生物分離工程第八章電泳技術(shù)-展示頁
2025-01-25 11:54本頁面
【正文】 Size sieving capacity），這種現(xiàn)象被稱為 分子篩效應(yīng) （ molecular sieving effect） 分子篩效應(yīng) 圖中 A， B， C均為陽離子，在直流電場作用下電泳情況示意圖 分子量大小依次為 MA=MBMC，所帶電荷量相同 QA=QB=QC。 ? 丙烯酰胺的化學(xué)聚合是由過硫酸銨在堿性條件下，產(chǎn)生游離氧自由基引發(fā)單體丙烯酰胺成為自由基狀態(tài)，經(jīng)過一系列的自由基反應(yīng)得到的聚合物； 影響聚合的主要因素 ? 引發(fā)劑和增速劑的濃度 ：濃度小易導(dǎo)致聚合速度慢；濃度過大則易導(dǎo)致電泳時的燒膠以及電泳帶的畸變；一般控制使聚合過程在 40~60分鐘內(nèi)完成。 ? 凝膠電泳的支持介質(zhì)： – 聚丙烯酰胺凝膠 （ polyacrylamide gel, PGA） 由丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N， N’甲叉雙丙烯酰胺在引發(fā)劑和增速劑的作用下，聚合而成； – 瓊脂糖凝膠 ： 從瓊脂中精制分離出的膠狀多糖，其分子結(jié)構(gòu)大部分是由 1,3連接的 βD吡喃半乳糖和 1,4連接的 3,6脫水 αD吡喃半乳糖交替形成的； 丙烯酰胺的聚合 ? 丙烯酰胺的聚合通常是由化學(xué)或光化學(xué)過程完成的，通常采用過硫酸銨、過硫酸鉀或核黃素（ 引發(fā)劑 ）來引發(fā)該過程；以 N， N， N’， N’四甲基乙二胺（ TEMED）為增速劑 。V 1 ?電泳遷移率的不同提供了從混合物中分離不同物質(zhì)的基礎(chǔ) Etdm??電泳的大致分類 ?依據(jù)電泳原理，現(xiàn)有三種形式的電泳分離系統(tǒng) –移動界面電泳（ moving boundary electrophoresis） –區(qū)帶電泳（ zone electrophoresis ） –穩(wěn)態(tài)電泳（ steady state electrophoresis ） 其中 區(qū)帶電泳 是目前常用的電泳系統(tǒng)。 ?其單位是 cm2 ?? 但實際情況中， ???還取決于凝膠厚度、顆粒尺寸、甚至是介質(zhì)的內(nèi)滲等。 ?帶電粒子在電場中的遷移方式主要依據(jù)分子 尺寸大小 和 形狀 、 分子所帶電荷 或 分子的生物學(xué)與化學(xué)特性 。因此，電泳現(xiàn)象中的 表面電勢 和 雙電層 的因素起著決定性的作用。電泳技術(shù) Electrophoresis 本章主要知識點 ?電泳的概念 ?電泳的基本原理 ?電泳技術(shù)的分類 ?常用的凝膠電泳技術(shù)有哪些？ ?電泳裝置的基本組成 ?聚丙稀酰胺凝膠電泳的一般過程 ? SDSPAGE電泳的基本原理及過程 ?瓊脂糖電泳的特點及其應(yīng)用 ?等電聚焦電泳的基本原理 ?雙相電泳的概念及其特點 學(xué)習(xí)總體要求 掌握電泳概念，電泳速度及凝膠電泳，了解其他幾種常見電泳原理及特點，操作及應(yīng)用。 電泳概念 ? Arne Tiselius——物理化學(xué)家、諾貝爾獎金獲得者 ?定義 ——荷電的膠體粒子在電場中的移動； ?電泳決定于環(huán)繞每個離子的離子霧中的擴散雙電層
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