基因分析的基本策略-展示頁
2025-01-26 14:42本頁面
【正文】 的意義 分析基因拷貝數變化 一、 Southern blot 檢測基因拷貝數變化 Southern blot 印跡雜交是指 DNA與 DNA的雜交，將電泳分離的待測 DNA片段轉印并結合到一定的固定支持物上，然后用標記的 DNA探針檢測待測 DNA的一種方法。 通過 DNA序列分析，可以鑒定分析人工重組的基因。 揭示基因和基因組一級結構變化在醫(yī)學研究中具有重要意義。（用熒光染料結合引物）。存在操作步驟繁瑣、效率低、速度慢的缺點，特別是讀結果的讀片過程。 化學裂解法（ MaxamGilbert） 1977 反應體系 堿基修飾 堿基修飾 主鏈斷裂 斷裂點 試劑 反應 試劑 G 硫酸二甲酯 鳥嘌呤甲基化 六氫吡啶 G G+A 甲酸 脫嘌呤作用 六氫吡啶 G/A C+T 肼 嘧啶開環(huán) 六氫吡啶 C/T C 肼（加鹽） 胞嘧啶開環(huán) 六氫吡啶 C 在化學修飾反應中，通過控制反應溫度和反應時間，只有一小部分堿基被修飾，隨后進行斷裂反應也是定量。對這 4組核苷酸鏈進行高分辨變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，就可讀出序列。 如果在 DNA的合成反應中，加入一種少量的 ddNTP，則多核苷酸鏈的延伸將在隨機的位點終止，生成一系列長短不一的核苷酸鏈。 第六章 基因分析的基本策略 需要進行基因的 DNA序列分析 :序列測定 基因的染色體上定位：原位雜交技術 研究基因在基因組中的拷貝數： Southern Blot 研究基因表達水平： Northern Blot、逆轉錄實時 PCR技術 研究基因表達產物的水平： Western Blot、流式細胞儀（ FACS ） 對一個已知或未知基因的內容進行研究步驟： 第一節(jié) 利用 DNA定性、定量分析可從不同角度 對基因和基因組進行研究 一、 DNA序列測定可以揭示基因和基因組一級結構變化 DNA測序技術： 雙脫氧鏈終止法 (Sanger法 ) 化學裂解法 PCR測序技術 全自動 DNA測序儀 這些技術的發(fā)明 ,都依賴于高分辨率的聚丙烯酰胺凝膠電泳技術 Sanger雙脫氧鏈終止法引入了雙脫氧核苷三磷酸（ 2ˊ,3ˊ ddNTP）作為鏈終止劑。簡單地說，基因操作就是所有涉及到 DNA、RNA操作的技術。 從上世紀 70年代以來，與 DNA、 RNA操作相關的各種分子生物學技術不斷發(fā)展，到目前已經形成了一個龐大而復雜的技術體系?；虿僮饕殉蔀獒t(yī)學研究的重要手段。 本章主要討論如何對基因進行定性、定量分析；在隨后的 2章里分別介紹基因功能研究的技術和基因工程的有關內容。 2ˊ,3ˊ ddNTP脫氧核糖的 3ˊ 位缺少羥基，它可以與多核苷酸鏈的 3ˊ 羥基形成磷酸二酯鍵，但卻不能與下一個核苷酸縮合，導致多核苷酸鏈的延伸終止。在 4組獨立的 DNA合成反應中，分別加入 4種不同的 ddNTP，結果生成的 4組核苷酸鏈將分別終止于各個 A， G， C， T的位置上。 雙脫氧測序方法 原理 ? 基本步驟： 先將 DNA的末端之一標記放射性同位素（ 32P、 35S）， 再將 DNA樣品分別進行多組具堿基特異性、隨機的、不完全的化學修飾； 采用修飾堿基敏感的特異化學試劑在修飾堿基位置斷開 DNA鏈； 通過具有可分辨鏈長短僅一個核苷酸之差的聚丙烯胺凝膠電泳，將 DNA斷裂片段按分子大小分離開 根據放射自顯影膠片上顯示的末端標記片段分布情況，直接讀出 DNA序列。 5`GATCACTACTG3` 5`* GATCACTACTG3` 5
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1