酶的提取與分離純化(2)-展示頁
2025-06-04 22:01本頁面
【正文】 TEMED的存在，可加速聚合。 常壓電泳儀 （ 600V） 高壓電泳儀 （ 3000V） 超高壓電泳儀 （ 30000V～ 50000V） （ 2） 電泳槽 ： 自由界面電泳槽 管狀電泳槽 板狀電泳槽 （ 3） 附屬設(shè)備： ★ 二、聚丙烯酰胺凝膠電泳 ！ 聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ polyacrylamide gel electrophoresis， PAGE） 是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的一種電泳方法。 ?聚丙烯酰胺和瓊脂糖是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的支持介質(zhì)。 ④聚丙烯酰胺凝膠電泳： 用于核酸和蛋白質(zhì)的分離、純化及檢測(cè)。 ★ ③ 瓊脂糖凝膠電泳： 一般用于核酸的分離分析。 ②醋酸纖維素薄膜電泳：常用于分析血清蛋白、胎盤球蛋白，優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便迅速，便于保存照相，比紙電泳分辨率高。 支持介質(zhì)的作用 :防止電泳過程中的對(duì)流和擴(kuò)散。 ★ 自由界面電泳： 又稱移動(dòng)界面電泳 ， 指在沒有支持介質(zhì)的溶液中進(jìn)行的電泳。 電 滲：在電場(chǎng)中，液體對(duì)于固體支持物的相對(duì)移動(dòng)。 （用 buffer保持恒定） 離子強(qiáng)度：離子強(qiáng)度越高， v 越低。 電場(chǎng)強(qiáng)度： E越高， v越快。 ★ 第四節(jié) 電 泳 一、電泳的基本理論 1. 原理 : 在一定 pH條件下 （用 buffer）， 不同大小、形狀及帶電顆粒在電場(chǎng)中的移動(dòng)速度不同（用遷移率表示）， 各自集中到特定的位置上而形成緊密的泳動(dòng)帶。第三章 酶的提取與分離純化 電泳 （ electrophoresis, EP） ：指帶電粒子在電場(chǎng)中向著與其所帶電荷性質(zhì)相反的電極方向移動(dòng)的過程。 電泳技術(shù) 是根據(jù)各種帶電粒子在電場(chǎng)中遷移速度的不同而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離的實(shí)驗(yàn)技術(shù) 。 + ★ 影響 遷移率 的因素： 顆粒性質(zhì)： Q越大、 r越小、形狀越接近球形， v 越快。 電泳液： pH值：離 pI越遠(yuǎn)， v越快。 通常，緩沖液離子強(qiáng)度在 。 應(yīng)避免用高電滲物質(zhì)作支持介質(zhì)。 區(qū)帶電泳 :指有支持介質(zhì)的電泳，待分離物質(zhì)在支持介質(zhì)上分離成若干區(qū)帶。 2. 電泳的分類 ★ 按支持介質(zhì)種類的不同，區(qū)帶電泳可分為： ①紙電泳：用濾紙作支持介質(zhì)，用于核苷酸定性定量分析。 ?以上兩種類型的電泳，由于介質(zhì)的孔徑度大，沒有分子篩效應(yīng)，主要靠被分離物的電荷多少進(jìn)行分離。瓊脂糖凝膠孔徑度較大，對(duì)大部分蛋白質(zhì)只有很小的分子篩效應(yīng)。分辨率高。 ★ 3. 電泳常用設(shè)備 （ 1） 電泳儀 ：提供穩(wěn)定直流電源的裝置 。 ★ 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體 （ Acr）和交聯(lián)劑 N， N’ 甲叉雙丙烯酰胺 （ Bis） 在催化劑和加速劑作用下聚合的
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