20xx人教版高中生物選修3專題1第2節(jié)基因工程的基本操作程序-文庫吧資料
2024-11-24 22:31本頁面
【正文】 C堿基對 ， G、 C之間含三個氫鍵 ， 熱穩(wěn)定性高 。 [解析 ] (1)切割前質(zhì)粒為環(huán)狀 ， 不含游離的磷酸基團 。 (5)為了獲取重組質(zhì)粒 ， 將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合 ， 并加入 ________酶 。 (3)用圖中的質(zhì)粒和外源 DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒 ， 不能使用SmaⅠ 切割 ， 原因是 ________。 請回答下列問題： (1)一個圖 1所示的質(zhì)粒分子經(jīng) SmaⅠ 切割前后 ， 分別含有________個游離的磷酸基團 。 ④ 有時需要確定目的基因表達的產(chǎn)物存在于細胞的什么部位 ， 往往要加上可以標記存在部位的基因 (或做成目的基因與標記基因的融合基因 )， 如綠色熒光蛋白基因等 。 ② 目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標記 。 知識貼士： ① 生物之間進行基因交流 ， 需使用啟動子和終止子才能比較有利于基因的表達 。 (3)將切下的基因片段 ， 插入到質(zhì)粒的切口處 ， 再加入適量DNA連接酶 ， 使質(zhì)粒與目的基因結(jié)合成重組質(zhì)粒 。 如果以質(zhì)粒為載體 ， 將目的基因與質(zhì)粒結(jié)合的步驟是： (1)用一定的限制酶切割質(zhì)粒 ， 使其出現(xiàn)一個有黏性末端的切口 。 (4)標記基因 鑒別受體細胞中是否含有目的基因 ， 從而將含有目的基因的細胞篩選出來 ， 如抗生素抗性基因就可以作為這種基因 。 (3)終止子 位于基因的尾端 ， 也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA短片段 。 (1)目的基因 外源 DNA分子的有效片段 。 1． 構(gòu)建目的：其目的是使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在 ， 并且可以遺傳給下一代 ， 同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用 。 ①④ 則均不需要模板 。 即將雙鏈 DNA之間的氫鍵打開 ， 變成單鏈 DNA， 作為聚合反應(yīng)的模板 。 [解析 ] 獲取目的基因的方法較多 ， 甲是通過限制酶獲取目的基因 ， 但由于切割位點可能在基因內(nèi)部 ， 故可能得不到想要的目的基因；乙是通過信使 RNA逆轉(zhuǎn)錄形成 DNA(目的基因 )的過程；此外 ， 還可通過蛋白質(zhì)中氨基酸的排列順序推測基因的脫氧核苷酸序列 ， 再進行化學(xué)合成 。 (2)在乙圖中 ， c過程在遺傳學(xué)上稱為 ________， d過程稱為________， d過程需以 mRNA為模板 ， ________為原料 ， 還需要的條件是 ATP、 ________、 DNA聚合酶等 。 (1)在甲圖中 ， a過程是在 ________酶的作用下完成的 。 目的基因的分離是基因工程研究中的主要方面和操作關(guān)鍵 。 (2)化學(xué)合成法：即依照某一蛋白質(zhì)的氨基酸序列 ， 通過密碼子推算出其基因序列 ， 然后直接合成目的基因 。 3． 人工合成目的基因： 人工合成目的基因的方法主要有兩種 。 擴增的過程是：目的基因DNA受熱變性后解鏈為單鏈 ， 引物與單鏈相應(yīng)互補序列結(jié)合 ，然后在 DNA聚合酶作用下進行延伸 ， 如此重復(fù)循環(huán)多次 。 2． 利用 PCR技術(shù)擴增目的基因： PCR技術(shù)是利用 DNA雙鏈復(fù)制的原理 ， 將基因的核苷酸序列不斷地加以復(fù)制 ， 使其數(shù)量呈指數(shù)方式增加 。 如果用某種生物發(fā)育的某個時期的 mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補 DNA(也叫 cDNA)片段 ， 與載體連接后儲存在一個受體菌群中 ， 那么 ， 這個受體菌群體就叫做這種生物的cDNA文庫 。做法是：將某種生物體內(nèi)的 DNA全部提取出來 ， 選用適當(dāng)?shù)南拗菩院怂醿?nèi)切酶 ， 將 DNA切成一定范圍大小的 DNA片段 ， 然后 ， 將這些 DNA片段分別與載體連接起來 ， 導(dǎo)入受體菌的群體中儲存 ， 每個受體菌都包含了一段不同的 DNA片段 。 3． 植物細胞的全能性較高 ， 可經(jīng)植物組織培養(yǎng)過程成為完整植物體 ， 因此受體細胞可以是受精卵也可以是體細胞；動物體細胞的全能性受到嚴格限制 ， 因此動物基因工程中的受體細胞一般只用受精卵 。 目的基因 DNA分子雜交技術(shù) 轉(zhuǎn)錄出 mRNA mRNA與 DNA雜交技術(shù) 翻譯成蛋白質(zhì) 抗原 — 抗體雜交法 [思維激活 ] 1． 為什么要用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含目的基因的DNA分子 ？ 2． 用于構(gòu)建基因表達載體的質(zhì)粒為什么必須具有啟動子和終止子 ？ 3． 植物基因工程常用的受體細胞為什么可以是體細胞 ，而動物基因工程一般只用受精卵 ？ [答案 ] 1． 目的是產(chǎn)生相同的黏性末端 ， 便于兩者完全拼接 。 繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少等 鈣離子 重組表達載體 DNA分子 四、目的基因的檢測與鑒定 1 ．分子檢測 (1) 首先檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA 上是否插入了 ○39______ _ __ __ ，可用 ○40 ____ __________ ____ ； (2) 其次檢測目的基因是否 ○41 ______________ ，可用 ○42______________________________ ； (3) 最后檢測目的基因是否 ○43 ____________________ ，可用○44 ____________________ 。 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 Ti質(zhì)粒的 T－ DNA 表達 基因槍法 花粉管通道法 顯微注射技術(shù) 3 ．將目的基因?qū)胛⑸锛毎?
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