基因的體外重組和轉化-展示頁
2025-05-08 05:53本頁面
【正文】 接 AGCT TCGA AluⅠ T4DNA連接酶 AGCT AGCT TCGA TCGA 優(yōu) 點 可以用 T4連接酶連接任何 DNA平端 ?5’突出粘性末端的補齊 可用 Klenow聚合酶補齊 ?3’突出粘性末端的削平 可用 T4 DNA聚合酶削平 主 要 問 題 連接效率低 ?高濃度的底物和 T4 DNA連接酶 ?添加凝聚劑：如聚乙二醇 不易回收外源 DNA片斷 雙向插入 三、修飾黏末端連接 ?同聚物加尾法： 同聚物加尾 (homopolymer tails joining)連接就是利用 末端轉移酶 在載體及外源雙鏈DNA的 339。第五章 基因的體外重組和轉化 第一節(jié) DNA片段的體外連接 第二節(jié) 重組體導入細菌細胞 磷酸二酯鍵的形成 DNA連接酶 DNA連接酶 DNA連接酶 第一節(jié)、 DNA片段的體外連接 連接方式： 黏性末端的連接 平頭末端的連接 修飾黏性末端的連接 PCR產物的連接 Gateway載體構建體系 一、黏性末端的連接 黏性末端連接 (Cohesive end ligation)： 具有黏性末端的兩個雙鏈 DNA分子在 DNA連接酶的作用下 , 連接成為一個雜合雙鏈 DNA。 優(yōu) 點 ?經濟省時，操作方便； ?外源片段容易回收； 問 題 ?載體自身環(huán)化 ?插入片段可雙向插入 酶切產生黏末端的連接 ?載體和目的基因分子上有兩個相同的酶切位點 ?載體和目的基因只有一個相同的限制酶識別位點 ?無相同的限制酶識別位點，有同尾酶 SalⅠ 片段（ CAGCTG） XhoⅠ 片段 (GAGCTC) G3’ CAGCT5’ C3’ GAGCT5’ DNA連接酶 討論：
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