哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)-展示頁
2024-08-30 21:47本頁面
【正文】 表達(dá)載體的必要元件包括：一個(gè)高活性的啟動(dòng)子、轉(zhuǎn)錄終止序列和一個(gè)有效的mRNA翻譯信號(hào)。 dhfr基因與外源基因均明顯擴(kuò)增。常用的標(biāo)記基因有胸腺激酶 (tk)基因、二氫葉酸還原酶 (dhfr)基因、新霉素 (neo)抗性基因、氯霉素乙?；D(zhuǎn)移酶 (cat)基因等 . dhfr還可作為共擴(kuò)增基因使外源基因的表達(dá)產(chǎn)物增加。 ②啟動(dòng)子和增強(qiáng)子； ③剪接信號(hào)； ④終止信號(hào)和 polyA加尾信號(hào)。 載體的選擇取決于外源基因的導(dǎo)入方式和其調(diào)控元件是否有利于轉(zhuǎn)錄和翻譯。 整合型載體 一般是隨機(jī)整合入染色體，其外源基因的表達(dá)受插入位點(diǎn) 的影響，同時(shí)還可能會(huì)改變宿主細(xì)胞的生長特性。 整合型載體 無復(fù)制能力，需整合于宿主細(xì)胞染色體內(nèi)方能穩(wěn)定存在。 質(zhì)粒載體 則是借助于物理或化學(xué)的作用導(dǎo)人細(xì)胞內(nèi)。常用的病毒載體有腺病毒、腺相關(guān)病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、 semliki森林病毒 (sFv)載體等。 根據(jù)進(jìn)入宿主細(xì)胞的方式，可將表達(dá)載體分為病毒載體與質(zhì)粒載體。 1 表達(dá)載體 1． 1 表達(dá)栽體的類型 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)外源重組蛋白可利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和病毒載體的感染。 ③雖然經(jīng)過多年努力，哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)水平有大幅度增高，但從整個(gè)水平上看仍偏低，一般處在雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體蛋白產(chǎn)率的下限，即 130μg/ l08細(xì)胞 /24小時(shí)。如人組織型血纖蛋白酶原激活因子、凝血因子 Ⅷ 、干擾素、乙肝表面抗原、紅血球生成激素、人生長激素、人抗凝血素 Ⅲ ，集落刺激因子等。 研究現(xiàn)狀 ①部分蛋白在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)已從實(shí)驗(yàn)室研究邁向生產(chǎn)或中試生產(chǎn)階段。與其它系統(tǒng)相比，哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的正確折疊，提供復(fù)雜的 N型糖基化和準(zhǔn)確的 O型糖基
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