【正文】 2年醫(yī)學檢驗免疫檢驗考試輔導：腫瘤壞死因子的生物效應腫瘤壞死因子的生物效應：TNF對多種腫瘤細胞均有殺傷或抑制作用，敏感性因腫瘤細胞類型而異；TNF呈劑量依賴性地抑制病毒介導的細胞病變的發(fā)展，對RNA病毒和DNA病毒均有抑制作用；TNF能夠增強T細胞產(chǎn)生以IL2為主的淋巴因子，提高IL2R的表達水平，促進T細胞增殖；還能促進B細胞增殖、分化和產(chǎn)生抗體；TNF有中性粒細胞和單核細胞趨化作用，并使之活化和脫顆粒，釋放炎癥介質(zhì)；TNF可刺激成骨細胞內(nèi)的堿性磷酸酶活性，誘導成骨細胞吸收骨質(zhì)、使軟骨細胞進行軟骨更新，抑制軟骨形成。（4）鹽類結(jié)晶及酸堿度：生理性尿混濁的主要原因是含有較多的鹽類，常見有：①尿酸鹽結(jié)晶：在濃縮的酸性尿遇冷時，可有淡紅色結(jié)晶析出。（2）飲水及尿量：大量飲水、尿量多則尿色淡；尿色深見于尿量少、飲水少或運動、出汗、水分丟失。臨床應用僅作參考2012年醫(yī)學檢驗基礎知識輔導：尿的質(zhì)量控制，鹽類結(jié)晶析出、尿膽原轉(zhuǎn)變?yōu)槟蚰懰?、細菌增殖和腐敗、尿素分解，均可使尿顏色加深、混濁度增高?012年醫(yī)學檢驗基礎知識輔導：尿的方法學評價尿色和透明度判斷，受主觀因素影響。膽汁淤積性肝硬化ALT活性較高可與黃疸平行，AST升高不及ALT顯著。①液相酶免疫測定：其測定靈敏度與放射免疫方法相近，近年有取代放射免疫方法的趨勢。②克隆酶供體免疫分析：DNA重組技術可分別合成某種功能酶（如βD半乳糖苷酶）分子的兩個片段，大片段稱為酶受體（EA），小分子稱作酶供體（ED），兩者單獨均無酶活性，一定條件下結(jié)合形成四聚體方具酶活性。2012年醫(yī)學檢驗考試綜合知識輔導：均相酶免疫測定均相酶免疫測定：屬于競爭結(jié)合分析方法。（2）油鏡：選擇滿意的片膜段，觀察200～500個細胞，按細胞的種類、發(fā)育階段分別計算，并計算它們各自的百分率；仔細觀察各系統(tǒng)的增生程度和各階段細胞數(shù)量和質(zhì)量的變化。髂骨后上棘此處骨皮質(zhì)薄，骨髓腔大，進針容易，骨髓液豐富，被血液稀釋的可能性小，故為臨床上首選的穿刺部位。骨髓穿刺部位選擇一般要從以下幾個方面考慮：①骨髓腔中紅骨髓豐富；②穿刺部位應淺表、易定位；③應避開重要臟器。此法不僅可作為一個光化學分析方法獨立使用，而且可作為一個有特色的光檢測器，與氣相色譜儀聯(lián)用，或作為一種試樣原子化裝置，用于原子吸收光譜法中。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：火焰分光光度法的應用火焰分光光度法主要用于堿金屬和堿土金屬元素的定量分析。由于當時使用照相方法記錄譜線，致使準確定量分析工作較為繁瑣。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：火焰分光光度法的簡史，就是火焰分光光度法的起源，用此法發(fā)現(xiàn)了許多新元素。不同的燃料氣體和助燃氣組分，及其配比，稱助/燃比，決定該化學火焰能達到的最高溫度和化學作用性質(zhì)（見表）。反射鏡起聚光作用。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：火焰分光光度法的儀器原始的火焰光度計由霧化器、火焰燃燒嘴、濾光片和光電池檢測器組成。雖非常敏感，但影響因素多，顯色不穩(wěn)定，重復性也較差，不能用于常規(guī)檢驗。磷鉬酸法是血清中無機磷與鉬酸鹽結(jié)合形成磷鉬酸化合物，再用還原劑將其還原成鉬藍進行比色測定。試驗也證明5個小時以后，使用vc的病人每毫升尿含vc幾十毫克，已經(jīng)屬于正常值，不再干擾檢驗結(jié)果。叢玉隆說，假如一個糖尿病人，沒吃vc以前的尿糖是2個加號，吃了9片vc后，就可能是1個加號，甚至會出現(xiàn)陰性結(jié)果。一組人一天吃6片vc，第二天尿含vc90毫克。叢玉隆再仔細檢查后，發(fā)現(xiàn)在抽取病人血樣時，患者正輸著vc，結(jié)果終于弄明白了，原來是患者血樣中含有的大量vc還原了檢驗試劑中的酶，干擾了病人的血糖檢驗結(jié)果。急診醫(yī)生一看檢驗報告馬上產(chǎn)生疑問：怎么會是8毫克？人的正常血糖最低是80毫克，如果真是8毫克，那這個人早就死了。第一次遇到尿糖檢測失真是在1984年，叢玉隆還是醫(yī)院檢驗科的檢驗員。若不能立即測定，應將血氣標本保存在2～8℃容器內(nèi)，但即使這樣待測時間也不宜超過2小時。未充分動脈化的毛細管血的PO2偏低，對PH、PCO2和HCO3—的測定結(jié)果影響不明顯。因技術條件限制，不能反復動脈穿刺時，早產(chǎn)兒與小嬰兒可在足后跟用肝素化毛細管采取動脈化毛細血管的血亦可。二、采血方法的選擇成人：用肝素化的玻璃注射器或一次性注射器穿刺，采血部位首選橈動脈，次選股動脈小兒：首選用顳淺動脈或頭皮小動脈，嚴格消毒后，用肝素化的5號頭皮針連接2ml注射器，待動脈血流至注射器乳頭時，立即用小止血鉗分別夾住頭皮針塑料軟管首尾兩端（），然后拔出針頭立即混勻送檢。每抽血氣前，用2ml注射器抽取肝素稀釋液2ml，完全濕潤整個針管后棄去肝素液，殘留在針頭及針管頭部死腔內(nèi)的肝素液即可起到抗凝作用。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達與其自身密度相等的梯度層里，即達到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。要求在離心前預先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。本法可分離各種細胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。常用的離心機有多種類型，一般低速離心機的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機在25000rpm以下，超速離心機的最高速度達30000rpm以上。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細胞、細胞器、病毒和生物大分子等。根據(jù)被分離物質(zhì)的浮力密度差別進行分離，所用的介質(zhì)起始密度約等于被分離物質(zhì)的密度，介質(zhì)在離心過程中形成密度梯度，被分離物質(zhì)沉降或上浮到達與之密度相等的介質(zhì)區(qū)域中停留并形成區(qū)帶。需要離心分離的樣品可和梯度介質(zhì)先均勻混合，離心開始后，梯度介質(zhì)由于離心力的作用逐漸形成管底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時，可以帶動原來混合的樣品顆粒也發(fā)生重新分布，到達與其自身密度相等的梯度層里，即達到等密度的位置而獲得分離。3）自成梯度等密度離心法。要求在離心前預先配制管底濃而管頂稀的密度梯度介質(zhì)，常用介質(zhì)有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分離樣品一般鋪在梯度液頂上，如需挾在梯度液中間或管底部，則需調(diào)節(jié)樣品液密度。本法可分離各種細胞、病毒、染色體、脂蛋白、DNA和RNA等生物樣品。離心前，離心管內(nèi)先裝入分離介質(zhì)（如蔗糖、甘油等），使形成連續(xù)的或不連續(xù)的密度梯度介質(zhì)，然后加入樣品進行離心，具體又可分為：1）速度區(qū)帶離心法。通過逐步增加相對離心力，使一個非均相混合液內(nèi)形狀不同的大小顆粒分步沉淀。常用的離心機有多種類型，一般低速離心機的最高轉(zhuǎn)速不超過6000rpm，高速離心機在25000rpm以下，超速離心機的最高速度達30000rpm以上。這里的懸浮顆粒往往是指制成懸浮狀態(tài)的細胞、細胞器、病毒和生物大分子等。兩類離心機由于用途不同，故其主要結(jié)構(gòu)也有差異。離心機的種類很多，按照使用目的，可兩類，即制備型離心機和分析型離心機。血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝解毒中起重要作用，如SeO3，硒等。因為胰蛋白酶已經(jīng)被廣泛用于貼壁細胞的消化傳代。對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。2012年醫(yī)學檢驗考試免疫檢驗輔導：血漿的主要作用提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質(zhì)。將新鮮血液離心，使血細胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。人體含有27503300毫升血漿，約占血液總體積的55%.血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質(zhì)主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機鹽離子、激素以及二氧化碳。經(jīng)三次取樣化驗，結(jié)果仍然找不到精子方可確認無精子癥。見不動精子，須染色方可區(qū)分：不活動的精子、死精子、未成熟精子等。因此血常規(guī)手工操作不能丟；2012年醫(yī)學檢驗考試臨檢基礎知識輔導：精液檢查的具備條件受檢者，經(jīng)歷一段經(jīng)常排精過程后，禁房事5－7天（上次排精到取標本間隔時間至少不得少于100小時）；備大口有蓋清潔干燥容器一個，以手淫方式獲取精液，一次全部射入容器，蓋上蓋，記錄標本離體時間；貼身保溫，30分鐘內(nèi)送到化驗室，并向檢驗員提供標本取出時間。二、復檢內(nèi)涵尚待統(tǒng)一有人認為“復檢”就是要在鏡下重新進行白細胞分類計數(shù)而己，這是偏面的。最近日本名古屋大學醫(yī)學部附屬醫(yī)院報告，他們用SysmexXE2100（五分類）%.再次證明當前最先進血細胞分析儀也不能完全替代人工檢查。根據(jù)1987年我赴日本考察時，日本對三分群儀器白細胞分類是不收費的，而且每一例仍然需要涂片染色，在顯微鏡下重新分類后才能報告。尤其是白細胞形態(tài)學分類與血細胞分析儀的白細胞分類有本質(zhì)上的不同，三分群僅僅是根據(jù)細胞大小來分而己，即使先進的五分類也與形態(tài)學也有很大差異，又如中性粒細胞毒性病變、變異淋巴細胞、瘧原蟲等臨床需要的指標無法顯示；有的幼稚細胞、有核紅細胞也不能區(qū)分；各參數(shù)之間有時還存在互相干擾?，F(xiàn)就此問題談談個人看法。據(jù)我所知有的醫(yī)院有了血細胞分析儀，把人工操作的工具、試劑全丟棄，基本上不再復檢了。2012年醫(yī)學檢驗考試臨檢基礎知識輔導：重視血常規(guī)的復檢工作目前血細胞分析儀己經(jīng)普及到縣醫(yī)院或衛(wèi)生院，這對提高血細胞常規(guī)的準確性和重復性，減輕工作人員勞動強度起促進作用。（二）免疫熒光實驗（IFA）IFA法經(jīng)濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用于WB不確定樣品的診斷。如果出現(xiàn)HIV2型的特異性指示條帶，需用HIV2型免疫印跡試劑再做HIV2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV2抗體血清學陽性，并將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，WB的敏感性一般不低于初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基于HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的準確性。確認試驗流程：有HIV1/2混合型和單一的HIV1或HIV2型。2012年醫(yī)學檢驗考試血液檢驗復習輔導：HIV抗體確認實驗免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEKHIVⅢ）、放射免疫沉淀試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。其中對病毒抗體的檢測是最常規(guī)使用的方法，這不但是由于這類檢測特異性、敏感性較高，方法相對簡便、成熟，更重要的原因是HIV抗體在病毒感染后除早期短暫的“窗口期”外的整個生命期間長期穩(wěn)定地存在并可被檢測到。，表明有不同程度的生育障礙。2012年醫(yī)學檢驗考試臨檢基礎知識輔導：精液的男性生育力指數(shù)測定【計算公式】I=M（NV）/（A106）式中I為男性生育力指數(shù)；M為活動精子百分率；N為每毫升的精子數(shù)；V為精子運動的速度；A為畸形精子的百分率。當有糖供體、二價錳離子與O型紅細胞共同孵育時，羊水中的轉(zhuǎn)移酶可在紅細胞膜上合億A或B物質(zhì)，利用血型測定的方法可檢測埋分泌型胎兒的血型。二、ABH（O）血型酶的測定羊水ABH血型物質(zhì)的測定，無法預測非分泌型胎兒的血型。：11：256倍比稀釋后，將2%A，B，置室溫1小時后觀察結(jié)果，以出現(xiàn)4+凝塊的最高稀釋度定為最適稀釋度。本試驗最關鍵的部分是要選擇好抗血清的最適稀釋度。馮分作用10min后，便血型物質(zhì)將抗體中和完全，再于各管加入相對應的2%標準A型，B型，充分混勻。2012年醫(yī)學檢驗考試生化檢驗輔導：胎兒血型的預測羊水中存在ABH（O）血型物質(zhì)，故可在妊娠期預測胎兒的血型，以便對母體胎兒血型不合者進行圍生期監(jiān)護、治療和對新生兒的作好搶救準備。胞質(zhì)量豐富，染色淡藍或灰藍色，有透明感，邊緣處著色較深藍色。Ⅲ型（不規(guī)則型）：胞體較大，外形常不規(guī)則，可有多數(shù)足。Ⅱ型（幼稚型）：胞體較大，核圓形或卵圓形。染色質(zhì)粗糙，呈粗網(wǎng)狀或小塊狀，排列不規(guī)則。胞體比正常淋巴細胞稍大，多為圓形、橢圓形或不規(guī)則形。2012年醫(yī)學檢驗考試血液檢驗輔導：異型淋巴細胞在傳染性單核增多癥、病毒性肺肝炎、流行性出血熱等病毒感染或過敏原則刺激下，可使淋巴細胞增生，并出現(xiàn)某些形態(tài)學變化，稱為異型淋巴細胞。在β巰基乙醇和8M尿素作用下，發(fā)生變性，失去生物學活性，變性后如經(jīng)過透析去除尿素，β巰基乙醇，并設法使疏基氧化成二硫鍵，酶蛋白又可恢復其原來的構(gòu)象，生物學活性也幾乎全部恢復，此稱變性核糖核酸酶的復性。變性并非是不可逆的變化，當變性程度較輕時，如去除變性因素，有的蛋白質(zhì)仍能恢復或部分恢復其原來的構(gòu)象及功能，變性的可逆變化稱為復性。在臨床醫(yī)學上，變性因素常被應用于消毒及滅菌。引起蛋白質(zhì)變性的原因可分為物理和化學因素兩類。變性蛋白質(zhì)只有空間構(gòu)象的破壞，一般認為蛋白質(zhì)變性本質(zhì)是次級鍵，二硫鍵的破壞，并不涉及一級結(jié)構(gòu)的變化。某些酶能與底物形成極不穩(wěn)定的、共價結(jié)合的ES復合物，這些復合物比無酶存在時更容易進行化學反應。底物的結(jié)合可誘導酶分子構(gòu)象發(fā)生變化，比底物大得多的酶分子的三、四級結(jié)構(gòu)的變化，也可對底物產(chǎn)生張力作用，使底物扭曲，促進ES進入活性狀態(tài)。二、中間復合物學說目前一般認為，酶催化某一反應時，首先在酶的活性中心與底物結(jié)合生成酶－底物復合物，此復合物再進行分解而釋放出酶，同時生成一種或數(shù)種產(chǎn)物，此過程可用下式表示： ES的形成，改變了原來反應的途徑，可使底物的活化能大大降低，從而使反應加速。酶能顯著地降低活化能，故能表現(xiàn)為高度的催化效率。這種提高低能分子達到活化狀態(tài)的能量，稱為活化能。2012年醫(yī)學檢驗考試臨檢基礎輔導：精液的精子活動率檢測【正常參考值】正常精子活力一般在Ⅲ級（活