2）、抗 B（ Victoria 系 ） 和抗 B（ Yamagata 系 ） 4種標準參照血清， 進行 紅細胞凝集抑制（ HI）試驗 ， 確定 病毒 的型 別 和亞型 ， 進行 HI 試驗時，需同時進行 4種標準抗原對照。 （ 3）流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室的工作人員 在 完成病毒鑒定后，當天將鑒定結(jié)果錄入“中國 流感 /人禽流感 監(jiān)測信息系統(tǒng)” 中“ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病毒分離 、 鑒定結(jié)果登記一覽表” （見表 4） 。 ? 毒株鑒定完成后，液體毒株應(yīng)在－ 70℃ 及以下保存 3 年，干燥管可以長期保存。 （ 2）上送國家流感中心的毒株種類 ? 自 國家級 流感樣病例監(jiān)測哨點醫(yī)院 網(wǎng)絡(luò) 采樣，所分離的全部毒株； ? 自 非國家級 流感樣病例監(jiān)測哨點醫(yī)院采樣 ， 所分離到的流感病毒，單 向 血凝抑制效價與 國家流感中心提供的 標準參照血清相比 ， 有 4 倍或 4 倍以上差異的毒株； ? 自 非國家級 流感樣病例監(jiān)測哨點醫(yī)院采樣 ，所分離到的流感病毒 ， HA滴度 8，且不具備 RT－ PCR 鑒定能力的毒株 。 （ 3）毒株 上送的 時限 和要求 ? HA 陽性， 應(yīng)用國家流感中心提供的標準參照血清進行 HI 試驗， 4 種血清的 HI 11 效價均≤ 20 的毒株 ，應(yīng)在 HI試驗結(jié)束 后 24小時內(nèi) 送達國家流感中心； ? 其余毒株在 HI試驗完成 后， 每 2周 送至國家流感中心； ? 全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)各實驗室負責填寫“ 流感 毒株送檢單” （見表 6） ， 將毒株 上送至國家流感中心 。 ? 所送毒株 每份 不少于 3ml，并且無細菌污染。 ? 國家流感中心 ：電話： 01063580764，傳真： 01063580764，中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所流感室，北京宣武區(qū)迎新街 100 號，郵編： 100052。 （ 1） 經(jīng) HA 復核，滴度 ≥ 8 的，既可進行 HI試驗， 一般毒株 2天內(nèi) 完成 復核 鑒定 ，并將 結(jié)果錄入“中國 流感 /人禽流感 監(jiān)測信息系統(tǒng)” 中的“國家 流感中心 流感 /人禽流感 毒株復核、鑒定一覽表” （見表 7） ，進行反饋。 （ 2） 經(jīng) HA 復核，滴度 8 的，繼續(xù)在 MDCK 細胞或雞胚上培養(yǎng) 2代，符合 HA 滴度≥ 8 的，可進行 HI 試驗。 （ 3） 若經(jīng)病毒培養(yǎng) 2 代后， HA 滴 度仍 8 者， 國家流感中心 應(yīng)用 B型引物和能區(qū)分 A型流感病毒不同亞型的引物進行 RT－ PCR 鑒定。 流感 病毒抗原性 分析 國家流感中心 對 所分離到的流感病毒 ，采用單向血凝抑制試驗和交叉血凝抑制 12 試驗 進行抗原性分析。具體方法見 附件 5。 （ 2）交叉血凝抑制試驗 國家流感中心 選擇不同時間 、不同地區(qū) 分離的毒株， 按照 HI 效價是否 與 標準參照血清存在 4倍及以上差異進行分組，每組各選擇一定比例的毒株 ， 采用近幾年抗原性不同的國內(nèi) 代表株 和 WHO 公布的疫苗株及其標準參照血清 ，進行 交叉 血凝抑制試驗 ，測定抗原比 。 交叉 血凝抑制試驗完成后，填寫“國家流感中心毒株 交叉 血凝抑制試驗 報告”（見表 10） ，及時向各省和 /或送毒株的全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室反饋。 七、流感暴發(fā)疫情監(jiān)測 （一）暴發(fā)疫情定義 1．流感樣病例暴發(fā)疫情定義： 在某一相對集中 的區(qū)域內(nèi)（如 村莊、 學校、幼托機構(gòu)、 敬老院、 工廠、公司 、工地 等集體單位）， 一周內(nèi) ， 出現(xiàn) 30 例及以上 ，或集體單位中 10％以上 的 聚集性流感樣病例。 （二） 暴發(fā)疫情的發(fā)現(xiàn)與報告 1．疫情發(fā)現(xiàn) （ 1） 各級醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)，發(fā)現(xiàn)本地區(qū) 在某一相對集中的區(qū)域內(nèi)（如村莊、學校、幼托機構(gòu)、工廠、公司等集體單位）， 短時間內(nèi)出現(xiàn)較多聚集性 的 流感或 流感樣病例，要及時向當?shù)丶膊☆A防控制機構(gòu)報告。 各級各類學校指定 的 負責本校傳染病疫情報告工作 的 專人或兼職教師 一旦發(fā) 現(xiàn) 暴發(fā)疫情苗頭，應(yīng)主動向轄區(qū)內(nèi)疾病預防控制機構(gòu)進行報告，疾病預防控制機構(gòu)應(yīng)及時進行調(diào)查和處理。 2． 疫情報告 （ 1） 各級疾病預防控制機構(gòu)，在接到 流感或 流感樣病例暴發(fā) 疫情報告后，要及時進行調(diào)查處理 ， 并在接到疫情報告后 盡快 應(yīng)用 “ 突發(fā)公共衛(wèi)生事件報告管理 信息系統(tǒng) ” ， 進行 首次 報告 。 （ 3） 符合 《全國突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處理預案》中規(guī)定的突發(fā)公共衛(wèi)生事件分級標準 的流感暴發(fā)疫情 ，則按照相應(yīng)的規(guī)范進行報告。 （三）暴發(fā)疫情的調(diào)查處理 各級疾病預防控制 機構(gòu)應(yīng)認真做好現(xiàn)場流行病學調(diào)查， 并 根據(jù)本地實驗室的能力，開展實驗室檢測工作，盡快明確疫情性質(zhì)。 在開展流行病學調(diào)查和實驗室檢測的同時，應(yīng)采取積極有效的措施，控制疫情的進一步蔓延。 2．標本 采集 各級疾病預防控制機構(gòu)負責暴發(fā)疫情病例標本的采集。 （ 2）標本的運送 采集人員填寫“ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標本原始登記送檢表 ”（ 見表 2） ，并將標本送至能開展相應(yīng)檢測的實驗室。 用于病毒分離和 RT－ PCR 檢測的標本采集后應(yīng)在 4℃條件下， 24小時內(nèi)運送至全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室，未能 24 小時內(nèi)送至實驗室的，應(yīng)置 70℃或以下保存。 （ 3） 全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室的工作人員接到標本后， 24小時內(nèi) 將“ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標本原始登記送檢表” （表 2） 錄入到“中國 流感 /人禽流感 監(jiān)測信息系統(tǒng)” 中 的“ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標本登記一覽表” （見表 3） 中。 ? 自暴發(fā)疫情中分離到流感病毒，對其進行抗原性和基因特性分析。其中流感快速檢測和 RT－ PCR 檢測可用于早期、快速的實驗室檢測。不具備流感快速檢測和 RT－ PCR 檢測條件的地區(qū)，應(yīng)盡量采集標本，送全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室 進行 流感病毒分離鑒定。尤其是流感快速檢測和 RT－ PCR 檢測陽性的標本，應(yīng)盡量分離到流感病毒。 可 在 30分鐘內(nèi)提供檢測結(jié)果，初步判斷疫情性質(zhì) ， 可在現(xiàn)場中使用，操作簡便，具體方法見 附件 5。 （ 4） RT－ PCR 法 和 Realtime PCR 法檢測病毒核酸 RT－ PCR 法和 Realtime PCR 法 是 檢測 流感病毒 核酸 的 方法 ，能 檢 測出非常低水平的流感病毒 的核酸 ， 不管病毒是否具有活性 均可進行測定。 （ 5）病毒分離鑒定 病毒 分離鑒定是流感實驗室診斷中最常用、高度敏感、最準確的方法之一，所分離到的病毒可長期保存，并進行抗原性分析。 （ 6） 檢測結(jié)果 的 報告 各級疾病預防控制機構(gòu)流感實驗室，接到標本后，進行相應(yīng)的流感快速檢測、RT－ PCR 和 Realtime PCR 檢測， 完成試驗后， 24小時內(nèi) 分別 將檢測結(jié)果錄入到“中 16 國 流感 /人禽流感 監(jiān)測信息系統(tǒng)”中 的 “ 流感 暴發(fā)疫情快診試劑盒檢測結(jié)果一覽表” （見表 12） 和 “ 流感 暴發(fā)疫情 核酸檢測 結(jié)果一覽表” （見表 13） 中。 （ 7） 毒株的 保存管理 包括國家流感中心在內(nèi)的全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)各實驗室，要對所有自暴發(fā)疫情中分離的流感毒株進行登記，填寫“ 流感 毒株保存記錄表”（ 表 5）， 以備復核。 其中紅細胞凝集陽性，而用國家流感中心提供的標準參照血清， HI 效價均≤ 20的毒株，應(yīng)在 HI 試驗結(jié)束后 24 小時內(nèi)送達國家流感中心。 （ 9）毒株的復核鑒定、抗原性和基因特性 分析 國家流感中心收到毒株后，進行復核鑒定、抗原性分析，并在完成后及時錄入到“中國 流感 /人禽流感 監(jiān)測信息系統(tǒng)”中，并 向各省和 /或送毒株的全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室反饋。 4．疫情 控 制 （ 1）隔離病人 發(fā)現(xiàn) 疫情后，應(yīng) 早期 對病人采取居家休息、單獨呼吸道病房治療等方式進行隔離， 因地制宜 ， 就地適當隔離 。防治并發(fā)癥主要應(yīng)防止流感病毒性肺炎和細菌性肺炎 ,尤其對年邁體衰者或伴有心血管 ,糖尿病 ,慢性呼吸道疾病者或嬰幼兒等流感高危人群，因他們由于流感或其它合并癥可造成死亡 ,故應(yīng)特別注意加強治療護理。 對 尚未暴露的 年邁和健康狀態(tài)差，尤其 患 慢性病 的病 人 ， 必要時可采用 流感 疫苗接種， 但疫苗接種在 2 周后才能產(chǎn)生保護性抗體，而且存在暴發(fā)毒株與疫苗株是否匹配的問題。 （ 4） 停課、停 業(yè) 根據(jù)疫情規(guī)模，必要時 縣級以上地方人民政府報經(jīng)上一級人民政府決定，可以采取 停工、停業(yè)、停課 等 緊急措施 ，控制疫 情的進一步擴散蔓延 。 （ 2） 單 個病例按照 流感診斷標準 進行診斷。 （ 4）多數(shù)或較大比例病例的實驗室檢測結(jié)果均陽性，且病毒型和亞型結(jié)果一致，可明確暴發(fā)疫情的性質(zhì)。 正是由于目前人類對人禽流感認識有限，而且我國每起動物禽流感疫情的確認需要一個時間過程，因此以下 人禽流感監(jiān)測的啟動條件、監(jiān)測范圍和時限僅作為指導原則推薦給各省參考， 各省衛(wèi)生行政部門可以根據(jù)當?shù)貏游锔咧虏⌒郧萘鞲幸咔橐?guī)模和人禽流感疫情的波及范圍，結(jié)合各地實際情況和防治措施的需要，確定監(jiān)測范圍和時限。 （ 1）發(fā)生動物高致病性禽流感疫情。 （ 3）與我國接壤的其它 國家或地區(qū)在邊境地區(qū)發(fā)生動物高致病性禽流感疫情或人禽流感疫情。 （二）監(jiān)測范圍確定的原則 1．發(fā)生動物高致病性禽流感疫情后，在當?shù)剞r(nóng)業(yè)部門劃定的動物疫區(qū)范圍所涉及縣（市、區(qū)）開展監(jiān)測工作。 動物疫區(qū)：以 疫點為中心， 將 半徑 3公里 內(nèi) 的區(qū)域 劃為疫區(qū)。 3．出現(xiàn) 2例及以上人禽流感待查病例、臨床診斷或確診病例，經(jīng)調(diào)查病例間有流行病學聯(lián)系、存在可能的人傳人證據(jù)時，在病例發(fā)病前 10 天至隔離治療（或死亡）期間，曾經(jīng)居住、工作、生活、學習、診治所涉及的縣（市、區(qū)）開展監(jiān)測工作。 （三）監(jiān)測時限 1．發(fā)生動物高致病性禽流感疫情后，監(jiān)測工 作自當?shù)剞r(nóng)業(yè)部門處理完動物疫情、所有密切接觸者解除醫(yī)學觀察后，持續(xù) 10天。 3．與我國接壤的其它國家或地區(qū)在邊境地區(qū)發(fā)生動物高致病性禽流感疫情或人禽流感疫情，相關(guān)省的人禽流感監(jiān)測工作可在境外疫情平息后持續(xù) 1個月。 ? 與隔離治療前的人禽流感待查病例、臨床診斷或確診病例共同生活、居住，護理過病例，或接觸過病例的呼吸道分泌物、排泄物和體液的人員。 （五）密切接觸者的醫(yī)學觀察 1．對密切接觸者醫(yī)學觀察 7天，觀察期間不限制其活動。 3．觀察期間，由當?shù)匦l(wèi)生行政部門指定醫(yī)療衛(wèi)生人員每日對密切接觸者測試 1次體溫，了解其身體健康狀況， 每日 填寫 “ 禽 流感密切接觸者醫(yī)學觀察原始登記表 ”（見表 14） ，并按 “ 禽流感密切接觸者醫(yī)學觀察每日統(tǒng)計匯總表 ” （見表 15） ，上報到轄區(qū)縣級疾控機構(gòu)。 4． 對密切接觸者中出現(xiàn)異常臨床表現(xiàn)（發(fā)熱，或咳嗽、咽痛等癥狀）的，按照 人禽流感診斷標準 進行診斷治療。 （六）人禽流感待查病例的監(jiān)測 1．病例報告 （ 1）人禽流感監(jiān) 測啟動后，監(jiān)測范圍內(nèi)的各級各類醫(yī)療機構(gòu)醫(yī)務(wù)人員接診流感樣病例和肺炎病例時，要詳細詢問病例的流行病學史，嚴格按照人禽流感 診斷 標準進行診斷。沒有條件實行網(wǎng)絡(luò)直報的，應(yīng)以最快方式 報告