國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)-新城疫診斷技術(shù)【整理版】-展示頁(yè)
2025-07-23 19:33本頁(yè)面
【正文】 力判定：a)病毒致死量致死雞胚平均死亡時(shí)間(MDT)的測(cè)定：1) 將新鮮的感染尿囊液用滅菌的生理鹽水連續(xù)10倍稀釋成10～10 ；2) 每個(gè)稀釋度經(jīng)尿囊腔接種五枚9日齡～10日齡的SPF雞胚，每枚雞胚接種0．1 mL，置于37℃培養(yǎng)；3)余下的病毒稀釋液于4℃保存，8 h后，每個(gè)稀釋度接種另外五枚雞胚，每枚雞胚接種0．1 mL，置于37℃培養(yǎng)；4) 每日照蛋兩次，連續(xù)觀察7 d，記錄各雞胚的死亡時(shí)間；5) 最小致死量是指能引起所有用此稀釋度接種的雞胚死亡的最大稀釋度；6)MDT是指最小致死量引起所有雞胚死亡的平均時(shí)間(h)，計(jì)算方法見(jiàn)式(1)。4．2．2血凝抑制試驗(yàn) 采用新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)，確認(rèn)是否有新城疫病毒繁殖。如果沒(méi)有血凝活性或血凝效價(jià)很低，則采用SPF雞胚用初代分離的尿囊液繼續(xù)傳兩代，若仍為陰性，則認(rèn)為新城疫病毒 分離陰性。4．1．4病毒收獲18 h以后死亡的和瀕死的以及結(jié)束孵化時(shí)存活的雞胚置4℃冰箱4 h～24 h，無(wú)菌采集尿囊液。4．1．3雞胚接種用l mL注射器吸取上清液按每枚0．2 mL，經(jīng)尿囊腔接種至少五枚9日齡～11日齡的SPF雞胚， 接種后，35℃～37℃孵育4 d～7 d。糞便和攪碎的組織，應(yīng)用含抗生素的PBS溶液制成10％(g／mL)～20％(g／mL)的懸浮液，在室溫 下靜置1 h～2 h。4．1．2樣品處理樣品置于含抗生素的等滲磷酸鹽緩沖液(PBS)(pH值7．o～7．4)，抗生素視條件而定，但組織和氣 管拭子保存液中應(yīng)含青霉素(2 000 U／mL)、鏈霉素(2 mg／mL)、卡那霉素(50 pg／mL)和制菌霉素 (1 000 U／mL)，而糞便和泄殖腔拭子保存液抗生素濃度應(yīng)提高五倍。4病毒分離與鑒定4．1病毒分離4．1．1樣品采集 從活禽采集的樣品應(yīng)包括氣管和泄殖腔拭子，后者需帶有可見(jiàn)糞便，對(duì)雛禽采集拭子容易造成損】GB／T 165502008 傷，可采用收集新鮮糞便代替。3．2病理變化 當(dāng)禽出現(xiàn)下列肉眼可見(jiàn)的病變時(shí)，可作為初步診斷定性的依據(jù)之一： a)全身黏膜和漿膜出血，以呼吸道和消化道最為嚴(yán)重； b)腺胃黏膜水腫，乳頭和乳頭間有出血點(diǎn)； c)盲腸扁桃體腫大、出血、壞死； d)十二指腸和直腸黏膜出血，有的可見(jiàn)纖維素性壞死病變；e)腦膜充血和出血，鼻道、喉、氣管黏膜充血、偶有出血，肺可見(jiàn)淤血和水腫。DEPc——焦碳酸二乙酯； HA——血凝；HAu——血凝單位，以完全凝集病毒的血清最高稀釋倍數(shù)為一個(gè)血凝單位； HI——血凝抑制；IcPI——腦內(nèi)接種致病指數(shù)； IVPI——靜脈接種致病指數(shù)； MDT——致死雞胚平均死亡時(shí)間； NDv——新城疫病毒；sPF一一無(wú)特定病原體。本標(biāo)準(zhǔn)適用于新城疫的診斷。 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：——GB 16550m1996。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心、揚(yáng)州大學(xué)。 本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。 本標(biāo)準(zhǔn)與GB 16550一1996相比主要變化如下：——對(duì)標(biāo)準(zhǔn)名稱進(jìn)行了修訂，修改為《新城疫診斷技術(shù)》；——?jiǎng)h除了原標(biāo)準(zhǔn)中屬于行政執(zhí)法行為的內(nèi)容；——對(duì)血凝和血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行了修改；～一增加了腦內(nèi)接種致病指數(shù)(ICPI)、靜脈接種致病指數(shù)(IVPI)；——增加了RTPCR檢測(cè)方法。ICS 11．220B 41囝雷中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB／T 1 6550m2008代替GB 16550 1996新城疫診斷技術(shù)Diagnostic techniques for newcastle disease2008123
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