【正文】 、透明（ clearing） 為使石蠟?zāi)芙虢M織塊，組織脫水后必須經(jīng)過一種既能與酒精相混合，又能溶解石蠟的溶劑，而達(dá)到石蠟浸入組織塊的目的。 固定方法 ? 浸泡固定 ?注射、灌注固定 ?微波固定 ?蒸汽固定 常用的固定劑 單純性固定劑：甲醛（福爾馬林 formalin） 乙醇；乙酸。 光率。 、糖、脂肪、酶等成分變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持其原有形態(tài)及特定位置。 二、固定（ fixation） 固定是將某些化學(xué)試劑（固定液）滲透到需要保存或制作切片的臟器或組織、細(xì)胞中，使其所含物質(zhì)盡量保持在生活狀態(tài)時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置。 ：取材刀剪應(yīng)鋒利，切開時(shí)取材刀嚴(yán)禁來回挫動(dòng)，以避免組織結(jié)構(gòu)變形、細(xì)胞破碎。掌握正確的取材部位就必須熟悉機(jī)體的組織結(jié)構(gòu)和解剖特點(diǎn)，原則上應(yīng)在病變與正常組織的交界處取材，避開壞死出血區(qū)。 組織病理學(xué)標(biāo)本大致可分為：手術(shù)標(biāo)本、內(nèi)鏡取材標(biāo)本、穿刺標(biāo)本、細(xì)胞學(xué)標(biāo)本 第二節(jié) 組織的處理 取材 固定 脫水 透明 浸蠟與包埋 一、取材（ tisssue processing） 1 材料新鮮：活檢組織離體后立即固定，最遲不能高于 30分鐘。制成的切片撈置于載物網(wǎng)上，經(jīng)烘干后可進(jìn)行染色或備用。 第一章 組織切片制作技術(shù) 第一節(jié)概述 組織切片的制作技術(shù)屬于組織病理學(xué)范疇它是指采用包埋劑使組織內(nèi)滲入某種支持物質(zhì)，使組織保持一定的硬度，然后利用切片機(jī)切成薄片，經(jīng)染色在顯微鏡下觀察。 流式細(xì)胞儀技術(shù)（ Flow Microfluorimetry） 是一種單細(xì)胞定量分析和分選的新技術(shù)?？蓹z測細(xì)胞內(nèi)核酸、細(xì)胞骨架、細(xì)胞內(nèi) pH、 Ca離子濃度、膜電位、過氧化物、細(xì)胞間通訊、細(xì)胞篩選及定量等。形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 河北聯(lián)合大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心 李琪佳 組織切片制作技術(shù) 石蠟切片常規(guī)染色技術(shù) 石蠟切片特殊染色技術(shù) 免疫組織（細(xì)胞）化學(xué)技術(shù) 免疫細(xì)胞化學(xué)的理論基礎(chǔ) 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 親和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 重點(diǎn)介紹： 電子顯微鏡技術(shù)（ electron microscope, EM） 1. 透射電子顯微鏡 2. 掃描電子顯微鏡 4. 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與超微結(jié)構(gòu)病理 激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)（ Confocal Laser Scanning Microscope） 集高、精、尖細(xì)胞分析及工程技術(shù)于一體的新技術(shù)。該儀器突破了普通光學(xué)顯微鏡不能對細(xì)胞或組織內(nèi)部進(jìn)行定位檢測的限制，實(shí)現(xiàn)了對細(xì)胞內(nèi)部光學(xué)斷層掃描成像。為活細(xì)胞功能研究開辟了新途徑，成為現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)研究不可缺少的的工具。其范圍包括了細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)的各種抗原、蛋白、酶以及基因表達(dá)產(chǎn)物；還有細(xì)胞內(nèi)的核酸定量或 DNA倍體、細(xì)胞周期分析；尤其是癌基因的檢測、血細(xì)胞表型分析、細(xì)胞分子和粘附分子的檢查、細(xì)胞凋亡分析、腫瘤相關(guān)抗原及單種細(xì)胞的純化。根據(jù)支持物的不同，有石蠟切片、明膠切片、塑料切片、冷凍切片等類別。 組織切片技術(shù)包括組織的取材、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片及染色等。 2 取材部位及切面：縱切或橫切往往是顯示組織結(jié)構(gòu)明晰的關(guān)鍵。 ，甚至卷曲變形，特別是神經(jīng)肌肉組織，可將其兩端扎在木片或小木棍上進(jìn)行固定。 ：固定后的組織或多或少會(huì)產(chǎn)生收縮現(xiàn)象 5 組織塊力求小而?。呵袎K的大小、厚度及質(zhì)地決定了固定的效果，一般情況下，取材大小為 2 1cm，厚度為 2－ 4mm。 固定的目的： ,防止自溶與腐敗使之盡量保持生前的形態(tài)結(jié)構(gòu) 。 ，使組織變硬以利切片。 。 混合固定劑：中性甲醛 pH （甲醛、磷酸緩沖液）； AF液 （甲醛、酒精） 三、脫水（ dehydration） 將組織內(nèi)的水分用某些化學(xué)試劑置換出來的過程 脫水的目的 標(biāo)本經(jīng)固定和水洗后，組織內(nèi)有大量水份，不能與二甲苯混溶，因此必須脫水。此時(shí)因組織塊的水分被二甲苯取代，其折射指數(shù)接近于組織蛋白的折光指數(shù)，組織塊變得透亮。 透明的目的： 便于浸蠟、包埋。 大多數(shù)脫水劑不能和包埋劑（石蠟）混溶，故必須通過透明劑置換出脫水劑后才能進(jìn)行后續(xù)程序。 ? 氯仿 :易揮發(fā)微溶于水，易溶于醇、醚、苯等。 ? 氯仿透明法：徹底脫水的組織塊按 3： 1氯仿、純酒精混合液 1小時(shí) 氯仿 1 2小時(shí) 1： 1氯仿石蠟混合液 1小時(shí)。常用的支持物有明膠、石蠟、火棉膠、樹脂、炭蠟等，他們及時(shí)浸透劑又是包埋劑。 浸蠟的方法 ? 此法應(yīng)在 560C－ 620C的溫箱內(nèi)進(jìn)行，液狀石蠟的量應(yīng)為標(biāo)本的 25－ 30倍。 ：鑲裝平面應(yīng)盡可能與切片刀刃平行。 ：修切的組織片不能過厚，以免造成組織塊的人為損失，標(biāo)準(zhǔn)為 15μm ／次。 、撈片：常用水溫為 450C左右，組織膜與玻片附著的位置為，右手持片，玻片的左 2／ 3正中。 第二章 石蠟切片常規(guī)染色技術(shù) 第一節(jié)概述 染色的意義及目的 : 染色（ stainning）是用染液對組織切片進(jìn)行處理，使組織中的不同成分被染上相應(yīng)的顏色，產(chǎn)生不同的折射率，以利于光鏡觀察和分析。 染色種類： 包括普通染色、特殊染色、單一染色、多色染色等。 伊紅 Y（ eosin） 又稱曙紅 Y,簡稱伊紅，屬酸性染料，是良好的細(xì)胞質(zhì)染色劑。 一、 HE染色的基本原理 細(xì)胞核染色的原理： 細(xì)胞核主要由 DNA構(gòu)成，帶負(fù)電荷，呈酸性，易于帶正電荷的堿性染料結(jié)合。 必須將 pH調(diào)至等電點(diǎn)以下時(shí)，再染液中加入醋酸使胞漿帶正電（陽離子），就可被帶負(fù)電荷（陰離子）的染料染色。 二、染色方法 ，立即放入二甲苯 ①、②中脫蠟各 5分鐘。 95%酒精和 80%酒精中各 5分鐘。 510分鐘。 7. %鹽酸酒精分化數(shù)秒鐘。 9. %伊紅 12分鐘。 11. 二甲苯 2中 (透明 )各 5－ 10分鐘。 HE染色中二甲苯、酒精和水洗作用： :二甲苯可以洗去石蠟，使染料更易進(jìn)入到細(xì)胞和組織內(nèi)；染色后的二甲苯起透明切片的作用。 :