【正文】 ichroism (Chiral) Conductivity Electrochemical Evaporative Light Scattering Fluorescence Laser Induced Florescence Laser Interferometer Laser Polarimeter Mass Spectrometric (LC/MS) Nitrogen Specific Detector Nuclear Magic Resonance Offline Methods Optical Rotation Detector Photo Diode Array Refractive Index Radiochemical Sulfur Specific Detector Visetry Multi Angle Light Scattering 示差折光（ Refractive Index）檢測 示差折光檢測器（ RI）是第一個商品化的液相色譜檢測器（上世紀六十年代末、七十年代初） 通常被認為是一種通用檢測器 檢測溶液中所有被溶解的溶質(zhì) － 非特異性 任何光學(xué)介質(zhì)的折光率都被定義為光在該介質(zhì)中與真空中的速度之比值 R S 示差檢測器 － 基本原理 檢測基于被分析物的折光指數(shù)的差異 測量樣品流路與參比流路在折光指數(shù)上的差別 當(dāng)折光指數(shù)差異最大時靈敏度也達到最大 并不測量絕對的折光指數(shù)而是測定折光指數(shù)的差別（ Differential RI） 典型的應(yīng)用領(lǐng)域 沒有紫外吸收、熒光的化合物，例如： ?碳水化合物（ Carbohydrates）、聚合物（ Polymers） ?脂肪酸（ Fatty Acids）及油脂類（ Lipids） 示差檢測器的優(yōu)、缺點 優(yōu)點 通用檢測器 容易使用；通常來說是比較耐用的檢測器 維護成本低 缺點 靈敏度低、選擇性差 對流速、溫度及粘度的變化敏感 不能用于梯度方法 色譜峰可能是正的，也可能是負的 示差檢測器的優(yōu)點 － 通用性 根據(jù)隨機統(tǒng)計；任何一對液體都會有大約 折光率差異 因此；除非正好被分析的樣品與溶液的折光指數(shù)完全相同，都會被檢測到 Separation of LactoseReduce Milk MV 20 10 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 Minutes 葡萄糖 乳糖 半乳糖 示差檢測器的缺點 － 靈敏度 缺乏靈敏度 － 和其他檢測器相比， RI檢測器一般靈敏度較低 UV254 nm S/N 15000:1 MV Minutes AU Refractive Index S/N ~125:1 流動相： MeOH/H2O 60:40 流速： mL/min 色譜柱： C18 色譜柱溫： 30 186。 Kirkland, .。 Gradient: 30 % b to 100 % B in 10 min。 UV detection at 256 nm。 5 181。 25176。 m, x 100 mm。 1% HOAc (50/50) Flow Rate: ml/min Detector: UV, 254 nm, AUFS 1. Maleic Acid 2. Phenylephrine HCl 3. Phenylpropanolamine HCl 4. Naphazoline HCl 5. Phenacetin 6. Pyrilamine Maleate 使用六烷基磺酸鹽 Packing: ?Bondapak C18 Column: 4 mm ID x 30cm Solvent: Methanol/Water with HEXANE Sulfonic Acid amp。 3V ?? V0 V1 V2 V3 ? 時間 1 2 5 k? 值 k?項 k?對 分離度影響 0 0 0 1 1/2 .50 2 2/3 .67 3 3/4 .75 10 10/11 .91 20 20/21 .95 容量因子 k? 與分離度 的關(guān)系 與 R 的關(guān)系 容量因子 k? 與峰高的關(guān)系 改變 k’ 值的方法： 調(diào)節(jié)流動相的極性、 pH、離子強度等 梯度淋洗 改變?nèi)萘恳蜃? K’ 的例子 60/4050/50 40/60①②③①② ②③ ③①譜圖 α 、 k’ 及 N 如何控制分離度 液相色譜原理 － 更進一步的探討 離子型化合物的分離方式 多數(shù)化合物是離子型的！ 使用離子交換柱：離子交換法 主要用于“強”陰、陽離子 使用反相柱 離子抑制色譜法：通過改變流動相的 pH值，使樣品成中性 離子對色譜法：加入“對離子”，使樣品呈中性 離子抑制色譜 離子型化合物在反相色譜柱上不保留 改變流動相的 pH值，抑制樣品離子的電離 主要適用于弱酸性化合物的分離 降低流動相的 pH值，使樣品降低離子化 使用硅膠基質(zhì) C18填料 使用條件應(yīng)在填料基質(zhì)的范圍內(nèi) 硅膠柱的 pH在 28（較保險值 37）內(nèi) 離子抑制色譜實例 而在乙腈 /水并且pH=7時 ， 多數(shù)組份保留時間很短 ， 無法完全分離 。?? .5 1 k39。 39。 k39。 39。液相色譜基礎(chǔ)知識 戴安中國 HPLC銷售培訓(xùn) 2022年 關(guān)于色譜 色譜是一種分離工具，而不是傳統(tǒng)意義上的分析儀器 常見的分離方式： 蒸餾、離心、電泳、過濾、超濾 等等 色譜 是其中一種分離工具 色譜法簡介 色譜法（ Chromatography） 溯源 俄國科學(xué)加 1903年發(fā)現(xiàn)色譜的吸附原理，開創(chuàng)了應(yīng)用吸附原理分離植物色素的新方法并見諸于俄文的文獻 1906年正式命名（見諸文獻） 色譜法； Chromatography 30年代開始廣泛研究和應(yīng)用 主要是氣相色譜及薄層色譜 高效液相色譜法的廣泛應(yīng)用始于 70年代 色譜的發(fā)明人 俄國科學(xué)家： M. S. Tswett 正式命名“色譜”的文獻 色譜分離的機理 分離是一個物理的過程 流動相（ Mobile Phase） 固定相（ Stationary Phase） 樣品（溶解于流動相中的溶質(zhì)） 什么是液相色譜 色譜液 相 色 譜柱 色 譜紙 色 譜薄 層 色 譜高效液相色譜H P L C氣 相 色 譜氣相色譜：流動相是氣相 液相色譜：流動相是液相 什么是高效液相色譜 High Performance Liquid Chromatography 高效液相色譜法，簡稱： HPLC 是一種區(qū)別于經(jīng)典液相色譜；基于儀器方法的高效能分離手段： 高性能的色譜柱，高精度、耐高壓的輸液泵以及高靈敏度的檢測器 …… 廣泛應(yīng)用于各個領(lǐng)域： 醫(yī)藥 / 環(huán)保 / 石化 / 生命科學(xué) / 食品及農(nóng)業(yè) …… 在技術(shù)，理論及應(yīng)用上仍處于發(fā)展階段 HPLC的儀器配置及流程 溶劑 色譜泵 自動進樣器 HPLC色譜柱 檢測器 廢液 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) HPLC的儀器配置及流程 色譜泵 自動進樣器 色譜柱及柱溫箱 檢測器 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 溶劑 色譜圖： HPLC圖形 結(jié)果（ Chromatogram） 色譜圖 即色譜柱流出物通過檢測器時所產(chǎn)生的響應(yīng)信號對時間的曲線圖，其縱坐標(biāo)為信號強度，橫坐標(biāo)為保留時間。 ← 色譜峰 保留時間（分） 基線 ↓ 峰高 峰寬 液相色譜圖相關(guān)術(shù)語 色譜峰 － Peak 色譜柱流出組分通過檢測器時產(chǎn)生的響應(yīng)信號的微分曲線 峰底 － Peak Base 峰的起點與終點之間連接的直線 峰高 － Peak Height 峰最大值到峰底的距離 峰寬 － Peak Width 在峰兩側(cè)拐點處所作切線與峰底相交兩點之間的距離 半（高）峰寬 － Peak Width at Half Height 通過峰高的中點作平行于峰底的直線，其與峰兩側(cè)相交兩點之間的距離 液相色譜圖相關(guān)術(shù)語 峰面積 － Peak Area 峰與峰底之間的面積 ,又稱響應(yīng)值 標(biāo)準(zhǔn)偏差； σ －