醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)實驗-展示頁
2025-04-13 23:15本頁面
【正文】 水沖洗。約1分鐘后用細(xì)水流從玻片的一端把游離的染液洗去。④將玻片通過火焰3次固定標(biāo)本，自然冷卻。②接種環(huán)按無菌操作法挑取少許菌液于區(qū)域中涂成一薄層，接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。材料 金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌培養(yǎng)液、接種環(huán)、酒精燈、革蘭染色液（結(jié)晶紫、盧戈碘液、95％乙醇、復(fù)紅或沙黃染液）。G+菌菌體含有大量核糖核酸鎂鹽，可與碘、結(jié)晶紫牢固結(jié)合，使已著色的細(xì)菌不被乙醇脫色；G菌菌體內(nèi)核糖核酸鎂鹽含量小，易被乙醇脫色。（二）細(xì)菌的革蘭氏染色法原理 G+菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密（肽聚糖層厚），且脂質(zhì)含量少，乙醇不易滲入脫色。若油已干，可用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去油跡，再用擦鏡紙揩去二甲苯。然后將視線移至目鏡，一面觀察一面向上慢慢轉(zhuǎn)動粗螺旋，待看到模糊的物象時，即改用細(xì)螺旋，調(diào)節(jié)焦點以尋求清晰的物象。滴加香柏油1滴，換油鏡檢查。（3）對光：用低倍鏡對光，檢查染色標(biāo)本時光線宜強，要抬高聚光器，放大光圈，取得最大亮度。 操作步驟（1） 坐姿：使用顯微鏡油鏡時，必須坐端，鏡體保持垂直位，不要使載物臺傾斜，以免香柏油或懸液標(biāo)本流出。油鏡鏡頭透鏡很小，進(jìn)入鏡筒的光線很少，使用時為了增加亮度，必須在標(biāo)本玻片與油鏡頭之間，滴加香柏油，因為香柏油的折光率與載玻片相似，這樣就可使通過聚光器進(jìn)入載玻片的光線不會因折射而散失，幾乎全部進(jìn)入鏡筒內(nèi)，使視野明亮，物象清楚。熟悉生物顯微鏡的使用，特別是油鏡的使用和保護(hù)；熟悉革蘭氏染色的原理。 實驗一 微生物的形態(tài)學(xué)檢測 一、實驗?zāi)康恼莆占?xì)菌的基本形態(tài)（球菌、桿菌、弧菌）。脫下工作服，消毒洗手后，離開實驗室。6．愛護(hù)公物，節(jié)約使用實驗材料；注意安全使用水、電、煤氣。 4． 實驗時聽從老師指導(dǎo)，牢固樹立無菌觀點，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，若發(fā)生菌液污染，損壞物品等事故，應(yīng)立即報告老師及時處理。 2．進(jìn)入實驗室必須穿工作服，按規(guī)定就座，保持肅靜。實 驗 室 規(guī) 則 本門學(xué)科實驗的對象大多是病原微生物，如果不慎發(fā)生意外，不僅自身可能遭致感染，并有可能將病原微生物傳給他人。微生物與寄生蟲學(xué)實驗指導(dǎo)目錄實驗一 微生物的形態(tài)學(xué)檢測 （2學(xué)時） 實驗二 理化因素對微生物的影響（2學(xué)時）實驗三 腸道致病性細(xì)菌的分離與鑒定（4學(xué)時）實驗四 抗酸染色（2學(xué)時）實驗五 寄生蟲學(xué)實驗（2學(xué)時）微生物與寄生蟲學(xué)實驗序 言本實驗在于使學(xué)生加深和鞏固課堂內(nèi)容，并在掌握系統(tǒng)理論知識的基礎(chǔ)上，學(xué)習(xí)微生物與寄生蟲學(xué)的基本操作技能，通過實驗加強無菌概念，培養(yǎng)獨立工作和分析問題的能力，為今后有關(guān)的疾病診斷與中醫(yī)中藥的科學(xué)研究工作打下良好的基礎(chǔ)。本實驗指導(dǎo)共包括五個試驗項目，共計教學(xué)12學(xué)時，按教學(xué)計劃及大綱要求供我院中醫(yī)學(xué)專業(yè)、針灸推拿專業(yè)、骨傷學(xué)專業(yè)、護(hù)理學(xué)專業(yè)、中西醫(yī)結(jié)合等專業(yè)學(xué)生使用。因此，進(jìn)入實驗室必須遵守以下規(guī)則： 1. 非實驗必需物品，不準(zhǔn)帶進(jìn)實驗室。3．上實驗課要嚴(yán)格遵守課堂紀(jì)律，不得高聲談笑及亂動物品，禁止吸煙和進(jìn)食。5．實驗中用過的染菌器材如吸管，試管和用過的玻片等應(yīng)及時放人含有消毒液的容器內(nèi)，不得放在桌上，也不可在水槽里沖洗。7．實驗完畢，按要求整理器材物品，打掃衛(wèi)生。8．作業(yè)應(yīng)在規(guī)定時間內(nèi)完成，實驗報告要求簡潔扼要，字跡清楚，畫圖力求正確、客觀。掌握革蘭氏染色的操作方法。二、實驗內(nèi)容（一） 顯微鏡油鏡的使用及保護(hù)原理：在一般微生物學(xué)實驗中最常使用的是普通光學(xué)顯微鏡的油鏡。材料與試劑 生物顯微鏡及香柏油、二甲苯、標(biāo)本片等。（2）識別油鏡頭：油鏡頭上一般刻有“ X 100”， “Oil”，“HI”等標(biāo)記。（4）滴加香柏油：將標(biāo)本放在載物臺上固定好。（5）找焦點：將油鏡移至中央對準(zhǔn)標(biāo)本，從側(cè)面注視鏡頭，并緩慢轉(zhuǎn)動粗螺旋，使物鏡筒下降，直至鏡頭浸于香柏油中并幾乎接觸到標(biāo)本為止。（6）清潔保養(yǎng)：鏡檢完畢，將鏡筒升起，取出標(biāo)本片，用鏡紙將鏡頭上的油擦凈。然后，將聚光鏡降下，各物鏡呈“八”字形，套好保護(hù)套。G菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)疏松（肽聚糖層薄），且脂質(zhì)含量多，乙醇溶解脂質(zhì)后易滲入細(xì)胞而脫色。G+菌等電點比G菌低，在同一pH值條件下陽性菌比陰性菌所帶負(fù)電荷要多，故與帶正電荷的堿性染料（結(jié)晶紫）結(jié)合牢固，不易被乙醇脫色。操作步驟（1）標(biāo)本片制備①取干凈載玻片l塊，用玻璃鉛筆劃一個區(qū)域。③在室溫下自然干燥。（2）染色①初染：在固定好并已冷卻的涂片標(biāo)本上滴加結(jié)晶紫染液，要蓋滿菌膜。②媒染：滴加盧戈碘液數(shù)滴，作用l分鐘后，輕輕水洗。④復(fù)染：滴加稀釋復(fù)紅染液數(shù)滴，作用1分鐘
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