流式細(xì)胞術(shù)的樣品制備-展示頁(yè)
2025-05-22 07:14本頁(yè)面
【正文】 ① 將適合于酶消化的組織置于離心管中。 為使組織細(xì)胞分散下來(lái)，應(yīng)用酶學(xué)方法必須注意條件的選擇和影響因素： ※ 酶需要溶解于適當(dāng)?shù)娜芤褐?，而這種溶液不致于造成 酶效價(jià)降低 ※ 注意組織在消化液中的消化時(shí)間 ※ 注意酶活性的 PH值 ※ 注意酶的適用濃度 ※ 隨時(shí)注意影響酶活性的其他因素 各種酶的分散程度都有一定的限制性，特別是在進(jìn)行免疫標(biāo)記實(shí)驗(yàn)時(shí)，酶處理可能改變細(xì)胞膜的成分，從而影響細(xì)胞亞群的區(qū)分。 ﹡ 三是可以水解組織間的粘多糖物質(zhì)。 新鮮實(shí)體組織單細(xì)胞懸液制備方法如下 ： ⒈酶消化法 ⒉機(jī)械法 ?剪碎法 ?網(wǎng)搓法 ?研磨法 ⒊化學(xué)試劑處理法 ⒈ 酶消化法 酶對(duì)實(shí)體組織分散作用原理主要有三方面： ﹡ 一是可以破壞組織間的膠原。 如果不是及時(shí)上機(jī)檢測(cè)，則需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定，常規(guī)固定液為 70%乙醇，然后保存于 4℃ 冰箱中。 如果不是及時(shí)上機(jī)檢測(cè)，則需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定，常規(guī)固定液為 70%乙醇，然后保存于 4℃ 冰箱中。 一、單層培養(yǎng)細(xì)胞分散為單個(gè)細(xì)胞 ㈠貼壁的單層培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備 操作步驟： 將單層培養(yǎng)細(xì)胞 (對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 )中的舊培養(yǎng)液倒掉。流式細(xì)胞術(shù)的樣品制備 FCM的樣品制備包括單分散細(xì)胞懸液制備技術(shù)，細(xì)胞生物學(xué)特征標(biāo)記技術(shù)及熒光染色技術(shù)， FCM是對(duì)細(xì)胞或細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)和某些功能進(jìn)行定量測(cè)定，并可以根據(jù)細(xì)胞亞群的特點(diǎn)性質(zhì)對(duì)其進(jìn)行分類的技術(shù)。 FCM的實(shí)驗(yàn)對(duì)象是單細(xì)胞或單細(xì)胞核的懸液，在FCM技術(shù)中制備出合格的單細(xì)胞懸液是非常重要的環(huán)節(jié)，這些單細(xì)胞懸液主要來(lái)源于單層細(xì)胞、血液、脫落細(xì)胞、實(shí)體組織及石蠟包埋組織等。 加入少量 %胰酶，消化細(xì)胞，在倒置顯微鏡下觀察，見(jiàn)細(xì)胞稍變圓時(shí)，立即終止消化（假如含有 10%胎牛血清的培養(yǎng)基），收集細(xì)胞，離心后去上清， PBS液洗滌細(xì)胞一次，離心去掉上清液，約留 ，用振蕩器使細(xì)胞分散。 （二）懸浮培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備 操作步驟： 離心去除舊培養(yǎng)液， PBS液洗滌細(xì)胞一次，離心去掉上清液，約留 ，用振蕩器使細(xì)胞分散。 二、實(shí)體組織單分散細(xì)胞的制備 ㈠新鮮實(shí)體組織 新鮮實(shí)體組織是手術(shù)或活檢后根據(jù)檢測(cè)目的而采取的樣品，此樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋４嫣幚?，如及時(shí)用固定劑或低溫對(duì)組織進(jìn)行保存，以避免由于室溫過(guò)高、放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而造成組織自溶，影響檢測(cè)結(jié)果。 ﹡ 二是可以水解組織細(xì)胞的緊密連結(jié)裝置的蛋白性物質(zhì)。 酶消化法是實(shí)體組織分散為單細(xì)胞的主要方法，常用的酶類試劑有： ? 蛋白酶類， (如胃蛋白酶，木瓜蛋白酶，
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