【正文】 院 （ 3）葉 馬鈴薯先出土的葉是初生葉，全緣，心臟形。 (2)莖 馬鈴薯分地上部分和地下部分，地上主莖在形成 16片葉子后，由花芽封頂，并在花的下部發(fā)生兩個側(cè)枝，從而構(gòu)成馬鈴薯的主要同化系統(tǒng)。 濱 州 職 業(yè) 學 院 法國 Morel和他的同事們，1955年從患病馬鈴薯植株中選取到了無病植株，為治療作物病毒開辟了新途徑。由于馬鈴薯是無性繁殖作物，病毒逐代積累，日益嚴重，引起嚴重退化。 濱 州 職 業(yè) 學 院 但是， 當發(fā)現(xiàn)從外地引種栽培 1~2個周期后，明顯發(fā)現(xiàn)產(chǎn)量降低，植株變矮，并有卷葉的現(xiàn)象產(chǎn)生，經(jīng)檢測證明這是由于病毒引起的退化現(xiàn)象。適應性廣，營養(yǎng)價值高，耐貯藏適運輸，既是一種重要的糧食作物也是一種調(diào)節(jié)市場供應的重要蔬菜。 濱 州 職 業(yè) 學 院 第五節(jié) 馬鈴薯的脫毒培養(yǎng) 目的要求 : (1)掌握馬鈴薯脫毒培養(yǎng)的大致過程， 了解馬鈴薯脫毒苗的鑒定方法 。 移栽及其管理 培養(yǎng) 3—5天后，將其移栽至至花盆中，其 中注意事項與前面的相同。 ? 在莖尖生長點劃一小口。 ? 接種到 MS固體培養(yǎng)基中的芽放回 28℃ 暗培養(yǎng) 34天。 ? 玉米組培苗移栽時首先應把根部的培養(yǎng)基清洗干凈，以免受細菌或真菌污染而影響幼苗生長。 玉米幼胚組織培養(yǎng)的全過程 準備工作 ? 接種室消毒 ? 準備誘導培養(yǎng)基（ N6+肌醇 +L脯氨酸+蔗糖 30g/L+瓊脂 7g/L+水解酪蛋白+2,4D2mg/mL) ? 滅菌 外體消毒及挑幼胚 75%酒精擦玉米外層葉片 至超凈工作臺，用 75%酒精擦玉米外層葉片，剝一層擦一層至完 用刀去掉 1/3玉米籽粒 挑幼胚 接種到準備好的誘導培養(yǎng)基上 （暗培養(yǎng)） 繼代 ? 準備繼代培養(yǎng)基 (N6+水解酪蛋白 +L脯氨酸 +甘露醇 20g/L+蔗糖 30g/L+瓊脂 +2,4D1mg/ml) ? 誘導兩次后，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基每 7天繼代一次，直至出透明、黃色、堅硬的愈傷組織，可用于轉(zhuǎn)化 （一般繼代三次 ） 轉(zhuǎn)化 ? 侵染培養(yǎng)（ 2225℃ ，暗培養(yǎng) 3天） ? 恢復培養(yǎng)（暗培養(yǎng) 3天） ? 篩選培養(yǎng) ? 分化培養(yǎng) ? 生根培養(yǎng) ? 壯苗 移栽及管理 ? 移栽前，應對移栽用的基質(zhì)進行滅菌。 玉米幼胚的組織培養(yǎng) 玉米幼胚屬于二倍體， 且分生能力較強。 玉米莖尖和根尖離體培養(yǎng) 玉米植株的根尖和莖尖分生組織具有良好的分化性能。例如：幼胚、花 藥、幼穗等，其中幼胚是最易誘導，也是目前最常用的外植體。 ? 1975年， Green和 Phillips首次用 A188的幼胚作外植體 ， 誘導出二倍 體 愈傷組織 ，并再生得 到第一株無性系植株。 第四節(jié) 玉米組織培養(yǎng) 主要內(nèi)容： ? 植物組織培養(yǎng)的意義 . ? 玉米組織培養(yǎng)的目的 . ? 研究進展 . ? 目前玉米組織培養(yǎng)的主要方法 . 植物組織培養(yǎng)的意義 ? 植物組織培養(yǎng)可以生產(chǎn)大量的優(yōu)良無性系 . ? 細胞融合可打破種屬間的界限，克服遠緣雜交不親和性障礙 . ? 可獲得單倍體、三倍體及其它多倍體、非整倍體 . ? 組織培養(yǎng)的植物細胞也成為在細胞水平上分析研究的理想材料 . 玉米組織培養(yǎng)的目的 ? 玉米組織培養(yǎng)的目的是讓外植體能夠高頻率地誘導出愈傷組織，建立高效 的體細胞再生體系 ，為玉米遺傳轉(zhuǎn)化和細胞工程研究創(chuàng)造有利條件 。 ，可以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化，外源基因在后代中不易丟失或發(fā)生致命的突變，是很有前途的研究領域。 單倍體 二倍體 AB AABB aB aaBB Ab AAbb ab aabb 供體親本AaBb 花培 ，對育種學及遺傳基礎研究都有很重要的意義。 供體植株小孢子（ n） 花培 花粉植株（ n） 雄核發(fā)育 自然加倍 人工加倍 純合植株 DH（ 2n） 一年內(nèi)獲得純系 例子： 二倍體供體植株基因型為 AaBb，若要從后代中選擇基因為AAbb的純合單株 常規(guī)方法 ： AAbb出現(xiàn)的概率為 1/16，并且不能將 AAbb與Aabb、 aAbb區(qū)分開。 （ 4）雜交鑒定法 自交或測交鑒定，看后代分離情況確定二倍體植株是來自小孢子還是體細胞。 （ 2）細胞形態(tài)學鑒定法 葉片保衛(wèi)細胞大小、單位面積上的氣孔數(shù)及保衛(wèi)細胞中葉綠體的大小和數(shù)目與倍性具有高度的相關(guān)性。 （ 4）培養(yǎng)條件 溫度、光照、密度 染色體直接計數(shù)法 通常取根尖、莖尖等分生組織區(qū)進行制片，直接計數(shù)染色體數(shù)目。一般認為，對秈型水稻采用復合激素較好。 郭書巧等提出對秈粳交材料 2 mg/L 2,4D+1 mg/L NAA+ mg/L KT為最佳的激素誘導配比， mg/L 6BA+ mg/L KT分化效果較好。 激素配比 生長素類一般有 2,4D、 NAA、 IAA等， 細胞分裂素一般有 6BA、 KT等。 培養(yǎng)基 三明市農(nóng)科所生物技術(shù)中心以 M N6和 NB培養(yǎng)基， 進行了不同水稻品種材料花培觀察比較試驗， 結(jié)果從出愈率、 綠苗分化率兩者比較， 還是 M8 培養(yǎng)基較適合。 （ 2）培養(yǎng)基和激素配比選擇 應用于水稻花培的基本培養(yǎng)基種類較多， 如N 馬鈴薯培養(yǎng)基、 L SK 土豆培養(yǎng)基、Miller、 合 通用、 LS、 White、 MS、 M8和改良 M8等。同一物種中的不同基因型對小孢子離體誘導反應差異較大。花藥條件培養(yǎng)基、子房條件培養(yǎng)等。 看護培養(yǎng) 利用花藥或花藥愈傷組織釋放出的活性物質(zhì)促進花粉小孢子發(fā)育。 雙層培養(yǎng) 花粉置固體 液體雙層培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 小孢子純化 對上述方法獲得的小孢子混合物進行分級過篩、梯度離心處理純化小孢子 小孢子梯度離心前后比較 梯度離心前 （小孢子形態(tài)、活力不一致） 30%蔗糖梯度離心后 （獲得均一的小孢子群體） ? 花粉培養(yǎng)方式 平板培養(yǎng) 花粉置