【正文】 性別，處死后，取腎臟，插入導(dǎo)管，生理鹽水反復(fù)沖洗后，取腎皮質(zhì) 5g研漿，與弗氏完全佐劑混勻成 10ml。 三、慢性腎炎動(dòng)物模型建立方法 (一 )兔 (或大鼠 )Masugi腎小球腎炎模型 1．原理 本方法用羊抗兔血清引起兔或大鼠腎小球腎炎。 (二 )陽性對(duì)照藥 藥典或中成藥中用治療慢性腎炎的新藥，均可用作對(duì)照藥。②血肌酐及血尿素氮。 (3)兔 CBSA血清免疫復(fù)合物腎炎模型：以天然牛血清蛋白 (CBSA)，靜脈注射給家兔．形成模型。 二、藥效學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) (一 )對(duì)慢性腎炎動(dòng)物模型的治療作用實(shí)驗(yàn) 1 常用動(dòng)物模型 (1)兔 Masugi模型：以抗兔 (大鼠 )腎血清靜肺注射兔，至蛋白尿出現(xiàn)，形成模型。治療慢性腎炎的中藥，應(yīng)有①治本作用，去外、內(nèi)致病因子的繼續(xù)作用。其臨床表現(xiàn)為水腫、高血壓、蛋白尿、血尿及腎功能損傷等。 第三節(jié) 慢性腎炎藥 一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 慢性腎炎 (慢性腎小球腎炎 )屬中醫(yī)“水腫”、“水氣”、“腫脹”等范疇．是較難治的癥，病因難除。 3．注意點(diǎn) (1)電灼燒要掌握好深淺度，最好 1人操作以減少誤差。將經(jīng)燒灼的腎臟放回，縫合肌層與皮膚．操作全過程不超過 l0min。 (四 )小鼠電凝摘除腎臟 CRF模型 1 原理 燒灼小鼠右腎表面 2星期后左腎摘除，燒灼腎皮質(zhì)壞死，腎小球、腎小管大量破壞，殘余腎單位的功能代償性增強(qiáng)，形成以腎小球硬化，腎間質(zhì)組織纖維化為主要特點(diǎn)的模型。 3 造模成功的指標(biāo)和藥物療效觀察等 與大鼠 5／ 6腎的模型同。 2星期后，以同樣的操作二期手術(shù)，摘右腎。 2 操作方法 實(shí)驗(yàn)用成年健康大鼠，雄性，體重 200— 300g，注射戊巴比妥鈉 40mg／ kg(體重 )麻醉，常規(guī)消毒皮膚，背部一側(cè)切口，分離肌層，暴露左腎，用食指從腹部相應(yīng)部位輕輕向上頂起，腎臟即滑出皮膚切口外面，這樣便操作，然后剝離筋膜。 (5)應(yīng)設(shè)假手術(shù)組代替正常動(dòng)物對(duì)照組。 (3)切除腎臟時(shí)最好在腹膜外進(jìn)行，盡量不打開腹膜進(jìn)入腹腔，以減少感染機(jī)會(huì)。 4．注意點(diǎn) (1)手術(shù)要熟練，最好由 1人切除，以減少損傷誤差?？梢姎堄嗄I臟代償性增大，鏡檢可見腎小球毛細(xì)管擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞肥大，系膜基質(zhì)增生，大鼠上皮內(nèi)皮細(xì)胞壞死，毛細(xì)管腔消失的腎小球玻璃樣變性從硬化的病理過程。術(shù)后 7—10日行第二次手術(shù)，同樣方法麻醉，右側(cè)背部切開暴露右腎，結(jié)扎腎蒂，摘除右腎。 (二 )大鼠 5／ 6腎切除的 CRF模型 1．原理 大鼠 5／ 6腎切除后殘余在腎單位中血液動(dòng)力學(xué)改變，引起殘余腎單位的高濾過蛋白尿，導(dǎo)致腎小球硬化為主要特點(diǎn)的 CRF。 (2)采血時(shí)應(yīng)特別住意防溶血 . (3)配制飼料時(shí)，腺嘌呤要充分與飼料混合均勻。 (4)腎臟病理形態(tài)學(xué)觀察：肉眼及組織學(xué)觀察，有條件時(shí)可作病理切片的圖像分析。 (2)生化及血液檢查。病理學(xué)觀察表明，腎臟明顯增大 (第八星期較腎臟大 4倍多 )，腎組織內(nèi)有大量腺嘌崎代謝物結(jié)晶沉積，大部分腎小管破壞，有淋巴細(xì)胞浸潤，局部纖維縱織增生。全部動(dòng)物自由攝取飼料和飲水。 三、動(dòng)物模型建立方法 (一 )大鼠腺嘌呤 CRF模型 1. 原理 高濃度腺嘌吟通過黃嘌呤氧化酶的作用生成極難溶于水的 2， 8— 二羥腺嘌吟，后者沉積在腎小管，影響了氮質(zhì)化合物的排世，導(dǎo)致氮質(zhì)血癥、毒素蓄積從電解質(zhì)和氨基酸代謝紊亂，最終引起腎功能衰竭。 2，尿毒清顆粒刑 適用降低毒素、改善腎功能為主要功效，用于慢性腎功能衰竭、氮質(zhì)血癥和尿毒癥早期的新藥。 2．利尿試驗(yàn) 用水負(fù)荷大鼠或 CRF模型大鼠常規(guī)方法觀察藥物有無利尿作用。 (2)其他可供分析的指標(biāo)：①各組動(dòng)物間體重、死亡率的比較；②尿量及尿液成分分析 (主要為尿蛋白含量的比較 )；③各組動(dòng)物紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白和紅細(xì)胞比積的比較；④各組動(dòng)物間血鈉、鈣、磷、鉀等電解質(zhì)含量的比較；⑤腎臟組織病理學(xué)觀察。目前已從 CRF患者中分離出約 200種蛋白質(zhì)代謝產(chǎn)物，其中 100多種物質(zhì)成分比止常值高，這些毒素物質(zhì)分為小分子 (相對(duì)分子質(zhì)量小于 500)，如肌酐、尿素氮、胍類和胺類；中分子 (相對(duì)分子質(zhì)量為 500— 5000)；大分子 (相對(duì)分子質(zhì)量大 5000)，如旁腺索、生長激素等。 以上模型的具體建立方法將在后面敘述，試驗(yàn)治療的給藥途徑應(yīng)與臨床一致。 (5)其他模型，如柔紅霉素、阿霉素等致大鼠 CRF模型。 (3)大鼠經(jīng)液氮冷凍腎臟引起的模型：和模型 (2)相似，只是用冷凍代替一期手術(shù)的大部分切除。 二、藥效學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) (一 )對(duì)疾病動(dòng)物模型的治療作用試驗(yàn) 1．常用動(dòng)物模型 (1)大鼠腺嘌呤 CRF模型：大鼠經(jīng)含 0． 5％～ 0. 75％腺嘌吟 (adenine)飼料喂養(yǎng)引起的。綜上所述屬脾腎氣虛證并兼有濕濁或瘀血，故以“健脾益腎，通腑降濁、活血化瘀”法治療。 第二節(jié) 慢性腎功能衰竭藥 一、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ) 慢性腎功能衰竭 (簡稱 CRF)由于多種慢性腎患發(fā)展到晚期，腎實(shí)質(zhì)損害引起腎功能嚴(yán)重?fù)p害，體內(nèi)氮質(zhì)及其代謝產(chǎn)物潴留，不能維持體內(nèi)水、電解質(zhì)及酸堿平衡而引起臨床癥狀，是一危重綜合征，祖國醫(yī)學(xué)雖無 CRF這個(gè)病名，但根據(jù)其發(fā)病，癥狀及演變規(guī)律，可歸納為“關(guān)格”、“癃閉”、“溺毒”、“虛勞”等。 (3)尿 NAG酶反溶曲酶的檢查。 3．評(píng)價(jià)指標(biāo) (1)尿量及尿常規(guī)檢查。此外， AG還作用于線粒體氧化磷酸化，造成腎小管損傷。 (五 )慶大霉素 ARF模型 1．原理 大劑量氨糖類杭生索 (AG)在動(dòng)物體內(nèi)大部分以原形從尿中排出，小部分被近端小