分枝桿菌分離培養(yǎng)和藥敏試驗-文庫吧資料
2025-01-05 03:24本頁面
【正文】 全球耐藥監(jiān)測項目中推薦的標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗方法。 藥物敏感性測定的重要意義 ? 臨床治療的重要參考 ? 流行病學(xué)的重要指標(biāo) 分枝桿菌藥敏試驗 在條件具備和有一定經(jīng)驗的實驗室方可進行此項試驗。 ? 簡便、快速，可進行藥敏試驗及初步菌種鑒定。 幾種常見分枝桿菌快速培養(yǎng)儀 ? Bect/alert 3D全自動快速細(xì)菌培養(yǎng)儀，分枝桿菌生長過程中代謝產(chǎn)生 CO2， CO2的產(chǎn)生使瓶底顏色感受器產(chǎn)生不同的顏色變化。 ? 特點：簡便、快速，可進行藥敏試驗及初步菌種鑒定。 ? 缺點：價格昂貴，需進口專利液體培養(yǎng)基，且有放射性污染，正逐漸被非放射性的培養(yǎng)方法所替代。培養(yǎng)時間通常需要 4~25天。孵育檢測過程中系統(tǒng)報告陽性時，相應(yīng)標(biāo)本的培養(yǎng)液必須首先進行抗酸染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌后方可發(fā)出陽性報告。為保證檢查方法的可靠性，目前快速培養(yǎng)檢查系統(tǒng)除提供相應(yīng)儀器，試劑以外，均根據(jù)不同系統(tǒng)制定了相應(yīng)的臨床標(biāo)本前處理、接種、檢測和報告結(jié)果的規(guī)程 ,故在進行相應(yīng)的檢查時，結(jié)果的可重復(fù)性和可比性均能得到認(rèn)可。 分枝桿菌快速培養(yǎng)檢查 ? 分枝桿菌快速培養(yǎng)檢查是使用分枝桿菌快速培養(yǎng)分枝桿菌儀，通過測定細(xì)菌生長代謝而間接檢測分枝桿菌生長情況的方法。 ? 需培養(yǎng)基凝固滅菌器，離心機，渦旋振蕩器，恒溫培養(yǎng)箱等設(shè)備。 分離培養(yǎng)的缺點 ? 需時長，根據(jù)接種量的大小，一般 2~8周才能得到肉眼可見菌落。 ? 發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落生長需經(jīng)抗酸染色確認(rèn)后方可報告陽性。 結(jié)果報告 ? 培養(yǎng)結(jié)果報告方式 ? (1)分枝桿菌培養(yǎng)陰性 :斜面無菌落生長 ,以“培養(yǎng)陰性”報告 ,不可以“ –”表示 . ? (2)分枝桿菌培養(yǎng)陽性（１＋）：菌落生長占斜面面積的 1/4． ? (3)分枝桿菌培養(yǎng)陽性（ 2＋）：菌落生長占斜面面積的 1/2． ? (4)分枝桿菌培養(yǎng)陽性（ 3＋）：菌落生長占斜面面積的 3/4． ? (5)分枝桿菌培養(yǎng)陽性（ 4＋）：菌落生長布滿整個斜面 ? (6)報實際菌落數(shù) :菌落生長不足斜面面積1/4． 分離培養(yǎng)的注意事項 ? 選擇痰標(biāo)本中膿性、血樣、干酪樣的部分進行培養(yǎng)陽性率較高。培養(yǎng)污染率應(yīng)控制在2%~5%范圍。滿 8周后未見菌落生長者方可報告培養(yǎng)陰性結(jié)果。此后每周觀察 1次，記錄菌落生長及污染情況。沉淀進行酸處理 [與 2~4倍量的 4%硫酸（ H2SO4） ]混合 ,處理 15~20 min)后接種 LJ培養(yǎng)基 . ? 咽喉棉拭子 將棉拭子放入一無菌試管 ,加入適量生理鹽水浸泡 ,加入等體積 4%氫氧化鈉（ NaOH)后強烈振蕩 ,靜置 15 min后接種 . 分離培養(yǎng)的操作流程 痰標(biāo)本中、加 1~2倍體積 4%NaOH 渦旋振蕩 1~2min 室溫靜置 15min 分別接種 前處理液至 2支 培養(yǎng)基斜面 置 37 ℃ 溫箱 培養(yǎng) 接種后 3天 ,7天 觀察 ,此后每周 觀察一次 有菌落生長需經(jīng) 抗酸染色確認(rèn) , 至第 8周無菌落 生長報告陰性 簡易培養(yǎng)程序 簡易培養(yǎng)程序 離心培養(yǎng)程序 離心培養(yǎng)程序 離心力對痰涂片和培養(yǎng)結(jié)果的影響 離心力 （ xg） 涂片陽性（ +） 培養(yǎng)陽性（ +） 涂片陽性 /培養(yǎng)陽性比率 1260 3000 3800 結(jié)果報告 ? 7天各觀察 1次菌落生長情況?；?qū)⒛X脊液 在無菌操作環(huán)境中 3000r/min離心 30 min,取沉淀直接接種到 LJ培養(yǎng)基 .非無菌操作采集的腦脊液標(biāo)本 ,離心后的沉淀進行堿處理[與等倍量 4%氫氧化鈉（ NaOH)混合 ,處理10~15min]后接種于酸性 LJ培養(yǎng)基 去污染處理（其他標(biāo)本） ? 糞便 標(biāo)本與生理鹽水混合后 ,充分振蕩使之成為混懸液 。酸處理去污染時間不超過 25min。標(biāo)本較多時，應(yīng)分批處理 ? 病理組織或干酪塊 標(biāo)本切碎后置于無菌組織研磨器，加入適量（ ~1ml） 生理鹽水后充分研磨成混懸液；混懸液經(jīng) 3000r/min離心 30min后，沉淀物進行堿處理 [與 2~4倍量 2%氫氧化鈉（ NaOH)混合，處理 15min]后接種。 去污染處理 (痰標(biāo)本 ) ? 視標(biāo)本性狀，加 1~2倍體積 4%氫氧化鈉（ NaOH)消化液于痰瓶中，擰緊螺旋蓋，渦旋震蕩器上震蕩 1min，使痰液充分勻化，室溫放置。 分枝桿菌分離培養(yǎng)檢查法的重要意義 ? (2)開展進一步檢測的基礎(chǔ) ，是獲得純培養(yǎng)物進行菌種鑒定、藥物敏感性試驗以及其他生物學(xué)研究的基礎(chǔ)。 ? 培養(yǎng)基制備、洗刷等相對潔凈的操作與涂片鏡檢、培養(yǎng)前處理、藥敏試驗等污染操作要有獨立分開的場所，最好分別在專用的房間進行。 ? 耐異煙肼菌株的致病力顯著減弱，耐鏈霉素菌株的致病力一般不降低，耐利福平菌株有不同程度降低，對利福平及異煙肼同時耐藥，其致病力降低較單一耐異煙肼者更顯著。 ? 由基因突變而出現(xiàn)的極少量天然耐藥菌（自然變異），通常不致引起嚴(yán)重后果。 ? 結(jié)核菌生長緩慢，在一般培養(yǎng)基上分裂一代需要 10~18小時，根據(jù)接種量的多少，一般10~30天肉眼可見菌落生長。 結(jié)核分枝桿菌的生長特性 ? 生長適宜溫度 37℃ ， ~， 對營養(yǎng)要求較高專嗜甘油作為碳源，天門冬酰胺是最好氮源。 ? 結(jié)核菌生長的適宜溫度和人體相近為37℃ 。 分枝桿菌種類 類別 Rubyun分群 對人致病的分枝桿菌 緩 結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群 人型 、 牛型 、 非洲型 慢 非結(jié)核分枝桿菌 Ⅰ 群 堪薩斯 、 海 、 猿 生 非結(jié)核分枝桿菌 Ⅱ 群 瘰癘 長 非結(jié)核分枝桿菌 Ⅲ
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