植物基因克隆的載體-展示頁
2025-05-10 06:09本頁面
【正文】 松弛型復制 嚴謹型復制 （ 8）可轉移性 在天然條件下，大多質?？赏ㄟ^細菌接合作用從一種宿主細胞內轉移到另外一種宿主內。 質粒的存在形式 體外理化因子作用下可形成下列形式 ? 開環(huán) DNA分子 (ocDNA) ? 線性 DNA分子 (lDNA) ? 超螺旋 DNA分子 (scDNA) ? 生理條件下：以共價閉合環(huán)狀 DNA分子 (Covalent close circular, cccDNA)形式存在 三、 質粒的基本特性 ? 在變性條件下，質?？沙蔀閱捂?DNA分子（ ssDNA）。 （二）質粒的命名原則 命名舉例 ? pBR322是最早構建的質粒之一 ? “ p”表明它是一個質粒 ? “ BR”表示最初構建它的兩個人的名字首字母：Bolivar和 Rodriguez ? “322”區(qū)別于該實驗室構建的其他質粒，如pBR32 pBR327等 三、質粒的基本特性 （ 1）質粒分子較小 一般為 1200Kb， 最大的可達 1400kb(如苜蓿根瘤菌質粒 pRm141a)。 ?編號為阿拉伯數(shù)字，用于區(qū)分屬于同一類型的不同質粒，如 pBR32 pUC18和 pUC19等。 ?隨著研究工作的深入和發(fā)展，愈來愈多的含有質粒的微生物新類群和新質粒被發(fā)現(xiàn)，但由于缺乏統(tǒng)一的命名規(guī)則而導致文獻中質粒名稱的混亂。 二、質粒的發(fā)現(xiàn)和命名 （一）質粒的發(fā)現(xiàn) （二）質粒的命名原則 ?質?？梢砸罁?jù)其表型效應、大小、復制特性、轉移性或親和性差異劃分為不同的類型。 ?70年代末，隨著遺傳工程的崛起，質粒作為載體己被廣泛應用在遺傳工程和分子生物學的研究中。 ?1957年，日本學者報道了志賀菌 (Shigella)中質粒介導抗生素抗性的轉移現(xiàn)象。 按載體性質分 四、分類 質粒載體、噬菌體載體和人工染色體 目前發(fā)展起來的植物基因轉移的載體系統(tǒng)分為兩大類： 一是病毒載體系統(tǒng) 二是質粒載體系統(tǒng) ※ （ 1）有復制起點 ※ （ 2）具有若干個限制性內切酶的單一識別位點 ※ （ 3）具備合適的篩選標記 ※ （ 4）具備合適的拷貝數(shù)目 （ 5）分子量要相對較小 （ 6）在細胞內穩(wěn)定性要高 （ 7）易分離純化 ※ 表示載體必須具備的條件 五、基因工程載體必須具備的條件 第一 節(jié) 質粒載體 一、質粒 (plasmid) 獨立于細菌染色體外的能獨立復制的雙鏈閉合環(huán)狀 DNA分子 ? 細菌 中發(fā)現(xiàn)，偶見于鏈霉菌和酵母 ? 比病毒還簡單的亞細胞結構，一旦離開寄主細胞則無法繁殖。如 pUC系列載體。 二、載體的功能 運送外源基因高效轉入受體細胞； 為外源基因提供復制能力或整合能力； 為外源基因的擴增或表達提供必要的條件。第三章 基因克隆載體 Vectors 載體 (vector)： 在基因工程中，攜帶目的基因或DNA片段進入宿主細胞進行擴增或表達的 DNA分子。 一、載體的概念 作為載體使用的必須是能進入植物寄主細胞內進行復制和表達的核酸分子。 三、發(fā)展概況 1. 第一階段（ 1977年前）： 天然質粒和重組質粒的利用，如 pSC101, colE1, pCR, pBR313和 pBR322 (1977, Bolivar et al) 2. 第二階段： 增大載體容量（降低長度），建立多克隆位點區(qū)和新的遺傳標記基因。 3. 第三階段： 進一步完善載體功能以滿足基因工程克隆中的不同要求，如 M13mp系列載體，含 T3， T7，sp6啟動子載體，表達型載體及各種探針型載體。 大腸桿菌的質粒 二、質粒的發(fā)現(xiàn)和命名 ?1946年， 第一個 被發(fā)現(xiàn)的細菌質粒是大腸桿菌的 F因子 ，它的發(fā)現(xiàn)對細菌遺傳學的發(fā)展產生了深遠的影響。 （一）質粒的發(fā)現(xiàn) ?在以后的 20多年中，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)各種細菌攜帶質粒，且它們的表型特征已遠遠超過
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