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dna重組的操作-展示頁

2025-01-14 01:55本頁面
  

【正文】 相同的粘性末端才能有效地連接。 5‘pGATCCCGGOH3’ GGCCp5’ BamHI adapter 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 缺點(diǎn): 接頭與接頭會(huì)彼此以粘性末端接在一起,影響與 DNA片段的連接。 2)能給載體連接上Polylinker 缺點(diǎn): 如果插入片段內(nèi)部也有該酶位點(diǎn),不能切下完整的插入片段 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 c) DNA接頭 (adapter)連接法 adapter:一頭平末端、另一頭粘性末端(某種酶切位點(diǎn)序列)。 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 生命科學(xué)學(xué)院 還有哪些方法能夠創(chuàng)造粘性末端? 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 b)銜接物 (linker)連接 Linker:用化學(xué)合成法合成的一段 1012bp的特定限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)序列的 平端雙鏈 。 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ OH OH P P P P HO HO 5’ 3’ OH P P HO 5’ 3’ 3’ 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 ( 2) 人工加尾形成 “粘性末端 ” a)同聚加尾 法 DNA末端轉(zhuǎn)移酶 DNA末端轉(zhuǎn)移酶 能在沒有模板的情況下給 DNA的 3’OH端加上脫氧核苷酸 , 利用 DNA末端轉(zhuǎn)移酶分別給 載體 和 插入片斷 加上互補(bǔ)的核苷酸。 1 2 3 1 2 3 4 4 3 4 生命科學(xué)學(xué)院 第一節(jié) DNA的體外重組 ( 2)兩端具有不同粘性末端的 DNA分子之間的連接
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