【正文】 NA用兩種只攻擊單鏈 DNA的外切核酸酶處理。原始的 (+)鏈被完全保留。解釋這些現(xiàn)象。 下面哪個(gè) (些 )是在非復(fù)制轉(zhuǎn)座中轉(zhuǎn)座酶所起的作用 ?( ) 類型：選擇題 選擇： (a)切除轉(zhuǎn)座子 (b)在靶位點(diǎn)產(chǎn)生千個(gè)交錯(cuò)切口 (c)將轉(zhuǎn)座子移到新位點(diǎn) (d)將轉(zhuǎn)座子連到靶位點(diǎn)的交錯(cuò)切口上 答案： ， b， d 從 噬菌體 MS2 中提取出來的裸露染色體可以感染大腸桿菌的原生質(zhì)球 (去除胞壁的細(xì)菌 )，這會(huì)產(chǎn)生和具感染能力的噬菌體一樣的噬菌體顆粒。在 λ噬菌體中，像其他溫和噬菌體一樣，噬菌體的基因組被整合到細(xì)菌染色體上，就好像是一組細(xì)菌基因。但是，如果環(huán)境條件不好，它就使宿主細(xì)胞溶源化。 烈性噬菌體和溫和噬菌體的區(qū)別是什么 ? 類型：簡(jiǎn)答題 答案： 261. 答： 一個(gè)烈性噬菌體感染了一個(gè)敏感的細(xì)菌細(xì)胞后，它立即復(fù)制并產(chǎn)生噬菌體特異的蛋 白，這些蛋白被裝配成成熟的噬菌體顆粒； 20—30分鐘后，宿主裂解，釋放出幾百個(gè)噬菌體。產(chǎn)生 ABCDEFGHABCDEFGHABCDEFGHABCDEFGH 最后，這個(gè) DNA 分子被包 λ噬菌體頭部：每個(gè)噬菌體頭部從鏈狀結(jié)構(gòu)中切下恰能填滿頭部的一段 DNA，這段 DNA 大于通常基因組的大小，就這個(gè)例子來說，是 10 個(gè)字母，而基因組大小只有 8 個(gè)字母。 (3)這些染色體通常是在噬菌體 DNA生成和被包裝進(jìn) λ噬菌體頭部過程中形成末端冗余的。 類型：簡(jiǎn)答題 答案： 260 答： (1)末端冗余 DNA 分子兩端的序列是一樣的： 5’CATTA——————CATTA3’ 3’GTAAT——————GTAAT5’ 如果 ABCDEFGH 代表一套遺傳信息，則一段末端冗余序列可這樣表示： ABCDEFGHAB， (2)不同的噬菌體顆粒具有不同的末端冗余片段，來自 4種不同噬菌體的末端冗余 DNA分別為： ABCDEFGHAB CDEFGHABCD EFGHABCDEF GHABCDEFGH 這些染色體相互問是一些不同的循環(huán)變換； T2 噬菌體中所有可能的循環(huán)變換形式都以同樣的頻率出現(xiàn)。 非復(fù)制轉(zhuǎn)座： ( ) 類型：選擇題 選擇： (a)復(fù)制轉(zhuǎn)座子，即在原位點(diǎn)上留有一個(gè)拷貝 (b)移動(dòng)元件到一個(gè)新的位點(diǎn)，在原位點(diǎn)上不留元件 (c)要求有轉(zhuǎn)座酶 (d)要求解離酶 (e)涉及保守的復(fù)制，在這個(gè)過程中轉(zhuǎn)座子序列不發(fā)生改變 答案： 258． b， c， e； 一個(gè)轉(zhuǎn)座子的準(zhǔn)確切離： ( ) 類型：選擇題 選擇：（ a）切除轉(zhuǎn)座子和兩個(gè)靶序列 (b)恢復(fù)靶 DNA到它插入前的序列 (c)比不準(zhǔn)確切離更經(jīng)常發(fā)生 答案： ； 大腸桿菌噬菌體 T2的染色體是一個(gè)線性 DNA分子，它的兩端都有冗余并且可作循環(huán)變換。如果兩種不同的病毒存在于同一宿主細(xì)胞中時(shí)，重組會(huì)有助于遺傳突變。 復(fù)制轉(zhuǎn)座： ( ) ： 類型：選擇題 選擇： (a)復(fù)制轉(zhuǎn)座子，即在老位點(diǎn)上留有一個(gè)拷貝 (b)移動(dòng)元件轉(zhuǎn)到一個(gè)新的位點(diǎn)，在原位點(diǎn)上不留元件 (c)要求有轉(zhuǎn)座酶 (d)要求解離酶 (e)涉及保守的復(fù)制，在這個(gè)過程中轉(zhuǎn)座子序列不發(fā)生改變 答案： ， c， d； 為什么像流感病毒這樣的 RNA病毒的生命周期，有力地支持了以下這一論點(diǎn)：與其說病毒是生命有機(jī)體，不如說它是 “寄生的遺傳因子 ” 類型：簡(jiǎn)答題 答案： 257． 答： RNA病毒的復(fù)制依賴于缺失校正活性的 RNA 復(fù)制酶的作用，這樣有利于遺傳突變。致癌復(fù)合物極有可能是誘變劑，既可能是通過在 cI基因產(chǎn)生一個(gè)無義突變或錯(cuò)義突變影響阻抑蛋白的表達(dá)，又可能是通過在操縱基因序列中產(chǎn)生一個(gè)突變使阻抑蛋白與 PRM/PR 啟動(dòng)子的操縱基因 (0R1 和 OR2)結(jié)合。 類型：簡(jiǎn)答題 答案： 255. 答： 感染 ， λ噬菌體通常會(huì)進(jìn)入溶源狀態(tài)。 組成轉(zhuǎn)座子的旁側(cè) IS元件可以： ( ) 類型：選擇題 選擇： (a)同向 (b)反向 (c)兩個(gè)都有功能 (d)兩個(gè)都沒有功能 答案： ， b， c； 鑒定化合物的致癌性的一個(gè)通用實(shí)驗(yàn)是愛姆斯試驗(yàn)，通過營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌的回復(fù)突變確定其致癌性。 (4)編碼 cI蛋白的基因發(fā)生突變時(shí)會(huì)導(dǎo)致快速裂解。其結(jié)果為大量缺陷的 N蛋白和 Cro蛋白的合成。 (3)失活 λN基因的突變令導(dǎo)致滅活和降解。Cro最終會(huì)關(guān)閉所有早期基因的表達(dá) ,并通過誘導(dǎo)從 PQ 開始的表達(dá)從而誘發(fā)中期和后期基因的表達(dá)。 cro基因表達(dá)不需要誘導(dǎo)物，因此可以高水平表達(dá)。 (2)能夠阻止蛋白質(zhì)結(jié)合的 0R2突變體會(huì)導(dǎo)致裂解。由此導(dǎo)致的高濃度 cⅡ 蛋白有助于從 PRE和 P1 啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄，因此 cI蛋白 (阻抑蛋白 )、 cro反義 RNA、和整合酶 (λ噬菌體整合所需 )被合成。抗終止導(dǎo)致 c 又及 cro 基因下游的表達(dá)，從而 cⅡ 蛋白合成。 類型：簡(jiǎn)答題 答案： 253. 答： (1)產(chǎn)生蛋白酶抗性 cⅡ 蛋白的 λ噬菌體突變體會(huì)導(dǎo)致溶源 (1ysogeny)。 (3)使 λ基因失去作用的突變。 IS元件： ( ) 類型：選擇題 選擇： (a)全是相同的 (b)具有轉(zhuǎn)座酶基因 (c)是旁側(cè)重復(fù)序列 (d)引起宿主 DNA整合復(fù)制 (e)每代每個(gè)元件轉(zhuǎn)座 1000次 答案： 252． b， d； 請(qǐng)預(yù)測(cè)具有下列突變的 λ噬菌 體感染細(xì)菌的表型，并說明原因： (1)產(chǎn)生一個(gè)抗蛋白酶的 λcⅡ 蛋白的突變。分子生物學(xué)習(xí)題集 (2) 為什么 λ噬菌體感染產(chǎn)生的溶源菌通常對(duì)其他的 λ噬菌體的感染有免疫？ 答案： 251. 答： 首先感染的 λ噬菌體所生成的阻抑蛋白 cI 會(huì)立即與隨后感染的噬菌體基因組中的操縱基因結(jié)合，阻遏裂解所需的 cro和 N基因的表達(dá)。這樣再感染不會(huì)產(chǎn)生烈性噬菌體表型。 (2)具有阻止蛋白結(jié)合的 ΛOR2的突變。 (4)編碼入 cI蛋白的基因突變。 λ噬菌體感，染過程中，在 N蛋白 (從 PL的左側(cè)表達(dá) )使基因表達(dá)不在 N 基因下游終止前，所有的生理功能都是正常的。由于 λcⅡ 蛋白的突變體具有蛋白酶抗性，它的 活性并不依辭于被感染細(xì)胞的狀態(tài) (健康的或病態(tài)的 )，而且 cⅡ 蛋白并不維持 cⅡ 蛋白的整合。阻抑蛋白占據(jù) 0R 和 OL操縱基因，通過自調(diào)節(jié)促進(jìn)自身的合成 (從 PRM 表達(dá) )，從而防止更多的 N蛋白和 Cro蛋白的合成。 0R2搬突變體能夠防止 Cro蛋白和阻抑蛋白與之結(jié)合。 Cro蛋白也能與 OR3進(jìn)行非協(xié)同結(jié)合，由于有這種結(jié)合以及阻抑基因表達(dá)需要自身產(chǎn)物的自誘導(dǎo)，因此不能形成阻抑蛋白。綜上所述； Cro 會(huì)擺脫阻抑蛋白的影響。 N 基因的產(chǎn)物是一個(gè)抗終止子，是 N 和 cro基因外的其他基因表達(dá)所需的。因此噬菌體既不能進(jìn)入溶源狀態(tài)也不能進(jìn)入裂解途徑， DNA最終被降解。產(chǎn)生沒有功能的 阻抑蛋白不能與 0R 和 OL操縱基因結(jié)合，由于沒有了競(jìng)爭(zhēng)， Cro會(huì)擺脫阻抑蛋白的影響。用 λ 噬菌體和 設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)使之能用于致癌物的檢測(cè)。與操縱基因 區(qū)域結(jié)合的 λ阻抑蛋白 (cI)通過自調(diào)節(jié)使噬菌體保持溶源狀態(tài)。通過簡(jiǎn)易的噬菌斑分析，發(fā)現(xiàn)噬菌斑的出現(xiàn)與待測(cè)化學(xué)物質(zhì)的誘變性與致癌性有關(guān)。而且，許多 RNA病毒的基因組含有多個(gè)線性片段。因此 RNA 病毒的復(fù)制不是維持一個(gè) “有機(jī)物種 ”的藍(lán) 圖，而是維持依賴于宿主細(xì)胞機(jī)制產(chǎn)生后代的遺傳因子的感染性。解釋冗余的含義并說明這些分子是怎樣產(chǎn)生的。每個(gè)染色體都是序列 ABCDEFGH的不同循環(huán)形式，而且每個(gè)都具不同的末端冗余。一個(gè)宿主細(xì)胞被攜帶染色體 ABCDEFGHAB 的噬菌體感染后，這樣產(chǎn)生末端冗余：首先，復(fù)制產(chǎn)生這個(gè)染色體的多個(gè)拷貝；然后，這些拷貝的冗余端間發(fā)生交叉重組，產(chǎn)生長(zhǎng)度為幾個(gè)基因組 大小的 DNA 分子 ———個(gè)鏈狀結(jié)構(gòu)： ABCDEFDHA B A BCDEFGHA B A BCDEFGHAB 等等。每隔10個(gè)連續(xù)的字母切割 DNA就會(huì)產(chǎn)生一系列末端冗余而且循環(huán)變化的洲 A分子： ABCDEFGHAB， CEDFGHABCE， EFGHABCDEF 等等。另一方面，溫和噬菌體感染敏感細(xì)菌后有兩種選擇：如果能量充足 (環(huán)境條件很好 )時(shí)它可以進(jìn)入裂解周期并且像烈性噬菌體那樣裂解宿主細(xì)胞。在溶源化細(xì)胞中，噬菌體的基因組 (原噬菌體 )與細(xì)菌染色體同步復(fù)制，但大部分的噬菌體基因不 表達(dá)；然而，在某個(gè)時(shí)刻，當(dāng)環(huán)境條件重新好轉(zhuǎn)，原噬菌體可以進(jìn)入裂解周期，產(chǎn)生成熟的噬菌體。在大家都很熟悉階 P1溶源菌中，原噬菌體被作為獨(dú)立的質(zhì)粒保持著，但仍與細(xì)菌染色體同步復(fù)制。如果染色體先用 RNA酶處理，就會(huì)失去感染能力；另外，如果標(biāo)記感染的 RNA，在子代中不出現(xiàn)標(biāo)記。 類型：簡(jiǎn)答題 答案： ： MS2噬菌體的染色體為單鏈 (+)RNA，它的復(fù)制過程如下： (1)以 (+)鏈作為模板合成一個(gè)堿基互補(bǔ)的（ )鏈； (2)以這條()鏈作為模板合成大量的 (+)病毒鏈。相應(yīng)的酶是 RNA復(fù)制酶，它是 MS2一個(gè)基 因的產(chǎn)物。外切核酸酶 A只從突出的 5’端消化 DNA，而外切核酸酶 B 只攻擊自由的 3’端。外切核酸酶 A可消化該末端，這樣可以防止環(huán)化，從而使它不能在被感染的細(xì)胞中復(fù)制。 玉米控制因子： ( ) 類型：選擇題 選擇： (a)在結(jié)構(gòu)和功能上與細(xì)菌轉(zhuǎn)座子是相似的 (b)可能引起染色體結(jié)構(gòu)的許多變化 (c)可能引起單個(gè)玉米顆粒的表型發(fā)生許多變化 (d)在植物發(fā)育期間的不同時(shí)間都有活性 答案： ， b， c， d； Ds 元件： ( ) 類型：選擇題 選擇： (a)是自主轉(zhuǎn)座元件 (b)是染色體斷裂的位點(diǎn) (c)與 Ac 元件相似 (d)內(nèi)部有缺失 (e)沒有末端倒位重復(fù) (f)靠一種非復(fù)制機(jī)制轉(zhuǎn)座 答案： ， c， d； 下面哪些是在反轉(zhuǎn)錄病毒中發(fā)現(xiàn)的基因 ?( ) 類型：選擇題 選擇： (a)gag (b)pol (c)env (d)onc 答案： ， b， c， d； 反轉(zhuǎn)錄病毒 LTR： ( ) 類型：選擇題 選擇： (a)在病毒基因組的 RNA中發(fā)現(xiàn) (b)整 合到宿主染色體上產(chǎn)生 (c)包含一個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子 答案： ， c； 宿主染色體在反轉(zhuǎn)錄病毒整合位點(diǎn)上會(huì)發(fā)生什么 ?( ) 類型：選擇題 選擇： (a)4—6個(gè)核苷酸被切除 (b)4—6個(gè)核苷酸在整合的一邊被復(fù)制而在另一邊被切除 (c)4—6 個(gè)核苷酸在整合的每一邊都被復(fù)制 (d)兩個(gè)核苷酸從右邊被切除 (e)兩個(gè)核苷酸從左邊被切除 答案： ； 下面哪些是 LTR 的組分 ?( ) 類型：選擇題 選擇： (a)U3 (b)U4 (c)R (d)U5 答案： ， c， d； 反轉(zhuǎn)錄病毒的整合酶： ( ) 類型：選擇題 選擇：（ a） 是一種位點(diǎn)特異性內(nèi)切核酸酶 （ b） 在 LTR 上起外切核酸酶的作用 (C)在靶DNA上產(chǎn)生交互切口 答案： ， c； 可衡量單個(gè)侵染周期中病毒數(shù)量增加的一步生長(zhǎng)曲線對(duì)確定噬菌體和細(xì)菌相互作用基本參數(shù)是很重要的，請(qǐng)思考下面 T4 噬菌體的一步生長(zhǎng)曲線?；旌虾?5 分鐘，兩份被侵染的細(xì)菌重復(fù)樣品 中加入氯仿振蕩以殺死細(xì)菌，一份樣品中加入溶菌酶破裂細(xì)胞，另一份不加酶，氯仿和溶菌酶對(duì)T4 都無影響，測(cè)定所有樣品中噬菌體的效價(jià)，結(jié)果如圖 6． 1所示。 (2)5分鐘后噬菌體的效價(jià)較開始約低 10倍。這種開始的效價(jià)降低 (專業(yè)術(shù)語稱這為侵染的潛伏期 )一直令人迷惑，因?yàn)樗凳驹谛碌氖删w產(chǎn)生前親代噬菌體必須被破壞。 (3)在對(duì)照樣品中噬菌體效價(jià)的上升較慢，因?yàn)樵S多噬菌體 (20—40 分鐘間 90％的噬菌體 )被困在氯仿殺死的細(xì)菌中。對(duì)照樣品的效價(jià)最終達(dá)到受溶菌酶處理樣品的水平，因?yàn)樵谇秩窘Y(jié)束時(shí)，細(xì)菌自然地裂解，裂解是由噬菌體控制的，因此在寄主被破壞前，噬菌體的數(shù)目達(dá)到最大。 在這個(gè)例子中，每個(gè)侵染細(xì)菌的噬菌體數(shù)計(jì)算并不這樣簡(jiǎn)單，通常說的細(xì)菌與噬菌體的 1： 1混合，并不意味 著每個(gè)細(xì)菌只被一個(gè)噬菌體侵染，多數(shù)細(xì)菌只被一個(gè)噬菌體侵染，但一些可被兩個(gè)或更多噬菌體侵染，同時(shí)有一些將不會(huì)被侵染。 題目圖片： δ元件 ( ) 類型：選擇題 選擇：（ a）是具 有活性的啟動(dòng)子 (b)Ty乃轉(zhuǎn)座時(shí)可留在基因組 DNA 后面 答案： ， b； Copia 元件： ( ) 類型：選擇題 選擇： (a)在 drosophla 基因組中約有 20220個(gè)拷貝 (b)串聯(lián)排列 (c)兩例為定向重復(fù) （ d）不被轉(zhuǎn)錄 (e)與反轉(zhuǎn)錄病毒的 env基因有同源性 答案： c； 把少量 T4 噬菌體與過量的大腸桿菌細(xì)胞系 B 混在一起，然后在含一層厚營(yíng)養(yǎng)瓊脂 細(xì)菌培養(yǎng)基的表面上鋪一層薄的軟瓊脂層，細(xì)菌長(zhǎng)成一片連續(xù)的菌苔。一種已觀察到的病毒突變可以改變噬菌斑的形狀，噬菌體 T4 的 “r”突變體首先被注意到，因?yàn)樗鼈兛梢栽诖竽c桿菌 B 的菌落中形成更大的噬菌斑扛（ r表快速溶菌 )。它們?cè)诖竽c桿菌 B上可辨的噬菌斑形態(tài)及無法在大腸桿菌 K中生長(zhǎng)的特性，很早就被用于鑒定突變的一般性質(zhì)和遺傳密碼的三聯(lián)結(jié)構(gòu)。首先，你做了一系 列斑點(diǎn)測(cè)試，用高濃度的突變1和突變分別侵染兩個(gè)大腸桿菌 K 平板，這樣，每個(gè)平板上大部分細(xì)菌都被侵染了，然后你在平板上依次滴一滴每種突變型和野生型 T4噬菌體使之排列成環(huán)狀。 2的結(jié)果。為了確定在清晰斑上出現(xiàn)的是哪種噬菌體，你從野生斑和突變 5 形成的清晰斑中收集一些噬菌體并檢測(cè)它們