精品]發(fā)酵工程技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書-展示頁
2024-11-28 17:52本頁面
【正文】 或暗黃色。 檢樣的吸?。河萌?1 mL 無菌移液管分別吸取 10 106和 107的稀釋菌懸液各 mL，對(duì)號(hào)接入與之對(duì)應(yīng)的 3 個(gè)無菌平皿中，盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于試驗(yàn)臺(tái)上 20min；待樣液吸收后倒置平皿于 40℃恒溫箱中培養(yǎng) 48 h。根據(jù)樣品情況， 制得 103～ 107的稀釋液。 五、實(shí)驗(yàn)方法與步驟 （一） 乳酸菌的分離 菌懸液的配制：取一潔凈三角瓶，盛以 225mL 生理鹽水； 6 支潔凈試管，各盛9mL 的生理鹽水；加塞包扎于 121℃ 高壓蒸汽滅菌 20min，得到無菌生理鹽水。 脫脂乳試管：直接選用脫脂乳液或者脫脂乳粉與 5%蔗糖水按照 1:10 的比例配制，裝量以試管的 1/3 為宜， 115℃ 滅菌 15min。以無菌操作趁熱將（A)、（B）溶液混合均勻后倒平板。 BCG 牛乳培養(yǎng)基： （A）溶液：脫脂乳粉1 27 00g，水500mL，加入1.6%溴甲酚綠（B. C. G）乙醇溶液1mL 28 ，80℃滅菌20min。較簡(jiǎn)便的活力測(cè)定包 26 括凝乳時(shí)間、產(chǎn)酸和活菌數(shù)量等指標(biāo)的檢測(cè)。 乳酸桿菌呈桿狀，成單桿、雙桿或長(zhǎng)絲狀；乳酸桿菌，呈球狀，成對(duì)或短 23 鏈或長(zhǎng)鏈狀。微需氧、厭氧或兼性厭氧，在BCG 牛乳培養(yǎng)基 20 瓊脂平板上，乳酸菌菌落大約13 mm，圓形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈 21 乳白色、灰白色或暗黃色。 17 實(shí)驗(yàn)三 乳酸菌的分離 和 鑒別 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 了解和掌握乳酸菌的菌種特性；初步掌握乳酸菌分離的一般方法。用酒精計(jì)直接測(cè)定蒸餾液酒精度（結(jié)果僅要求達(dá)到一位小數(shù)）。如在刻度以上瓶頸沾有液滴，小心用少許水洗下。用少許水洗滌應(yīng)接管的頭端，洗液并入容量瓶。為防止酒精揮發(fā)，在氣溫較高時(shí)蒸餾，應(yīng)將容量瓶浸入冰水浴中，并使應(yīng)接管出口伸入容量瓶的球部。將燒瓶接入蒸餾裝置。然后注滿至近刻度，將容量瓶置于 20℃水浴中 20～ 30min，用 20℃試樣補(bǔ)足至刻度。用酒精計(jì)測(cè)原酒酒度。期間，控制品溫在 18～ 22℃ 之間，不要超過 25℃ ，時(shí)間 1 個(gè)月，即得原酒。結(jié)果計(jì)算： X=cV0.06 11 405/10.00 式中 X—總酸含量（以檸檬酸計(jì)），g/ml； 12 c—NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/L； 13 0.06405—換算為檸檬酸的系數(shù)，即1mol/L NaOH相當(dāng)于檸檬酸的質(zhì) 14 量，g/mmol； V 消耗氫氧化鈉的體積，mL； 15 10.00—樣品制備液取用量，mL 前發(fā)酵：取經(jīng)干熱滅菌的 300mL 三角瓶，加入占容積的 4／ 5 的澄清果汁，添加 3～ 5％的酵母生產(chǎn)發(fā)酵劑進(jìn)行發(fā)酵，保持品溫在 18～ 22℃ 之間，最高勿超過 25℃ ，發(fā)酵應(yīng)在 7～ 12 天內(nèi)結(jié)束。 澄清果汁：用檸檬酸調(diào)整總酸含量為 5g/L 左右，蔗糖調(diào)整糖度含量為1523%?；旌暇鶆蚝箪o置20min。 壓榨分離：破碎后立即進(jìn)行壓榨分離，分離出的果汁中不得夾帶果肉。 破碎：為易于壓榨，提高出汁率，需進(jìn)行破碎。 （二）果酒生產(chǎn) 工藝流程如下： 果膠酶、 Na2SO檸檬酸 ↓ 蘋果→分選清洗→破碎→壓榨→粗 6 果汁→過濾除果楂、蘋果酸、丹寧 ↓ 離心 ↓ 活化酵母→母發(fā)酵劑→生產(chǎn)發(fā)酵劑 7 澄清果汁 蔗糖 ↓ 發(fā)酵 →除渣 →后發(fā)酵 →原酒 操作要點(diǎn)： 分選：取成熟蘋果，除去腐爛、干疤和傷果。 母發(fā)酵劑制備（二級(jí)種）：接 1～ 2mL 一級(jí)種于裝有 100mL 蘋果汁培養(yǎng)基的三角瓶中，于 28℃ 下培養(yǎng) 2～ 3 天，當(dāng)培養(yǎng)液表面有氣泡產(chǎn)生，嗅之有酒香味、取樣鏡檢無雜菌時(shí)使用。 四、儀器設(shè)備 1mL、 10mL 吸管、 300mL 三角瓶（發(fā)酵缸）、果汁分離器、離心機(jī)、接種環(huán)、酒精燈、無菌超凈臺(tái)、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、電熱鼓風(fēng)干燥箱、糖度計(jì)、菜刀、案板、載玻片、蓋玻片、電子天平、燒杯、高壓蒸汽滅菌鍋等。Be，酸度 %以下） 1000ml， K2HPO4 ， MgSO4 本實(shí)驗(yàn)以蘋果酒為例，學(xué)習(xí)其釀制方法。它是用含一定糖分和水分的果實(shí)壓汁，經(jīng)微生物發(fā)酵而成。 3 實(shí)驗(yàn)二 果酒制作及酒精度 測(cè)定 — 、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 了解果酒釀制原理并掌握蘋果酒釀制技術(shù)。 滅菌鍋操作時(shí)，首先應(yīng)注意水一定要加足夠，排氣要徹底，其次滅菌期間不要離開人，滅菌結(jié)束后，關(guān)閉電源，拔掉插頭，最后放氣一定要緩慢，均勻，氣放徹底才能開鍋，取鍋內(nèi)物品，應(yīng)小心，防止?fàn)C傷。 挑取單個(gè)純菌落，每組轉(zhuǎn)接 3 支斜面試管，備用。 分離純化 ：用接種環(huán)挑取單個(gè)酵母菌菌落，在平板上劃線，培養(yǎng)后分離得到單個(gè)菌落。 并可根據(jù)菌體是否染色來區(qū)分酵母菌的死活細(xì) 胞 ，因?yàn)榛罴?xì)胞使美蘭染液還原，菌體不著色。（ 每組轉(zhuǎn)接 3 支試管） 加富培養(yǎng)：用無菌移液管吸取上述培養(yǎng)后培養(yǎng)液 1mL，注入另一管 9mL乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液中，置 28～ 30℃ 再培養(yǎng) 24h。 生理鹽水 四、主要儀器設(shè)備 高壓蒸汽滅菌器、天平、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、酒精燈、電爐、 1ml 的無菌吸管、 2 18*180mm 試管、培養(yǎng)皿、接種針、載玻片、蓋玻片、牛皮紙（報(bào)紙）、繩線、菜刀、案板、紗布、燒杯、玻璃棒、 超凈工作臺(tái) 等。 乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液： 原料：馬鈴薯（ 200 g）、葡萄糖（ 20 g）、乳酸（ 5mL）、 、蒸餾水（ 1000mL），分裝三角瓶。 （ 2） 在 20%的馬鈴薯汁中加入瓊脂，煮沸溶化，加入葡萄糖，攪拌均勻，制成的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，補(bǔ)足水分。 三、實(shí)驗(yàn)材料及試劑 成熟葡萄或蘋果等果皮 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基： 原料：馬鈴薯（ 200 g）、葡萄糖（ 20 g）、瓊脂（ 20 g）、蒸餾水（ 1000ml），分裝三角瓶。酵母菌生長(zhǎng)迅速，易于分離培養(yǎng)，在液體培養(yǎng)基中，酵母菌比霉菌生長(zhǎng)得快。 發(fā)酵工程技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)書 適用課程： 發(fā)酵工程技術(shù) 目錄 實(shí)驗(yàn)一 酵母菌的 分離和純化 .................
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