形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)ppt課件-wenkub
2023-05-19 22:26:37 本頁面
【正文】 織不能顯示清晰的細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu)。 :酒精用于蘇木素染色前由高濃度向低濃度逐漸下降處理切片 ,洗脫用于脫蠟的二甲苯。 11. 二甲苯 2中 (透明 )各 5－ 10分鐘。 7. %鹽酸酒精分化數(shù)秒鐘。 95%酒精和 80%酒精中各 5分鐘。 必須將 pH調(diào)至等電點(diǎn)以下時，再染液中加入醋酸使胞漿帶正電（陽離子），就可被帶負(fù)電荷（陰離子）的染料染色。 伊紅 Y（ eosin） 又稱曙紅 Y,簡稱伊紅，屬酸性染料，是良好的細(xì)胞質(zhì)染色劑。 第二章 石蠟切片常規(guī)染色技術(shù) 第一節(jié)概述 染色的意義及目的 : 染色（ stainning）是用染液對組織切片進(jìn)行處理，使組織中的不同成分被染上相應(yīng)的顏色，產(chǎn)生不同的折射率，以利于光鏡觀察和分析。 ：修切的組織片不能過厚，以免造成組織塊的人為損失，標(biāo)準(zhǔn)為 15μm ／次。 浸蠟的方法 ? 此法應(yīng)在 560C－ 620C的溫箱內(nèi)進(jìn)行，液狀石蠟的量應(yīng)為標(biāo)本的 25－ 30倍。 ? 氯仿透明法：徹底脫水的組織塊按 3： 1氯仿、純酒精混合液 1小時 氯仿 1 2小時 1： 1氯仿石蠟混合液 1小時。 大多數(shù)脫水劑不能和包埋劑（石蠟）混溶，故必須通過透明劑置換出脫水劑后才能進(jìn)行后續(xù)程序。此時因組織塊的水分被二甲苯取代，其折射指數(shù)接近于組織蛋白的折光指數(shù)，組織塊變得透亮。 。 固定的目的： ,防止自溶與腐敗使之盡量保持生前的形態(tài)結(jié)構(gòu) 。 ，甚至卷曲變形，特別是神經(jīng)肌肉組織，可將其兩端扎在木片或小木棍上進(jìn)行固定。 組織切片技術(shù)包括組織的取材、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片及染色等。其范圍包括了細(xì)胞表面或細(xì)胞內(nèi)的各種抗原、蛋白、酶以及基因表達(dá)產(chǎn)物；還有細(xì)胞內(nèi)的核酸定量或 DNA倍體、細(xì)胞周期分析；尤其是癌基因的檢測、血細(xì)胞表型分析、細(xì)胞分子和粘附分子的檢查、細(xì)胞凋亡分析、腫瘤相關(guān)抗原及單種細(xì)胞的純化。該儀器突破了普通光學(xué)顯微鏡不能對細(xì)胞或組織內(nèi)部進(jìn)行定位檢測的限制，實(shí)現(xiàn)了對細(xì)胞內(nèi)部光學(xué)斷層掃描成像?？蓹z測細(xì)胞內(nèi)核酸、細(xì)胞骨架、細(xì)胞內(nèi) pH、 Ca離子濃度、膜電位、過氧化物、細(xì)胞間通訊、細(xì)胞篩選及定量等。 第一章 組織切片制作技術(shù) 第一節(jié)概述 組織切片的制作技術(shù)屬于組織病理學(xué)范疇它是指采用包埋劑使組織內(nèi)滲入某種支持物質(zhì)，使組織保持一定的硬度，然后利用切片機(jī)切成薄片，經(jīng)染色在顯微鏡下觀察。 組織病理學(xué)標(biāo)本大致可分為：手術(shù)標(biāo)本、內(nèi)鏡取材標(biāo)本、穿刺標(biāo)本、細(xì)胞學(xué)標(biāo)本 第二節(jié) 組織的處理 取材 固定 脫水 透明 浸蠟與包埋 一、取材（ tisssue processing） 1 材料新鮮：活檢組織離體后立即固定，最遲不能高于 30分鐘。 ：取材刀剪應(yīng)鋒利，切開時取材刀嚴(yán)禁來回挫動，以避免組織結(jié)構(gòu)變形、細(xì)胞破碎。 、糖、脂肪、酶等成分變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持其原有形態(tài)及特定位置。 固定方法 ? 浸泡固定 ?注射、灌注固定 ?微波固定 ?蒸汽固定 常用的固定劑 單純性固定劑：甲醛（福爾馬林 formalin） 乙醇；乙酸。因此透明是石蠟包埋前的一個特定步驟。 常用的透明劑 ? 二甲苯：為最常用的透明劑，有毒、易燃、易揮發(fā)；沸點(diǎn) 1380C1400C,長期接觸對粘膜有刺激作用。 五、浸蠟與包埋 浸蠟 (paraffin infiltrating)和包埋 (embedding) 是指標(biāo)本經(jīng)過前期處理后，再置于支持物中，使支持物透入組織內(nèi)部，并將組織埋入、包裹的過程。 ? 方法：透明后的組織 520C－ 540C（軟蠟）1小時 540C－ 560C石蠟 1小時 580C－ 600C（硬蠟） 1小時 540C－ 560C石蠟進(jìn)行包埋 第三節(jié) 組織切片 切片（ section） ：組織四周應(yīng)留有 2－ 4 mm 蠟邊，蠟塊的上下兩邊應(yīng)平行。 ：要求質(zhì)量，左手毛筆，右手眼科鑷，轉(zhuǎn)速均勻。組織染色屬于生物染色的范疇。 蘇木素 (haematoxylin)— 伊紅染色法，簡稱HE染色，是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中最廣泛應(yīng)用于細(xì)胞和組織的染色方法，也被稱為常規(guī)染色。 伊紅 Y: 是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中解離成帶負(fù)電的陰離子，與蛋白質(zhì)的帶氨基正電荷（陽離子）結(jié)合而使細(xì)胞漿染成紅色。 （水化）。 8. 充分水洗藍(lán)化 30分鐘。 12. 中性樹膠封固。酒精和二甲苯互溶，二甲苯被除去。 : 水洗是為了使蘇木精進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，使細(xì)胞核著色；染色后的水洗是為洗去未與切片結(jié)合的染液；分化后的水洗是為了除去分化液和脫下的染料。 : 當(dāng)分化以后蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，在堿性條件下則處于蘭色離子狀態(tài)。故稱特殊染色。 特殊染色的方法很多，在此僅介紹膠原纖維染色。 腦尼氏體 星形細(xì)胞 腎淀粉樣變 剛果紅染色 肝表面抗原維多利亞藍(lán) 第三章 免疫組織（細(xì)胞）化學(xué) (immunohistochemistry,IHC) 第一節(jié) 免疫組織化學(xué)概論 免疫組織化學(xué)是利用免疫學(xué)抗體與抗原結(jié)合的原理及組織化學(xué)技術(shù)對組織、細(xì)胞特定抗原或抗體進(jìn)行定位和定量的技術(shù)，是免疫學(xué)與細(xì)胞化學(xué)相結(jié)合的一個分支學(xué)科。 乳腺導(dǎo)管癌ER 細(xì)支氣管肺泡癌TTF1 免疫細(xì)胞化學(xué)的突出優(yōu)點(diǎn)是： 抗原抗體反應(yīng)是特異性最強(qiáng)的反應(yīng)之一，細(xì)胞化學(xué)所用的抗體必須是特異性強(qiáng)的多價或單價抗體，具有高度的認(rèn)別能力，在抗原識別上可達(dá)到單個氨基酸的水平，這是其它組織化學(xué)方法難以相比的。物質(zhì)所具有的這種特性稱為抗原性。含有免疫球蛋白的血清稱免疫血清。沒有抗原的刺激，機(jī)體不能產(chǎn)生抗體；利用抗體可以檢測抗原物質(zhì)。我國自制抗體種類較少。 第二節(jié) 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù) (immunofluorescence cytochemistry technique） 是將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，再與組織切片或涂片中相應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)，從而使形成的免疫復(fù)合物上帶有一定量的熒光素，在熒光顯微鏡下借助紫外光激發(fā)呈現(xiàn)出黃綠色或橘紅色熒光，由此檢測抗原或抗體并定
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