【正文】 遺傳連鎖圖譜飽和度是指單位長度染色體上已定位的標(biāo)記數(shù)或標(biāo)記在染色體上的密度。 分子標(biāo)記輔助育種Larraya et al.（2003）在對糙皮側(cè)耳高產(chǎn)和質(zhì)量優(yōu)良性狀的基因定位研究中，嘗試通過鑒定雜交子是否含有相關(guān)性狀的基因進(jìn)行優(yōu)良雜交子的篩選，結(jié)果表明，這些雜交菌株中確實(shí)有部分在產(chǎn)量或質(zhì)量上優(yōu)于親本菌株或一些商業(yè)菌株，這為標(biāo)記輔助育種在大型真菌上的應(yīng)用提供了技術(shù)支撐。Miyazaki et al.（2008）在其香菇遺傳圖譜的構(gòu)建過程中，將營養(yǎng)菌絲在PDA培養(yǎng)基上生長速度這個(gè)數(shù)量性狀初步定位在LOD2號連鎖群上。1999年Moquet et al.（1999）通過QTL定位的方法研究了雙孢蘑菇褐斑病的抗病性狀，連鎖分析發(fā)現(xiàn)，抗病和感病這兩個(gè)性狀與3個(gè)標(biāo)記ADH、PPCPR25明顯連鎖，其中與PPC1的相關(guān)系數(shù)最高，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)雙孢蘑菇對活細(xì)菌或毒素的抗性性狀基因的QTL與PPC1位點(diǎn)非常貼近，PPC1基因本身可能就是抗性基因。 Sunnerhagen 2006）的研究。目前遺傳圖譜在大型真菌中的應(yīng)用范圍相對較窄，僅限于初步的數(shù)量性狀定位和標(biāo)記輔助育種（molecular assisted selection），尚未應(yīng)用于基因的圖位克隆（mapbased cloning）（Huang et al. 2003；Balogh et al. 2007）和比較基因組學(xué)（parative genomes）（Ahn amp。2010年，Miyazaki et al.（2010）用PCR及SSCP技術(shù)新定位了12個(gè)與子實(shí)體發(fā)育相關(guān)的基因，進(jìn)一步完善了之前由孢子四分體構(gòu)建的香菇遺傳連鎖圖譜。2008年，Miyazaki et al.（2008）選取了23個(gè)香菇四分體孢子組合共計(jì)92個(gè)孢子單核體為作圖群體，構(gòu)建了一張包括289個(gè)標(biāo)記11個(gè)連鎖群的香菇分子遺傳連鎖圖譜。該圖譜包含10個(gè)功能性基因位點(diǎn)，這對于香菇遺傳連鎖圖譜之間的對比分析較為有利，如該圖中MatA和PriA都定位在連鎖群LGⅡ上，表明此連鎖群與Kwan構(gòu)建的連鎖圖中LG Ⅲ相對應(yīng)（Kwan amp。作圖群體為親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的2個(gè)菌株雜交后所得的95個(gè)單孢子后代，該圖有203個(gè)AFLP標(biāo)記和2個(gè)交配型因子，共鑒定了11個(gè)連鎖群，其中有8個(gè)大連鎖群和3個(gè)小連鎖群，遺傳圖譜總長度為1,。 Xu（2002）最早構(gòu)建了香菇的分子遺傳連鎖圖，親本菌株L54采用原生質(zhì)體單核化處理后獲得兩種不同交配型（A1BA2B2）的單核體，作圖群體為32個(gè)F1（L54 A1B1A2B2）的孢子單核體，共采用62個(gè)RAPD標(biāo)記，3個(gè)基于BSA（bulkedsegregant analysis）的RAPD標(biāo)記，2個(gè)表型位點(diǎn)（MatA、MatB），1個(gè)基因（priA）位點(diǎn)和1個(gè)測序的DNA片段位點(diǎn)（MAT）構(gòu)建了14個(gè)連鎖群。 Royse 1991）。 Takemaru 1975）。雙孢蘑菇總遺傳圖譜長度（Le）估計(jì)在1,256cM，據(jù)此估計(jì)，在這張連鎖圖中，以20cM的距離間隔存在一個(gè)標(biāo)記的話，此圖能覆蓋雙孢蘑菇99%的基因，以10cM一個(gè)標(biāo)記為間隔，將能覆蓋雙孢蘑菇93%的基因。研究表明群體數(shù)量的選擇至關(guān)重要，它會影響到標(biāo)記之間的準(zhǔn)確定位。Moquet et al.（1999）將JB383U17的子代同核體群體數(shù)量擴(kuò)大到121個(gè)，通過SCAR、RAPD和同工酶乙醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）標(biāo)記分析，將26個(gè)標(biāo)記定位在5個(gè)連鎖群上。該圖跨度28cM，有4個(gè)源自RFLP的SCAR標(biāo)記和一個(gè)異型酶羧肽酶位點(diǎn)PEP2，一個(gè)交配型座位MAT以及擔(dān)孢子數(shù)量位點(diǎn)BSN。覆蓋了基因組的大部分。Kerrigan et al.（1993）在1993年構(gòu)建了雙孢蘑菇的第一張遺傳圖譜，作圖群體由52個(gè)個(gè)體組成，其中包含從671個(gè)單孢分離物中獲得的48個(gè)同核體，1個(gè)異核體單孢（n+n）以及通過這個(gè)異核體單孢原生質(zhì)體再生獲得的3個(gè)同核體（n）。 Xu 200295AFLPH16611Terashima et al. 200692RAPD、SSCP、SCAR28911et al. 2008Amylostereum areolatum80AFLP204169325van der Nest et al. 2009 雙孢蘑菇遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建雙孢蘑菇在西方國家己有300多年的栽培歷史，而且對它的研究也較為深入。表1 大型真菌遺傳連鎖圖譜構(gòu)建情況Table 1 Construction of macrofungi genetic linkage map物種Species構(gòu)圖群體Population遺傳標(biāo)記Genetic marker連鎖圖譜Genetic linkage map參考文獻(xiàn)Reference標(biāo)記數(shù)Number覆蓋長度Length (cM)連鎖群數(shù)Linkage number平均圖距Average distance (cM)雙孢蘑菇Agaricus bisporus52RAPD、RFLP6411/Kerrigan et al. 1993103SCAR、Others7281/Callac et al. 1997121RAPD、SCAR265/Moquet et al. 1999118AFLP、SSR、CAPS、Others320115613Marie et al. 2010雙色蠟?zāi)accaria bicolor45AFLP、RAPD、SSR、SNP29481213Labb233。據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前公開發(fā)表的大型真菌遺傳連鎖圖譜僅有14張（表1），而國內(nèi)還未見有相關(guān)的研究報(bào)道。 Xu 2002；Terashima et al. 2006； et al. 2008）、灰蓋鬼傘Coprinus cinereus（Muraguchi et al. 2003）、雙色蠟?zāi)accaria bicolor（Labb233。大型真菌分子遺傳圖譜的構(gòu)建工作最早始于Kerrigan et al.（1993）對雙孢蘑菇Agaricus bisporus的遺傳研究。1 大型真菌分子遺傳圖譜研究的現(xiàn)狀真菌遺傳圖譜的構(gòu)建工作較高等動植物起步晚，研究基礎(chǔ)相對落后，其構(gòu)建方法主要參考高等動植物。遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建以及建立在此基礎(chǔ)上的數(shù)量性狀（quantitative trait loci）定位成為了現(xiàn)代遺傳學(xué)研究中的熱點(diǎn)（Lander amp。分子遺傳連鎖圖譜（genetic linkage map）是基因組內(nèi)反映基因以及專一性多態(tài)性DNA標(biāo)記相對位置的圖譜，能顯示標(biāo)記和基因在染色體上的相對位置，有利于更好地理解基因組結(jié)構(gòu)和進(jìn)化，是進(jìn)行基因組系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)，也是遺傳學(xué)研究的重要方向（Botstein et al. 1980；Marra et al. 2004；de Vos et al. 2007；ManzoS225。近年來，隨著現(xiàn)代生物學(xué)研究技術(shù)和方法的飛速發(fā)展，真菌分子生物學(xué)研究也不斷深入，在系統(tǒng)發(fā)育、遺傳作圖、基因定位、基因克隆及遺傳轉(zhuǎn)化等方面都有了長足的發(fā)展（Hamer amp。es 2000；Clark amp。真菌學(xué)研究是生物學(xué)研究中的一個(gè)重要分支，但對大型真菌遺傳學(xué)的系統(tǒng)研究目前仍集中在少數(shù)分類單元中，例如子囊菌中的鏈孢屬Alternaria、Neurospora及擔(dān)子菌中的鬼傘屬Coprinopsis和裂褶菌屬Schizophyllum（Peever et al. 1999；Nargang amp。7 / 8大型真菌分子遺傳連鎖圖譜研究進(jìn)展劉偉 肖揚(yáng) 邊銀丙*華中農(nóng)業(yè)大學(xué)應(yīng)用真菌研究所 武漢 430070A review of research advance of molecular genetic linkage map in macrofungiLIU Wei XIAO Yang BIAN YinBing*The Institute of Applied Mycology, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China大型真菌（macrofungi）中包括一些重要的食用真菌和藥用真菌，在人類的經(jīng)濟(jì)生活中占有十分重要的地位（Chang amp。 Miles 1989）。 Rapaport 2007；K252。 Anderson 2004）。 Givan 1990；Zhong et al. 2002；Fincham 1989）。nchez