分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)-展示頁(yè)
2025-01-22 07:55本頁(yè)面
【正文】 因組數(shù)據(jù)庫(kù)獲得 引物設(shè)計(jì)及 PCR擴(kuò)增目的片段 PCR產(chǎn)物連接到載體上構(gòu)建成重組載體 重組載體轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中進(jìn)行質(zhì)粒擴(kuò)增或表達(dá)蛋白 抗性篩選 基因克隆實(shí)驗(yàn)的一般過(guò)程 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌的過(guò)程 感受態(tài) 非定向克隆 + 或 克隆的片段只能按 特定方向 連接 定向克隆 + EcoR I+Hind III切 EcoR I Hind III EcoR I Hind III EcoR I Hind III EcoR I Hind III A A EcoR I+Hind III切 PCR擴(kuò)增 EcoR I Hind III p U C 1 926 8 6 bpAP rA L P H AP ( B L A )P ( L A C )O R IA v aI ( 4 1 3 )B a m H I ( 4 1 8 )E c o R I ( 3 9 7 )H in d II I (4 4 8 )P s tI ( 4 4 0 )S m a I ( 4 1 5 )X m a I ( 4 1 3 )A p a L I (1 7 8 )A p a L I (1 1 2 1 )A p a L I (2 3 6 7 )（二）基因組 DNA文庫(kù)構(gòu)建 某個(gè)生物的基因組 DNA或 cDNA片段與適當(dāng)?shù)妮d體在體外重組 后， 轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞 ，并通過(guò)一定的選擇機(jī)制篩選后得到大量的 陽(yáng)性菌落 （或噬菌體），所有菌落或噬菌體的 集合 即為該生物的基因文庫(kù)。 外源 DNA片斷、載體、宿主 構(gòu)建基因文庫(kù)的目的：篩選出感興趣的目的基因 基因組 DNA文庫(kù)的構(gòu)建 基因組 DNA文庫(kù)的類型 質(zhì)粒文庫(kù) （ ﹤
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