8抗體技術(shù)-展示頁(yè)
2024-08-19 08:53本頁(yè)面
【正文】 體，準(zhǔn)確診斷傳染病。 IgM類抗體應(yīng)采用沉淀處理結(jié)合凝膠過(guò)濾的方法； ? 體內(nèi)診斷試劑或治療用藥物應(yīng)去除內(nèi)毒素、病毒、核酸等微量污染物，必須采用親和層析和陰離子交換層析。缺點(diǎn)是小鼠腹水中混有來(lái)自小鼠的多種雜蛋白，給純化帶來(lái)難度。 – 先給小鼠注射刺激性的有機(jī)溶劑降植烷（破壞腹腔內(nèi)膜，建立雜交瘤細(xì)胞易于增殖的環(huán)境），然后注射雜交瘤細(xì)胞，待生成腹水后再抽取，離心去細(xì)胞沉淀，取上清液凍存。但產(chǎn)量不高。小牛血清又是支原體污染的原因。 雜交瘤細(xì)胞與抗體性狀的鑒定 ? 對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行染色體分析 ? 對(duì)雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的單克隆抗體進(jìn)行 Ig類和亞類的鑒定 ? 對(duì)單克隆抗體特異性、純度和識(shí)別抗原的相對(duì)分子質(zhì)量進(jìn)行測(cè)定。 ? 常用方法： 酶聯(lián)免疫吸附法 ，免疫熒光技術(shù)（適用于細(xì)胞抗原的抗體檢測(cè)）和放射免疫技術(shù)。 ? 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞還能清除死亡細(xì)胞，應(yīng)用較多。 ? 脾細(xì)胞內(nèi)有這種轉(zhuǎn)移酶，故脾瘤雜交細(xì)胞能用 H和 T合成 DNA而得以生長(zhǎng)。 ? 次黃嘌呤（ H ）、氨基碟呤（ A ）和胸腺嘧啶（ T ） ? 氨基碟呤（ A ）阻斷嘌呤和嘧啶的合成 HAT選擇性培養(yǎng)的原理 ? 骨髓瘤細(xì)胞選用次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（ HGPRT）缺陷型 ,不能利用外源性次黃嘌呤來(lái)合成自身核酸中所需要的嘌呤，而內(nèi)源性嘌呤和嘧啶的合成又被氨基碟呤所阻斷，不能在 HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。 一般選用 68周齡雌性 Balb/c小鼠，抗原通過(guò)血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官，刺激相應(yīng) B淋巴細(xì)胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏 B淋巴細(xì)胞 細(xì)胞融合與雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng) ? 細(xì)胞融合的基本方法：取適量脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合，在 PEG作用下融合，然后用培養(yǎng)液將 PEG融合液緩慢稀釋 ,將混合體系移入選擇性培養(yǎng)基 HAT中培養(yǎng)。 （一）多克隆抗體 (Polyclonal antibody) 1. 概念 給動(dòng)物接種抗原所獲得的免疫血清或抗血清是多種抗體的混合物 , 它是由多種抗原決定簇刺激多株 B細(xì)胞增殖分化所產(chǎn)生的 , 稱為多克隆抗體 . 2. 多克隆抗體的應(yīng)用 ? 免疫學(xué)檢測(cè) ? 被動(dòng)免疫治療和緊急預(yù)防 ? 特異性差 , 用于免疫學(xué)檢測(cè)容易出現(xiàn)交叉反應(yīng) （二）單克隆抗體 (Monoclonal antibody,McAb) 通過(guò) B細(xì)胞雜交瘤技術(shù) , 獲得特異性針對(duì)某一種抗原決定簇的細(xì)胞克隆，產(chǎn)生均一性的抗體 . 單克隆抗體的特性 高度均一性： 純度很高的均一性抗體 高度專一性： 只對(duì)抗原分子上某一抗原決定 簇起反應(yīng) 大量產(chǎn)生及穩(wěn)定性： 雜交瘤細(xì)胞能在體內(nèi)外無(wú)限繁殖 之傳代 １、細(xì)胞工程抗體 —— 雜交瘤 單克隆抗體 雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的主要步驟包括 （ 1）抗原制備； （ 2）免疫動(dòng)物； （ 3）免疫脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備； （ 4）細(xì)胞融合； （ 5）雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)； （ 6）雜交瘤細(xì)胞的篩選； （ 7）雜交瘤細(xì)胞的克隆化； （ 8）單克隆抗體的檢定； （ 9）分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立； （ 10）單克隆抗體的大量制備。 ? 以 1975年 Kohler創(chuàng)建雜交瘤技術(shù)制備 單克隆抗體 為代表 。 Poter 抗體分子結(jié)構(gòu) 1977 Yalow 放射免疫測(cè)定 1984 Koler,Milstein amp?？贵w技術(shù) ? 抗體分子 Antibody IgG structure Antibody IgG structure V H V L C L C H1 C H2 C H3 Hinge (Fab’)2 Fab Fc Membrane Extension Anti
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