【正文】 時間應(yīng)短（切忌用手或其他紙擦拭鏡頭，以免損壞透鏡）。如果鏡頭己提出香柏油而尚未見到物像時，應(yīng)按上述過程重復(fù)操作。滴1滴香柏油于玻片標(biāo)本待觀察的區(qū)域上，將油鏡頭轉(zhuǎn)至工作位置，眼睛從側(cè)面注視，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，升高鏡臺，直至油鏡頭浸沒于香柏油內(nèi)，幾乎與載玻片相接觸，但不能相碰（注意使用非油鏡頭切勿進(jìn)行此操作）。用高倍鏡觀察后，若有必要，可再換用油鏡觀察。由于顯微鏡下觀察的被檢物有一定厚度，故在觀察過程中必須隨時轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)節(jié)器，以了解被檢物不同聚焦平面的情況。 高倍鏡觀察在低倍鏡將欲仔細(xì)觀察的目標(biāo)移至視野外中央后，再轉(zhuǎn)動鏡頭轉(zhuǎn)換器，順次將高倍物鏡轉(zhuǎn)至工作位置。 低倍鏡觀察用粗調(diào)節(jié)器調(diào)焦后，再輕輕轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)節(jié)器，以便得到清晰的物像。轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)鏡臺與物鏡間的距離，從側(cè)面注視，以二者間距離約5mm為度。在鏡檢全過程中，注意隨時通過擴大或縮小光圈、升降聚光器以及旋轉(zhuǎn)光量調(diào)節(jié)器旋鈕，調(diào)節(jié)所需光線的強弱。使用舊式顯微鏡應(yīng)首先將虹彩光圈的孔徑調(diào)至最大，將聚光器升至最高點，再將低倍鏡對準(zhǔn)鏡臺孔，鏡頭離載物臺約1cm。升高聚光器，再打開光圈。. 檢查檢查顯微鏡各部件狀況，擦拭鏡身、鏡頭后方可開始操作。移動虹彩光圈的調(diào)節(jié)桿，可調(diào)節(jié)光圈的大小，使上行的光線強弱適宜，便于觀察。c．虹彩光圈虹彩光圈也稱可變光闌。其作用是聚集來自下方內(nèi)置光源的光線，使光線集合成束，通過鏡臺孔射至標(biāo)本上，并使整個物鏡的視野均勻受光，以提高物鏡的分辨力。反光鏡的方向可以任意轉(zhuǎn)動調(diào)節(jié)，以選擇適合的角度收集來自不同方向的光線。舊式顯微鏡采用外光源，在鏡臺孔正方方的鏡座上有1個反光鏡，它為一圓形的平、凹雙面鏡，接受外來光線并將光線反射到聚光器。 光源系統(tǒng)光源系統(tǒng)由光源、聚光器和虹彩光圈構(gòu)成。目鏡的作用是將物鏡所放大的物像進(jìn)行再放大。一般地。λ——照明光線波長，單位 nm。顯微鏡的分辨力的大小由物鏡的分辨力來決定的，而物鏡的分辨力又是由它的數(shù)值孔徑和照明光線的波長決定的。在明視距離（25cm）之處，即為正常人眼的分辨距離。分辨力也叫分辨率或分辨本領(lǐng)。 。物鏡的工作距離與物鏡的焦距有關(guān)，物鏡的焦距越長，放大倍數(shù)越低，其工作距離越長。油浸物鏡（香柏油）。顯微鏡的總放大倍數(shù)等于物鏡和目鏡放大倍數(shù)的乘積。它指的是長度的比值而不是面積的比值。物鏡主要參數(shù)包括：放大倍數(shù)、數(shù)值孔徑和工作距離。物鏡由數(shù)組透鏡組成，透鏡的直徑越小，放大的倍數(shù)越高。 光學(xué)系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)即成像系統(tǒng)，由目鏡和物鏡構(gòu)成。用低倍鏡觀察標(biāo)本時，用粗調(diào)節(jié)器調(diào)焦距。e．焦距調(diào)節(jié)器位于鏡柱的左右兩側(cè)，有粗、細(xì)兩個螺旋調(diào)節(jié)器，旋轉(zhuǎn)它們能使鏡臺升降，以調(diào)節(jié)物鏡和鏡臺上所觀察標(biāo)本之間的距離，獲得清晰的圖像。標(biāo)本移動器上還帶有標(biāo)尺，可利用標(biāo)尺上的刻度尋找和記錄所觀察標(biāo)本的位置。鏡臺中央有1個圓孔，稱鏡臺孔，來自下方聚光器的光線可由此通過進(jìn)入物鏡，觀察玻片標(biāo)本之前，應(yīng)將欲觀察的目標(biāo)移至鏡臺孔處聚光器透鏡的中央。調(diào)節(jié)左右鏡筒之間的水平距離（左右鏡筒之間距離的調(diào)節(jié)一般采用拉板式會鉸鏈?zhǔn)絻煞N形式），以適應(yīng)觀察者兩眼的瞳距，使左右目鏡的視野完全重合。鏡筒是安裝在鏡臂頂端的2個圓筒，其內(nèi)安裝有目鏡鏡頭。b. 鏡臂與鏡筒鏡臂是鏡柱以上的1個斜柄，便于使用者把握。它包括：a. 鏡座與鏡柱鏡座是顯微鏡底部的承重部分，可降低顯微鏡重心，使之不易傾倒。此處以介紹雙目顯微鏡為主。要開大光闌。將要觀察的標(biāo)本某部分移至視野正中央。使用高倍鏡時，一定要從低倍鏡開始。使用顯微鏡做一般觀察主要是學(xué)會調(diào)光線、調(diào)焦點。實驗提示必須按實驗指導(dǎo)了解顯微鏡的各部分結(jié)構(gòu)、性能及使用方法。目前廣泛使用的光學(xué)顯微鏡也從當(dāng)初單筒式、外光源的簡單結(jié)構(gòu)形式發(fā)展成具有雙目鏡、內(nèi)置光源和有許多功能的較高級的光學(xué)顯微鏡。隨著個類對生物體結(jié)構(gòu)和生命現(xiàn)象認(rèn)識的不斷深入，人們對生命本質(zhì)的微觀世界進(jìn)行探索的動力也越來越高。三、實驗材料和用品普通光學(xué)顯微鏡、實體顯微鏡（示范）、擦鏡紙、載玻片、蓋玻片、吸水紙、牙簽、二甲苯、香柏油、甲基藍(lán)染色劑、生理鹽水、人血涂片、馬蛔蟲子宮切片等。觀察細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)和細(xì)胞的分裂。實驗一學(xué)習(xí)使用顯微鏡一、實驗內(nèi)容觀察顯微鏡的各部分結(jié)構(gòu)，理解其基本性能，學(xué)習(xí)使用顯微鏡的方法。以點點表示標(biāo)本上的凹凸、深淺、層次、結(jié)構(gòu)的立體感等，要將筆垂直于圖紙繪成圓點。（6）根據(jù)草圖添繪各部分的詳細(xì)結(jié)構(gòu)，最后用硬鉛筆（2H或3H）以清晰的筆畫繪出全圖。先測量或估量一下標(biāo)本的大小、長寬比例，確定應(yīng)放大或縮小的倍數(shù)，在開始繪圖。一般較大的圖每頁繪制一個，同一類的小圖可以在一張紙上繪制數(shù)個，但應(yīng)在紙上適當(dāng)安排，預(yù)留注解字體的空間。（2）只在紙的一面繪圖，鉛筆應(yīng)經(jīng)常保持尖銳，制面力求整潔。（6）每次實驗最后的1020分鐘應(yīng)留作寫筆記或總結(jié)之用。繪圖是生物實驗中一項重要的工作，也是基本技術(shù)之一，每位學(xué)生應(yīng)認(rèn)真對待。（5）生物繪圖是實驗觀察，解剖結(jié)果的記錄?？偟膶嶒?zāi)康闹唬谟谂囵B(yǎng)學(xué)生的獨立工作能力，因此每位學(xué)生在實驗中著重鍛煉自己獨立操作、獨立思考，培養(yǎng)創(chuàng)新意識。（3）準(zhǔn)備好實驗用的材料和用具（如顯微鏡、解剖鏡、解剖器具等）。把必需的實驗用品準(zhǔn)備好，并帶到實驗室。損壞物品時，應(yīng)主動向教師報告，并由教師處理。（5）實驗結(jié)束，在離開實驗室前，應(yīng)清理好自己的實驗桌，要輪流打掃實驗室，保持實驗室的整潔衛(wèi)生。（3）觀察及繪圖務(wù)求精細(xì)準(zhǔn)確，獨立思考，獨立完成。保持實驗室的安靜，不得進(jìn)行與實驗無關(guān)的活動。普通動物學(xué)實驗指導(dǎo)說明1. 實驗課的目的通過實驗課教學(xué)驗證、加深理解和鞏固課堂講授所學(xué)知識，熟悉動物學(xué)的基本操作技術(shù)，提高動手能力、獨立工作能力及觀察分析問題的能力，培養(yǎng)科學(xué)的、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、實事求是的學(xué)風(fēng)。2. 實驗課的要求（1）學(xué)生應(yīng)按規(guī)定時間進(jìn)入實驗室。（2）實驗用的一切工具，在使用前應(yīng)核對清楚，實驗后清洗干凈，查點清楚，并原樣放回。（4）每次的實驗報告應(yīng)在教師指定時間內(nèi)完成。（6）愛護(hù)實驗室的一切物品，避免損壞或浪費。3. 學(xué)生如何進(jìn)行實驗（1）每次實驗前應(yīng)仔細(xì)閱讀實驗指導(dǎo)及教科書的有關(guān)章節(jié)，明確實驗?zāi)康?、?nèi)容和操作步驟。（2）實驗開始和實驗過程中應(yīng)認(rèn)真聽教師的講解。（4）嚴(yán)格按照實驗指導(dǎo)進(jìn)行工作：除明確目的，注意實驗提示外，需認(rèn)真按實驗操作要求一步步進(jìn)行觀察、解剖，包括示范標(biāo)本的觀察及小實驗等。盡量不依賴別人，只有在經(jīng)過努力仍不明白時，才請教師幫助。觀察若不精確，繪圖不可能精確。一般繪圖時間應(yīng)占實驗時間一小半左右，大部分時間應(yīng)用于實驗觀察和解剖。4. 繪圖注意事項（1）生物繪圖以科學(xué)性為主，首先從理論上對所繪標(biāo)本有一定了解，認(rèn)真觀察標(biāo)本，掌握其各種特征，再嚴(yán)謹(jǐn)繪圖。（3）繪圖的大小應(yīng)適宜，圖的各部分結(jié)構(gòu)必須按要求表示清楚。（4）繪圖時先把標(biāo)本放在一個適宜的位置，能展現(xiàn)出圖中要求表示的各個部分。（5）先用軟鉛筆（HB）把標(biāo)本形態(tài)結(jié)構(gòu)的輪廓及主要部分輕輕的畫出（線條要細(xì)要輕），如標(biāo)本是兩側(cè)對稱，則應(yīng)先畫一條線垂直經(jīng)過圖的正中，這樣易將兩部分畫得對稱。線條要均勻一致，不要有接痕。點的多少，疏密視圖的不同而異，但是點點不要重疊。制作口腔上皮細(xì)胞裝片并進(jìn)行染色觀察。二、實驗?zāi)康某醪秸莆诊@微鏡的使用，學(xué)習(xí)臨時裝片的制作和染色，驗證細(xì)胞的形態(tài)、基本結(jié)構(gòu)和細(xì)胞分裂。四、實驗操作及觀察:（一）顯微鏡的基本構(gòu)造與使用方法利用顯微鏡對生物體的結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察和研究,標(biāo)志著對生命的研究從宏觀領(lǐng)域進(jìn)入到微觀領(lǐng)域。伴隨這一進(jìn)程，作為生命科學(xué)研究重要工具之一的顯微鏡也不斷發(fā)展。對顯微鏡的了解和熟練使用，是作為一個生命科學(xué)研究者應(yīng)具各的最基本的技能之一。切不可脫離實驗指導(dǎo)，擅自扭動各部件，以免損壞儀器。做顯微照相時，還必須調(diào)中心（即調(diào)聚光器中心）。用油鏡時要從40的物鏡開始。在高倍鏡下只能用細(xì)調(diào)焦點，不能用粗調(diào)焦器。1. 顯微鏡的構(gòu)造普通光學(xué)顯微鏡是由機械系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)及光源系統(tǒng)3部分組成。 機械系統(tǒng)機械系統(tǒng)主要對光學(xué)系紡和光源系統(tǒng)起支持和調(diào)節(jié)作用。其后方有一直立的短柱稱為鏡柱，起支撐鏡臺的作用。鏡臂的頂端安裝有鏡筒和鏡頭轉(zhuǎn)換器。由物鏡到目鏡的光線由此通過。 c．鏡臺與標(biāo)本移動器鏡臺亦稱載物臺，是放置玻片標(biāo)本的平臺。鏡臺上裝有標(biāo)本移動器（或稱推進(jìn)尺），標(biāo)本移動器上的壓片夾用以固定載玻片，鏡臺右下方有標(biāo)本移動器調(diào)節(jié)螺旋，轉(zhuǎn)動螺旋可前后左右移動玻片標(biāo)本。圖 11 標(biāo)準(zhǔn)光學(xué)顯微鏡構(gòu)造圖d．鏡頭轉(zhuǎn)換器鏡頭轉(zhuǎn)換器是鏡筒下端1個可旋轉(zhuǎn)的圓盤，其上裝有數(shù)個不同放大倍數(shù)的物鏡鏡頭，轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器可換用不同倍數(shù)的物鏡。粗、細(xì)調(diào)節(jié)器組合在一起，外周直徑大的螺旋為粗調(diào)節(jié)器，旋轉(zhuǎn)它時鏡臺升降距離較大，主要用于尋找目的物。粗調(diào)節(jié)器螺旋中央直徑較小的螺旋是細(xì)調(diào)節(jié)器，旋轉(zhuǎn)它時鏡臺升降距離較小，能精確地對焦，獲得更清晰的物像，主要在高倍鏡觀察時調(diào)節(jié)焦距。a．物鏡物鏡是顯微鏡取得物像的主要部件，其作用為聚集來自光源的光線和利用入射光對被觀察的物體做第1次放大。每臺昱顯微鏡均備有幾個倍數(shù)不同的物鏡，放大40以下的為低倍鏡，一般有10；放大40及以上的為高倍鏡，放大100的一般為油鏡。① 放大倍數(shù)是指眼睛看到像的大小與對應(yīng)標(biāo)本大小的比值。例：放大倍數(shù)為100，指的是長度是1μm的標(biāo)本，放大后像的長度是100μm，要是以面積計算，則放大了10,000倍。② 數(shù)值孔徑也叫鏡口率，簡寫NA 或A，是物鏡和聚光器的主要參數(shù)，與顯微鏡的分辨力成正比。③ 工作距離是指當(dāng)所觀察的標(biāo)本最清楚時物鏡的前端透鏡下面到標(biāo)本的蓋玻片上面的距離。例：10倍物鏡上標(biāo)有10/，其中10為物鏡的放大倍數(shù)；；160為鏡筒長度（單位mm）；（單位 mm）。物鏡的作用是將標(biāo)本作第一次放大，它是決定顯微鏡性能的最重要的部件——分辨力的高低。分辨力的大小是用分辨距離（所能分辨開的兩個物點間的最小距離）的數(shù)值來表示的。顯微鏡的分辨距離越小，即表示它的分辨力越高，也就是表示它的性能越好。當(dāng)用普通的中央照明法（使光線均勻地透過標(biāo)本的明視照明法）時，顯微鏡的分辨距離為d=式中d——物鏡的分辨距離，單位 nm。NA ——物鏡的數(shù)值孔徑例如：，可見光波長范圍為400—700nm ，取其平均波長550 nm，則d=270 nm，約等于照明光線波長一半。b．目鏡安裝在鏡筒上端，為一圓筒狀結(jié)構(gòu)，其圓筒上端裝有1塊較小的透鏡、下端內(nèi)側(cè)裝有1塊較大的透鏡。一般有幾種倍數(shù)不同的目鏡可供選配，分別標(biāo)有等放大倍數(shù)（請思考如何計算顯微鏡的放大倍數(shù)？）。a．內(nèi)置光源或反光鏡在鏡臺孔正下方的鏡座上有1個內(nèi)置式電光源，鏡座的后測（或鏡座其他部位）有電源開關(guān)，左側(cè)（或其他部位）有光量調(diào)節(jié)器，用以調(diào)節(jié)內(nèi)光源光線的強弱，以獲得適宜的光亮度。平面鏡反光較弱，用于光線較強的情況；凹面鏡反光較強，用于光線較弱的情況。b．聚光器聚光器在鏡臺孔下方，由2至3塊凸透鏡組成。上下移動聚光器側(cè)面的調(diào)節(jié)桿（或旋轉(zhuǎn)旋鈕），可升高或降低聚光器的高度，調(diào)節(jié)聚光效果。位于聚光器下面，由許多金屬片組成。2. 顯微鏡的使用方法 安放顯微鏡打開鏡箱（或鏡柜），右手緊握鏡臂，左手平托鏡座，將顯微鏡輕放桌上距離桌子邊緣幾厘米處，讓目鏡對著觀察者。 調(diào)光 旋轉(zhuǎn)鏡頭轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡頭對準(zhǔn)鏡臺孔。配置內(nèi)置式電光源的顯微鏡可直接打開電源開關(guān)，并調(diào)節(jié)光量，使視野內(nèi)的亮度達(dá)到明暗適宜。這時，把反光鏡轉(zhuǎn)向光源，苴到視野中的光線既明亮又均勻時為止。 調(diào)焦光線調(diào)好后，將玻片標(biāo)本放在鏡臺上標(biāo)本移動器的卡槽內(nèi)，并用標(biāo)本移動器上的壓片夾卡緊，有蓋玻片的一面朝上，旋轉(zhuǎn)標(biāo)本移動器調(diào)節(jié)螺旋將被檢材料移至鏡臺孔下的聚光器透鏡中央，然后調(diào)焦。然后從目鏡觀察，慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，同時移動標(biāo)本移動器，直到基本看清標(biāo)本物像。如果觀察的目標(biāo)不在視野中央，可調(diào)節(jié)標(biāo)本移動器，使之恰好位于視野中央（請思考玻片移動方向與物像移動方向的關(guān)系如何？若光線不適，可撥動虹彩光圈的調(diào)節(jié)桿，調(diào)節(jié)光線至適宜）。適當(dāng)增強亮度后，只需微微轉(zhuǎn)動細(xì)調(diào)節(jié)器，就可看到更清晰的物像（請思考此時能使用粗調(diào)節(jié)器嗎？為什么？）。在高倍鏡下，將玻片中的被檢物按從前到后、從左到右的順序移動、觀察，再由低倍鏡轉(zhuǎn)高倍鏡反復(fù)觀察幾次，以熟練高倍鏡的使用。 油鏡觀察轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，降低鏡臺，使物鏡與鏡臺保持一定距離。然后從目鏡中觀察，用粗調(diào)節(jié)器極其緩慢地向下調(diào)節(jié)至出現(xiàn)物像為止（注意切勿反向轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器，以免油鏡頭與載玻片相碰而損壞了鏡頭及玻片），再用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)至物像清晰，此時還應(yīng)適當(dāng)增加光亮度。使用完畢，將油鏡頭從香柏油中脫出，取下玻片，用擦鏡紙擦去油鏡頭和玻片上的香柏油，再用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦拭鏡頭上的油跡，然后用干凈擦鏡紙擦去鏡頭上殘留的二甲苯。 復(fù)原顯微鏡顯微鏡使用完畢，降下鏡臺至原處，轉(zhuǎn)動鏡頭轉(zhuǎn)換器，使物鏡鏡頭轉(zhuǎn)離鏡臺孔，取下已觀察的玻片標(biāo)本。用擦鏡紙或綢布擦凈鏡頭透鏡和內(nèi)置光源濾光片，用棉紗布擦凈鏡身各處。（二）口腔上皮細(xì)胞裝片的制作和觀察取一張清潔的載玻片，用吸管滴一小滴生理食鹽水在載玻片中央；取消毒牙簽在自己口腔頰部內(nèi)壁，刮取少許粘膜（自色碎片），涂在載片上的生理鹽水中，并使其均勻分布；加上蓋玻片（一側(cè)接觸標(biāo)本傾斜蓋上）。1. 細(xì)胞形狀：口腔上皮細(xì)胞呈不規(guī)則的鱗片狀。3. 細(xì)胞核：在細(xì)胞的中央，呈圓形。核內(nèi)有核仁。 （三）細(xì)胞分裂取馬蛔蟲子宮切片觀察細(xì)胞的有絲分裂各期（請注意馬蛔蟲卵呈圓形，外周無色透明很厚的部分是卵殼，中央顏色很深的部分才是卵細(xì)胞）。中心體一分為二，各個中心體的周圍均出現(xiàn)許多星線，四面放射，呈星芒狀，稱星狀體。2. 中期：染色體聚集在紡錘體的中央，排成一平面與紡錘絲的縱軸垂直，稱赤道板。3. 后期：著絲點一分為二，每個染色單體都有了自己的著絲點，兩個了染色體就完全獨立了。4. 末期：染色體到達(dá)兩極后，先形成螺旋狀的染色質(zhì)絲，然后變?yōu)轭w粒狀，最后恢復(fù)到原來的狀態(tài)，同時，兩新細(xì)胞核漸次形成，核仁核膜出現(xiàn)。五、作業(yè)1. 繪三個以上口腔上皮細(xì)胞圖，并注明各部名稱。二、實驗?zāi)康耐ㄟ^實驗，進(jìn)