【正文】 使樣品覆蓋在煌綠水的表面，按每1000ml滅菌蒸餾水中加入2ml2%的煌綠溶液進(jìn)行配制，將樣品容器室溫靜置60177。如果蛋殼完整，向上述方法進(jìn)行消毒，無菌分離蛋殼，弄碎蛋黃和蛋白，稱取25g與無菌的500ml的錐形瓶中或其他的容器內(nèi)，加入225mlTSB，并且搖勻，按上述方法繼續(xù)。無菌稱取25g于無菌的三角瓶或其他適宜的容器內(nèi)，加入225ml含硫酸鐵的TSB充分搖勻，按上面的方法繼續(xù)。以下試驗(yàn)按D,111進(jìn)行。置于35℃培養(yǎng)24177。5min。無菌打開蛋殼置于無菌的容器內(nèi)，用無菌的藥匙或其它工具混合蛋清和蛋黃。此溶液的配制如下：取8ml %的次氯酸鈉溶液和1gSDS加入992ml蒸餾水中溶解即可。蛋類a、 含殼蛋。2h。振蕩混勻，用PH試紙測(cè)PH值，如果需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N 177。小心地蓋緊瓶蓋，室溫靜置60177。對(duì)于非粉末狀的樣品，加入225ml無菌的乳糖肉湯；對(duì)于粉末狀的樣品，先加入約15ml無菌的乳糖肉湯，用無菌的玻璃捧、藥匙或舌狀器具攪拌，使其均勻懸浮，再加入3份無菌乳糖肉湯，分別為10ml、10ml和190ml,使總量為225ml。解凍需在45℃以下進(jìn)行，置于能自動(dòng)控溫的水浴鍋內(nèi)，不斷攪拌15分鐘或在25℃解凍18小時(shí)。檢驗(yàn)前的冷凍食品最好不要解凍。根據(jù)樣品的組成成份不同，添加足夠的肉湯培養(yǎng)基保持1:9的比例，除非特殊說明，例如，蛙腿等不需準(zhǔn)確稱量檢測(cè)的樣品，需采用特殊的方法。℃循環(huán)的、溫度可調(diào)的水浴箱：42177。2℃ 水浴箱：49177。A、設(shè)備和材料 攪拌器和無菌攪拌杯 無菌500ML廣口螺口三角瓶、無菌500ML長頸三角瓶、無菌250ML燒杯、無菌玻璃漏斗、無菌采樣器 無菌玻璃涂布捧或塑料涂布捧 電子天平，最大量稱2000g 電子天平，精度5mg，最大量稱120g 培養(yǎng)箱：35177。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，用一種或幾種新的培養(yǎng)基來取代BAM中推薦的培養(yǎng)基是不理想的。最后，自成BAM7發(fā)行以來，已經(jīng)制定出6種培養(yǎng)基的使用說明。如果在選擇性平板上沒有可疑的典型菌落，建議挑取幾個(gè)非典型菌落接種到TSI和LIA培養(yǎng)基上。由于最近桔子汁相關(guān)事件的發(fā)生，其檢驗(yàn)方法也己制定出，被檢的桔子汁包括經(jīng)巴氏消毒和未經(jīng)巴氏消毒的?？谙闾菢悠泛驮鼍鉁?：9的比例進(jìn)行混合，得到的混合物非常粘，不易被吸管吸出。之后，取25ml加入含硫酸鐵的胰酪胨大豆肉湯中。第五個(gè)改變是蛋類樣品的制備。HgCl2對(duì)人體是有害的，依據(jù)環(huán)境保護(hù)組織的要求進(jìn)行處理，費(fèi)用是非常昂貴的。第四個(gè)改變是蛋殼表面滅菌步驟的改變。所以，TSI和LIA斜面培養(yǎng)基現(xiàn)在改為培養(yǎng)24177。2h后，所有的斜面都給出了正確的結(jié)果。未公布的一些資料表明，48小時(shí)后觀察LIA斜面結(jié)果是沒有任何診斷價(jià)值。2h和48177。第二個(gè)改變是對(duì)于冷藏食品前增菌和低水份食品選擇性增菌培養(yǎng)的時(shí)間為72小時(shí)以內(nèi)，這樣，樣品檢測(cè)的時(shí)間最遲星期三或星期四可以開始，周末也不用加班。此外，RV培養(yǎng)基取代了必須含有活性干酵母的LST肉湯培養(yǎng)基。依據(jù)AOAC反復(fù)研究的結(jié)果，RV培養(yǎng)基即可用于檢測(cè)含沙門氏菌量高的食品，又可于檢測(cè)含沙門氏菌量低的食品。 Applied NutritionBacteriological Analytical Manual April 2003 沙 門 氏 菌 檢 測(cè)FDA分析手冊(cè)(2003年3月)第5章章節(jié)內(nèi)容 簡介 設(shè)備和材料 培養(yǎng)基和試劑 樣品的制備 沙門氏菌的分離培養(yǎng) 沙門氏菌的鑒定 快速檢測(cè)方法(附錄1) 參考文獻(xiàn)簡介在第8版的BAM手冊(cè)中，沙門氏菌的檢測(cè)方法有了幾個(gè)改變。FDA沙門氏菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中文版（一）. Department of Health and Human Services . Food amp。 Drug AdministrationCenter for Food Safety amp。第一個(gè)改變是RV培養(yǎng)基的廣泛使用，即可用于檢測(cè)含沙門氏菌量高的食品，又可于檢測(cè)含沙門氏菌量低的食品，以前的版本中，RV培養(yǎng)基僅用于蝦類的檢測(cè)。除口香糖外的所有食品，RV培養(yǎng)基替代了SC培養(yǎng)基。TTB肉湯繼續(xù)用于第二種選擇性增菌培養(yǎng)基，包括口香糖在內(nèi)的食品，在檢測(cè)含菌量高的食品時(shí)需進(jìn)行43℃培養(yǎng)；在檢測(cè)含菌量低的食品時(shí)需進(jìn)行35℃培養(yǎng)。第三個(gè)改變是縮短了在LIA斜面上的培養(yǎng)時(shí)間，在以前的版本(BAM7)中，TSI和LIA斜面在35℃培養(yǎng)的時(shí)間分別為24177。2h。對(duì)193個(gè)LIA斜面進(jìn)行試驗(yàn)，培養(yǎng)24177。再培養(yǎng)24h后，試驗(yàn)的結(jié)果沒有什么重大的改變。2h。在以前的版本(BAM7)中，%的HgCl2溶液中浸泡1h，然后在70%的乙醇溶液中浸泡30分鐘。在新版的手冊(cè)（BAM7）中，%SDS的次氯酸鈉溶液(含Cl200PPM)中30分鐘。在檢測(cè)前，蛋的內(nèi)容物(蛋黃和蛋白)需進(jìn)行完全混勻。本版中，制定了口香糖的檢測(cè)方法。另外添加纖維素酶時(shí)，容易被吸管吸出。從選擇性平板上挑菌落說明更明白和科學(xué)。由于在過去的幾年里，F(xiàn)DA的科學(xué)家們從一些食品中，特別是從海產(chǎn)品中分離出沙門氏菌，其中4%左右在選擇性平板是非典型菌落。包括3種選擇性培養(yǎng)基（BS瓊脂、HE瓊脂和XLD瓊脂）和3種比較新的培養(yǎng)基(EF1XLT、Rambach 瓊脂)。因些，我們一直保留下來。2℃ 冰箱：4177。1℃ 循環(huán)的、溫度可調(diào)的水浴箱：43177?！?無菌藥匙或其它合適的工具：用于稱樣品1無菌培養(yǎng)皿：15X100MM，玻璃或一次性的11ml無菌吸管,、5ml和10ml無菌吸管,1接種針和接種環(huán)1無菌試驗(yàn)試管或培養(yǎng)試管：16X150MM和20X150MM血清學(xué)鑒定管：10X75MM或13X100MM1試管架1旋轉(zhuǎn)混合器1無菌剪刀、大剪刀、解剖刀及鑷子1燈：用于觀察生化反應(yīng)電爐2PH試紙：PH值68，2PH計(jì)228X37CM的無菌塑料袋，易拉口(在第2324節(jié)中，檢測(cè)蛙腿和兔體時(shí)用)2塑料燒杯：能耐高溫高壓，用于振蕩培養(yǎng)過程中，固定塑料袋B、培養(yǎng)基和試劑 乳糖肉湯(M74) 脫脂奶粉(M111) SC肉湯(M134) TTB肉湯(M145) RV培養(yǎng)基(M132) XLD瓊脂(M179) HE瓊脂(M61) BS瓊脂(M19) TSI瓊脂(M149)色氨酸肉湯(M164) 1胰酪胨大豆肉湯(M154)1含硫酸鐵的胰酪胨大豆肉湯(M186)1月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(M76)1胰酪胨示胨大豆肉湯(M160)1MRVP肉湯(M104)1西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基M1381尿素肉湯(M171)1尿素肉湯(快速)(M172)1丙二酸鈉培養(yǎng)基(M92)LIA培養(yǎng)基(M89)2賴氨酸脫羧酶肉湯(M87)2動(dòng)力培養(yǎng)基(M103)2KCN培養(yǎng)基(M126)2苯酚紅糖類發(fā)酵肉湯(M121)2紫色糖類發(fā)酵肉湯(M130)2麥康凱瓊脂(M91)2營養(yǎng)肉湯(M114)2BHI肉湯(M24)25%木瓜蛋白酶溶液(M56a)1%纖維素酶溶液(M187)3月示胨羊血瓊脂基礎(chǔ)(M166)3通用前增菌肉湯(UPM,M188)3無水亞硫酸鉀粉末3200ppm次氯酸鈉溶液，%SDS(R12a)370%乙醇溶液(R23)3靛基質(zhì)試劑(R38)3VP試劑(R89)3肌酸晶體340%KOH溶液(R65)1N NaOH溶液(R73)41N HCl溶液(R36)41%煌綠溶液(R8)4溴甲酚紫溶液,%(R9)4甲基紅指示劑(R44)4無菌蒸餾水4Tergitol7(R78)4Triton X100(R86)4%生理鹽水(R63)4適當(dāng)濃度的生理鹽水(R27)50、沙門氏菌多價(jià)O血清5沙門氏菌多價(jià)H血清5沙門氏菌多價(jià)O群血清：A、B、CCCDDEEEEF、G、H、I、Vi和其它相應(yīng)血清5沙門氏菌SpicerEdwards H血清C、樣品制備以下的方法均以25g樣品作為抽檢單位，樣品與肉湯培養(yǎng)液的比例為1:9。干蛋黃、干蛋白、干全蛋、液體牛奶(脫脂牛奶、含2%脂肪牛奶、全牛奶和脫脂奶粉)，粉狀調(diào)制食品(蛋糕、甜餅、炸面圈、餅干和面包)、嬰兒食品、口食或軟管進(jìn)食的含蛋食品。如果冷凍樣品必須軟化來獲得待檢部分，盡可能縮短解凍的時(shí)間，使竟?fàn)幘荷L最少，并減小對(duì)沙門氏菌的損傷。無菌稱取25克樣品，放入無菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ML)或其它合適的容器內(nèi)。充分?jǐn)嚢?，直到樣品完全懸浮，沒有塊狀物。5min。把瓶蓋松開約1/4圈，置于35℃培養(yǎng)24177。以下試驗(yàn)按D,111進(jìn)行。用硬刷子洗蛋并使其干燥，%SDS的200ppm 氯離子溶液中30分鐘。這種消毒液需在使用前配制。無菌稱取25g于無菌的三角瓶中或其它合適的容器內(nèi)，加入225ml含硫酸鐵的TSB肉湯(1L TSB中加入35mg硫酸鐵)，混勻，室溫靜置60177。振蕩混勻，用PH試紙測(cè)PH值，如果需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N 177。2h。b、液全蛋（均勻狀）。c、 煮硬的蛋（雞蛋、鴨蛋或其他種類的蛋）。脫脂干奶粉a、 速溶型。5min，旋松塞子，不需混勻和調(diào)整PH，35℃培養(yǎng)24177。b、 非速溶。全脂奶粉。酪蛋白a、 乳酪。5min，旋松塞子，不需混勻和調(diào)整PH，35℃培養(yǎng)24177。b、 凝乳酪。5min，旋松塞子，不需混勻和調(diào)整PH，35℃培養(yǎng)24177。c、 咸乳酪。5min，然后搖勻，用PH試紙檢測(cè)PH，177。2h。豆粉。含蛋制品(面條、蛋卷、空心粉、意大利面條)、干酪、面團(tuán)、調(diào)制色拉(火腿、蛋、雞肉、金槍魚、火雞)、新鮮的、冷凍的或干的水果和蔬菜、果仁和甲殼類動(dòng)物(小蝦、蟹、小龍蝦、大蝦、大龍蝦)和魚。無菌稱取25克樣品，放入無菌的均質(zhì)器內(nèi)。再無菌轉(zhuǎn)移均質(zhì)混合物于無菌的廣口的帶有旋螺帽的錐型瓶或其它合適的容器中，蓋緊瓶蓋，室溫靜置60177。振蕩混勻，用PH試紙測(cè)PH值，如果需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N 177。2h。干酵母(活性和無活性酵母)無菌稱取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，加 入225ml滅菌的胰酪胨大豆肉湯，充分混勻形成懸液，蓋緊瓶塞，室溫下靜置60min。把瓶蓋松開約1/4圈置于35℃培養(yǎng)24177。以下試驗(yàn)按D,111進(jìn)行。搖勻，用PH試紙測(cè)PH值，如果需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N 177。2h。調(diào)料a、 黑胡椒、白胡椒、芹菜種子或芹菜葉片、干辣椒粉、紅辣椒、茴香、皺葉歐芹片、迷迭香、芝麻、百里香和蔬菜片。搖勻，用PH試紙測(cè)PH值，如果需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N 177。2h。b、 洋蔥片、洋蔥粉和大蒜片。如果必須，調(diào)整容量至225ml，將225ml含有K2SO4的TSB加入樣品中混勻，以下按C10a進(jìn)行。將它們稀釋至無毒的程度后，再進(jìn)行檢測(cè)。1密餞和糖衣(包括巧克力)無菌操作稱取25g樣品于滅菌的攪拌器內(nèi)，加入225ml重溶的脫脂奶粉，攪拌2分鐘，再無菌操作移取樣品液到滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，蓋緊瓶塞，室溫下靜置60177。搖勻，用PH試紙測(cè)PH值，如果需糾正PH值，用無菌1N NaOH或1N 177。2h。1椰子無菌操作稱取25g樣品于滅菌帶螺旋帽的廣口瓶中(500ml)或其它合適的容器內(nèi)，蓋緊