【正文】 不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)。 方法： 腫瘤細(xì)胞同時加入 AnnexinＶ和ＰＩ染色， 用流式細(xì)胞儀分析。 結(jié)果： 凋亡細(xì)胞顯示ＤＮＡ梯帶。 B） DNA形態(tài)觀察（ Hoeschst333258） 原理 ： Hoeschst333258與 DNA特異性結(jié)合發(fā)出藍(lán)色熒光 方法： 腫瘤細(xì)胞用 Hoeschst333258染色后，在熒光顯微鏡下觀察 結(jié)果： 活細(xì)胞成均勻的淡熒光，調(diào)亡細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見強(qiáng)熒光的顆粒狀物質(zhì)。 對照組 壞死 線粒體腫脹 凋亡細(xì)胞胞質(zhì)出現(xiàn)明顯的線粒體腫脹。 對照組 凋亡細(xì)胞 正常細(xì)胞胞質(zhì)散在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核膜清楚、染色質(zhì)均勻、核仁明顯。 方法： HL60 細(xì)胞株是篩選分化誘導(dǎo)劑的 ,藥物作用后 , 細(xì)胞形態(tài)向粒細(xì)胞方向分化。 伊紅、苯胺黑 等染料 細(xì)胞死亡率 （ %） 對照組活細(xì)胞數(shù)－給藥組活細(xì)胞數(shù) 對照組活細(xì)胞數(shù) X100% = 結(jié)果 ： 方法： 細(xì)胞懸液加入酞酚藍(lán)染色液混勻，用細(xì)胞計數(shù)板，分別計數(shù)活細(xì)胞（未染色）和死細(xì)胞數(shù)目（藍(lán)色） ２ . 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化實驗 NBT還原法 原理： 硝基藍(lán)四氮唑蘭 (NBT) 還原法測定細(xì)胞株分化 誘導(dǎo)。 細(xì)胞中的蛋白含量與吸光度成正比，因此可根據(jù)光密度 OD值推測出活細(xì)胞的數(shù)目和活性。用胰酶消化13 min后，離心，調(diào)節(jié)適當(dāng)密度重新懸浮在培養(yǎng)液中。甲臜生成量與活細(xì)胞數(shù)成正比，因此可根據(jù)光密度 OD值推測出活細(xì)胞的數(shù)目。 數(shù)據(jù)處理： 抑瘤率 (%)＝ 對照組 腫瘤體積－治療組腫瘤體積 對照組腫瘤體積 抑瘤率 30% 認(rèn)為有效 x100% 抗腫瘤譜 ? Taxol （卵巢癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、頭頸癌、食管癌、淋巴瘤） ? 5Fu （乳腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、肝癌、宮頸癌、膀胱癌、前列腺癌和頭頸部腫瘤） ? ADM （ 乳腺癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤和皮膚癌） 沙蟾毒精的體內(nèi)抗腫瘤作用 (Carcinogenesis, 2022, 34:1331) 三、細(xì)胞水平的篩選 1. 抑制腫瘤細(xì)胞增殖實驗 2. 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化實驗 3. 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實驗 4. 抗腫瘤血管生成實驗 5. 腫瘤多藥耐藥性逆轉(zhuǎn)實驗 6. 抗腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移實驗 7. 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬實驗 細(xì)胞株的選擇 １ . 抑制腫瘤細(xì)胞增殖實驗 A) 噻唑蘭實驗（ MTT） 原理： 活細(xì)胞 線粒體中脫氫酶 能夠代謝還原黃色的 MTT，生成藍(lán)紫色不溶于水的 甲臜 （ Formazan）。結(jié)束治療后，處 死小鼠，撥瘤稱重（對照組瘤重 1 g左 右）。 陽性藥 5Fu （ 5氟尿嘧啶） ADM （阿霉素） Taxol（紫杉醇） CTX（環(huán)磷酰胺） 選擇性對照藥 推薦劑量： 120 mg/kg 給藥方式： 與測試藥物相同 。 7天左右，瘤塊達(dá)到 50 mm3體積即為造模成功，開始給藥 。 12天后，處死小 鼠，撥瘤稱重（對照組瘤重 1 g左右）。 7天后對照組 20%小鼠腫瘤小于 400 mg或大于 2g，實驗失敗 給藥及藥效評價： 給藥方式： 連續(xù)給藥； 12次 /天 。剪碎瘤塊成 23 mm3的小塊或組織塊勻漿成細(xì)胞懸液，接種到右前肢腋下。 藥品制備： 藥品溶解生理鹽水或 PBS等緩沖鹽溶液 給藥方式： 連續(xù)給藥； 12次 /天 。 5天左右，小鼠出現(xiàn)腹水即為造模成功。 二、整體動物水平的篩選 １．非實體瘤動物模型 腫瘤名稱 代號 宿主 腫瘤名稱 代號 宿主 艾氏 腹水瘤 ECA KM小鼠 BALB/c小鼠 肉瘤 腹水型 S180A KM小鼠 BALB/c小鼠 肝癌 腹水瘤 HepA KM小鼠 BALB/c小鼠 白血病 L1210 DBA小鼠 白血病 P388 KM小鼠 BALB/c小鼠 白血病 P615 615小鼠 常用小鼠腹水瘤動物模型表（細(xì)胞株及動物） 國內(nèi)外推薦模型 腫瘤移植方法： 1）無菌操作 2）接種部位：腹腔 3）癌細(xì)胞懸液的制備及接種 接種 7~10天小鼠處死，酒精消毒，穿過腹 部肌肉吸取腹水 2~4 mL*，置冰塊上保存。 ? 美國國立癌癥研究所（ NCI） 從 1955年開始從天然產(chǎn)物中篩選抗腫瘤藥物。 其次肝癌、肺癌、食管癌、結(jié)直腸癌等。腫瘤已經(jīng)成為中國公民的頭號殺手，每年因惡性腫瘤而死亡的人口占到總死亡率的 22%?？鼓[瘤藥物篩選 張冬梅 一、導(dǎo)論 二、整體動物水平的篩選 三、細(xì)胞水平的篩選 四、酶水平的篩選 五、展望 一、導(dǎo)論 1. 腫瘤發(fā)病率和死亡率 全球每年癌癥新發(fā)病例都在 1200萬 以上，因癌癥死亡人數(shù)達(dá) 760多萬 ，到 2022年底全球腫瘤病人總數(shù)已逾5500萬 人 (WHO)。 2 0 0 5 年全球常見疾病死亡率心臟病 腦血管病 腫瘤 25% 消化系統(tǒng)病 肺病 其他 中國每年新增腫瘤病人200萬 人，死亡 130170多萬 人左右，目前全國腫瘤患者總數(shù)約450萬 人，并以每年 3%的速度遞增。 2022年中國居民主要疾病死亡率及死亡原因構(gòu)成 死亡原因 死亡率(1/10萬 ) 占總死亡 人數(shù)百分率 惡性腫瘤 135 22% 腦血管病 111 20% 心臟病 96 18% 呼吸系統(tǒng)病 72 15% 損傷和中毒 31 5% 消化系統(tǒng)病 17 5% 糖尿病 17 1% (中國衛(wèi)生年鑒 ) ２００ 9年中國常見惡性腫瘤的死亡率 我國居民常見癌癥死亡率 : 胃癌列腫瘤死亡率首位 。 2. 腫瘤的治療方法 外科手術(shù)治療 放射線治療 化學(xué)藥