【正文】 ） ，分 診室 錄入“中國 流感 /人禽流感 監(jiān)測信息系統(tǒng)”。 （四） 流感 樣病例 病原學(xué)監(jiān)測 1．實(shí)驗(yàn)室條件及生物安全操作要求 流感 病 原學(xué) 監(jiān)測在生物安全 Ⅱ 級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。 2．標(biāo)本采集 哨點(diǎn)醫(yī)院監(jiān)測 診室 的 醫(yī)護(hù) 人員 負(fù)責(zé) 采集，或協(xié)助 當(dāng)?shù)?疾控中心 專業(yè)人員采集流感樣病例的鼻咽拭子等標(biāo)本， 采集人員 填寫 “ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標(biāo)本原始登記送檢表 ”（ 表 2）， 隨同所采集標(biāo)本 送全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室。 采集方法 詳 見 附件 5。 （ 4）全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室 的工作人員 接到標(biāo)本后， 24小時(shí)內(nèi) 將 “ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標(biāo)本原始登記送檢表” （表 2） 錄入 到“中國 流感 /人禽流感 監(jiān)測信息系統(tǒng)” 的“ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標(biāo)本登記一覽表” （見表 3） 中 。 但 MDCK細(xì)胞分離的病毒不 能 用于疫苗生產(chǎn) 。將 原始標(biāo)本一分為三份 ，一份 （ 40％） 用于雞胚接種，一份 （ 30％） 用于 MDCK 細(xì)胞接種，一份 （ 30％） 保存待復(fù)核。 即使無 細(xì)胞病變也應(yīng)于 第 7天收獲 。 （ 3） 雞胚 的接種和 收獲 將處理 后的標(biāo)本接種于 9日齡 雞胚 的 羊膜腔和尿囊腔， 33℃ ～ 35℃ 培養(yǎng) 72小時(shí) 。 4． 病毒鑒定 （ 1）紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（ HA） MDCK 細(xì)胞 或雞胚收獲的 標(biāo)本首先用 雞、 豚鼠或人紅細(xì)胞進(jìn)行紅細(xì)胞 凝集試驗(yàn)（ HA），確定病毒滴度， “ O”相毒株采用豚鼠或人紅細(xì)胞進(jìn)行 HA 試驗(yàn)， 具體方法見附件 5。 10 （ 2）紅細(xì)胞凝集抑制（ HI）試驗(yàn) HA 試驗(yàn)完成 后，用國家流感中心每年提供的抗 A（ H1N1）、抗 A（ H3N2）、抗 B（ Victoria 系 ） 和抗 B（ Yamagata 系 ） 4種標(biāo)準(zhǔn)參照血清， 進(jìn)行 紅細(xì)胞凝集抑制（ HI）試驗(yàn) ， 確定 病毒 的型 別 和亞型 ， 進(jìn)行 HI 試驗(yàn)時(shí)，需同時(shí)進(jìn)行 4種標(biāo)準(zhǔn)抗原對照。 ? 毒株鑒定完成后，液體毒株應(yīng)在－ 70℃ 及以下保存 3 年，干燥管可以長期保存。 （ 3）毒株 上送的 時(shí)限 和要求 ? HA 陽性， 應(yīng)用國家流感中心提供的標(biāo)準(zhǔn)參照血清進(jìn)行 HI 試驗(yàn)， 4 種血清的 HI 11 效價(jià)均≤ 20 的毒株 ，應(yīng)在 HI試驗(yàn)結(jié)束 后 24小時(shí)內(nèi) 送達(dá)國家流感中心； ? 其余毒株在 HI試驗(yàn)完成 后， 每 2周 送至國家流感中心； ? 全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)各實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)填寫“ 流感 毒株送檢單” （見表 6） ， 將毒株 上送至國家流感中心 。 ? 國家流感中心 ：電話： 01063580764，傳真： 01063580764，中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所流感室，北京宣武區(qū)迎新街 100 號，郵編： 100052。 （ 2） 經(jīng) HA 復(fù)核，滴度 8 的，繼續(xù)在 MDCK 細(xì)胞或雞胚上培養(yǎng) 2代，符合 HA 滴度≥ 8 的，可進(jìn)行 HI 試驗(yàn)。 流感 病毒抗原性 分析 國家流感中心 對 所分離到的流感病毒 ，采用單向血凝抑制試驗(yàn)和交叉血凝抑制 12 試驗(yàn) 進(jìn)行抗原性分析。 （ 2）交叉血凝抑制試驗(yàn) 國家流感中心 選擇不同時(shí)間 、不同地區(qū) 分離的毒株， 按照 HI 效價(jià)是否 與 標(biāo)準(zhǔn)參照血清存在 4倍及以上差異進(jìn)行分組，每組各選擇一定比例的毒株 ， 采用近幾年抗原性不同的國內(nèi) 代表株 和 WHO 公布的疫苗株及其標(biāo)準(zhǔn)參照血清 ，進(jìn)行 交叉 血凝抑制試驗(yàn) ，測定抗原比 。 七、流感暴發(fā)疫情監(jiān)測 （一）暴發(fā)疫情定義 1．流感樣病例暴發(fā)疫情定義： 在某一相對集中 的區(qū)域內(nèi)（如 村莊、 學(xué)校、幼托機(jī)構(gòu)、 敬老院、 工廠、公司 、工地 等集體單位）， 一周內(nèi) ， 出現(xiàn) 30 例及以上 ，或集體單位中 10％以上 的 聚集性流感樣病例。 各級各類學(xué)校指定 的 負(fù)責(zé)本校傳染病疫情報(bào)告工作 的 專人或兼職教師 一旦發(fā) 現(xiàn) 暴發(fā)疫情苗頭，應(yīng)主動向轄區(qū)內(nèi)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)進(jìn)行報(bào)告，疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)應(yīng)及時(shí)進(jìn)行調(diào)查和處理。 （ 3） 符合 《全國突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急處理預(yù)案》中規(guī)定的突發(fā)公共衛(wèi)生事件分級標(biāo)準(zhǔn) 的流感暴發(fā)疫情 ，則按照相應(yīng)的規(guī)范進(jìn)行報(bào)告。 在開展流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢測的同時(shí)，應(yīng)采取積極有效的措施，控制疫情的進(jìn)一步蔓延。 （ 2）標(biāo)本的運(yùn)送 采集人員填寫“ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標(biāo)本原始登記送檢表 ”（ 見表 2） ，并將標(biāo)本送至能開展相應(yīng)檢測的實(shí)驗(yàn)室。 （ 3） 全國流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室的工作人員接到標(biāo)本后， 24小時(shí)內(nèi) 將“ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標(biāo)本原始登記送檢表” （表 2） 錄入到“中國 流感 /人禽流感 監(jiān)測信息系統(tǒng)” 中 的“ 流感 /人禽流感 監(jiān)測病例標(biāo)本登記一覽表” （見表 3） 中。其中流感快速檢測和 RT－ PCR 檢測可用于早期、快速的實(shí)驗(yàn)室檢測。尤其是流感快速檢測和 RT－ PCR 檢測陽性的標(biāo)本，應(yīng)盡量分離到流感病毒。 （ 4） RT－ PCR 法 和 Realtime PCR 法檢測病毒核酸 RT－ PCR 法和 Realtime PCR 法 是 檢測 流感病毒 核酸 的 方法 ，能 檢 測出非常低水平的流感病毒 的核酸 ， 不管病毒是否具有活性 均可進(jìn)行測定。 （ 6） 檢測結(jié)果 的 報(bào)告 各級疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)流感實(shí)驗(yàn)室，接到標(biāo)本后，進(jìn)行相應(yīng)的流感快速檢測、RT－ PCR 和 Realtime PCR 檢測， 完成試驗(yàn)后， 24小時(shí)內(nèi) 分別 將檢測結(jié)果錄入到“中 16 國 流感 /人禽流感 監(jiān)測信息系統(tǒng)”中 的 “ 流感 暴發(fā)疫情快診試劑盒檢測結(jié)果一覽表” （見表 12） 和 “ 流感 暴發(fā)疫情 核酸檢測 結(jié)果一覽表” （見表 13） 中。 其中紅細(xì)胞凝集陽性，而用國家流感中心提供的標(biāo)準(zhǔn)參照血清， HI 效價(jià)均≤ 20的毒株，應(yīng)在 HI 試驗(yàn)結(jié)束后 24 小時(shí)內(nèi)送達(dá)國家流感中心。 4．疫情 控 制 （ 1）隔離病人 發(fā)現(xiàn) 疫情后，應(yīng) 早期 對病人采取居家休息、單獨(dú)呼吸道病房治療等方式進(jìn)行隔離， 因地制宜 ， 就地適當(dāng)隔離 。 對 尚未暴露的 年邁和健康狀態(tài)差，尤其 患 慢性病 的病 人 ， 必要時(shí)可采用 流感 疫苗接種， 但疫苗接種在 2 周后才能產(chǎn)生保護(hù)性抗體，而且存在暴發(fā)毒株與疫苗株是否匹配的問題。 （ 2） 單 個(gè)病例按照 流感診斷標(biāo)準(zhǔn) 進(jìn)行診斷。 正是由于目前人類對人禽流感認(rèn)識有限，而且我國每起動物禽流感疫情的確認(rèn)需要一個(gè)時(shí)間過程，因此以下 人禽流感監(jiān)測的啟動條件、監(jiān)測范圍和時(shí)限僅作為指導(dǎo)原則推薦給各省參考， 各省衛(wèi)生行政部門可以根據(jù)當(dāng)?shù)貏游锔咧虏⌒郧萘鞲幸咔橐?guī)模和人禽流感疫情的波及范圍，結(jié)合各地實(shí)際情況和防治措施的需要，確定監(jiān)測范圍和時(shí)限。 （ 3）與我國接壤的其它 國家或地區(qū)在邊境地區(qū)發(fā)生動物高致病性禽流感疫情或人禽流感疫情。 動物疫區(qū)：以 疫點(diǎn)為中心， 將 半徑 3公里 內(nèi) 的區(qū)域 劃為疫區(qū)。 （三）監(jiān)測時(shí)限 1．發(fā)生動物高致病性禽流感疫情后，監(jiān)測工 作自當(dāng)?shù)剞r(nóng)業(yè)部門處理完動物疫情、所有密切接觸者解除醫(yī)學(xué)觀察后，持續(xù) 10天。 ? 與隔離治療前的人禽流感待查病例、臨床診斷或確診病例共同生活、居住，護(hù)理過病例，或接觸過病例的呼吸道分泌物、排泄物和體液的人員。 3．觀察期間，由當(dāng)?shù)匦l(wèi)生行政部門指定醫(yī)療衛(wèi)生人員每日對密切接觸者測試 1次體溫，了解其身體健康狀況， 每日 填寫 “ 禽 流感密切接觸者醫(yī)學(xué)觀察原始登記表 ”（見表 14） ，并按 “ 禽流感密切接觸者醫(yī)學(xué)觀察每日統(tǒng)計(jì)匯總表 ” （見表 15） ，上報(bào)到轄區(qū)縣級疾控機(jī)構(gòu)。 （六）人禽流感待查病例的監(jiān)測 1．病例報(bào)告 （ 1）人禽流感監(jiān) 測啟動后，監(jiān)測范圍內(nèi)的各級各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)醫(yī)務(wù)人員接診流感樣病例和肺炎病例時(shí)，要詳細(xì)詢問病例的流行病學(xué)史，嚴(yán)格按照人禽流感 診斷 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。 2．隔離治療 人禽流感待查病例診斷后，立即送當(dāng)?shù)囟c(diǎn)收治醫(yī)院，置單間治療，并采取相應(yīng)的醫(yī)院內(nèi)感染控制措施，直至病例被排除。 在 現(xiàn)場采集樣本的同時(shí)， 填寫 “流感 /人禽流感監(jiān)測病例標(biāo)本原始登記送檢表” （ 表 2） 。 （ 3）標(biāo)本的運(yùn)送 所有標(biāo)本應(yīng)在醫(yī)院采集，一式二份，其中一份單獨(dú)保存，以備復(fù)核。 5．實(shí)驗(yàn)室檢測 （ 1） RTPCR 和 Real－ Time PCR 具備相應(yīng)資質(zhì) 疾控機(jī)構(gòu) 的 流感實(shí)驗(yàn)室，接到標(biāo)本后，首先應(yīng)用 RTPCR 或 Real－ Time PCR，對禽流感 待查 病例的咽、鼻拭子或含漱液，死亡病例的尸檢肺組織、氣管分泌物等標(biāo)本，進(jìn)行禽流感病毒核酸的快速檢測，具體方法見 附件 5。 微量中和實(shí)驗(yàn)須 510 天內(nèi)完成。 （ 4）標(biāo)本 和分 離物 上送 不具備相應(yīng)實(shí)驗(yàn)室檢測能力的 省 ，須將原始標(biāo)本連同“流感 /人禽流感監(jiān)測病例標(biāo)本原始登記送檢表” （表 2） 一起 ， 24 小時(shí)內(nèi) 送 中國疾控中心 檢測。對血清標(biāo)本進(jìn)行 HI 和微量中和試驗(yàn)。 人禽流感待查病例診斷為 臨床診斷 或確診人禽流感病例后，按照衛(wèi)生部的有關(guān)要求開展防治工作。 4. 按要求使用和分配上級撥付的流感 /人禽流感 監(jiān)測專項(xiàng)工作經(jīng)費(fèi)，強(qiáng)化經(jīng)費(fèi)使用情況的監(jiān)管。 5. 非國家級流感樣病例監(jiān)測哨點(diǎn)醫(yī)院根據(jù)各省的要求開展相應(yīng)的流感 /人禽流感監(jiān)測工作。 ：若標(biāo)本來源為“ 流感樣病例暴發(fā)監(jiān)測 ”，請注明暴發(fā)事件的名稱。 ： 2的倍數(shù)， HI 效價(jià)： 10的 2倍數(shù) ：雞紅細(xì)胞、人紅細(xì)胞、豚鼠紅細(xì)胞 ； ：填寫 RTPCR檢測的結(jié)果， A(H H3)， B， C； ： H H B(Yamagata)、 B(Victoria)和 其它（填寫文字）； （系統(tǒng)自動產(chǎn)生） ： 型別（ A或 B 或 C） /采集地（?。谢蚩h） /病例順序號 /年代（亞型） ,例如 A/上海 /7/1999（ H1）， B/上海 /361/2020。 毒株送檢日期由國家流感中心根據(jù)“ 流感 /人禽流感 毒株送檢單”錄入。 簽發(fā)人： 中國疾病預(yù)防控制中心國家流感中心 報(bào)告日期： 35 表 9. 國家流感中心流感毒株單向血凝抑制試驗(yàn)報(bào)告 CNIC 編號： 疾 病預(yù)防控制中心： 貴單位所送 流感 /人禽流感 毒株 株，經(jīng)我中心進(jìn)行單向 血凝抑制試驗(yàn)（結(jié)果見下表），抗原性分析如下： 抗原 /檢測毒株 抗血清 抗 A（ H1N1）毒株1血清 抗 A（ H1N1）毒株2血清 抗 A（ H1N1）毒株3血清 抗 A（ H1N1）毒株4血清 A（ H1N1）毒株 1 A（ H1N1）毒株 2 A（ H1N1）毒株 3 A（ H1N1）毒株 4 ?? 檢測毒株 1 檢測毒株 2 檢測毒株 3 檢測毒株 4 ?? 如有問題請與國家流感中心聯(lián)系， 電話： 01063580764，傳真： 01063580764，中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所流感室，北京宣武區(qū)迎新街 100 號，郵編： 100052。Email: 簽發(fā)人： 中國疾病預(yù)防控制中心國家流感中心 報(bào)告 日期： 37 表 11. 流感或流感樣病例暴發(fā)疫情監(jiān)測報(bào)告表 事件編號（自動生成）：發(fā)生地國標(biāo)碼（ 6位）＋年份＋當(dāng)?shù)厥录樞蛱? 報(bào)告單位： 疾病控制中心 首次報(bào)告時(shí)間： 年 月 日 一、疫情概況 事件發(fā)生詳細(xì)地點(diǎn)： 省 市 縣（區(qū)） 鄉(xiāng)（鎮(zhèn)、街道） 村（社區(qū)、居委會） 是否發(fā)生在集體單位： ，單位名稱： 是否發(fā)生在學(xué)校 :，學(xué)校類別 : 學(xué) 首例病例發(fā)病時(shí)間： 年 月 日，末例病例發(fā)病時(shí)間： 年 月 日 病例年齡分布： 年齡分組 發(fā)病數(shù) 其中死亡病例數(shù) 0～ 5～ 10～ 15～ 25～ 60～ 合計(jì) 二、實(shí)驗(yàn)室檢測 流感 /人禽流感監(jiān)測病例標(biāo)本原始登記送檢表 采集地 姓名 家長姓名 性別 年齡 現(xiàn)住址 發(fā)病日期 采集日期 送檢日期 標(biāo)本種類 標(biāo)本來源 采集醫(yī)院 備注 注： 1. 采集地：填寫標(biāo)本采集地的縣區(qū)名稱； 2 現(xiàn)住地址： 至少須詳細(xì)填寫到鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道）。此表接流感 /人禽流感監(jiān)測病例標(biāo)本登記一覽表。 “接觸類型”： 、販賣、屠宰、加工、診治病禽、死禽的人員； 、處理病、死禽，未按相應(yīng)規(guī)范采取防護(hù)措施的人員； C. 接觸病、死禽及其排泄物、分泌物，或其排泄物、分泌物污染的環(huán)境的其他相關(guān)人員