瓊脂糖凝膠電泳準備手冊-文庫吧資料
2024-08-17 22:50本頁面
【正文】 子篩功能，使得大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異，從而達到分離的目的。注意觀察凝膠時應(yīng)根據(jù)染料不同使用合適的光源和激發(fā)波長，如果激發(fā)波長不對，條帶則不易觀察，出現(xiàn)條帶模糊的現(xiàn)象。而其他系列例如SYBR Green，GelRed，雖然毒性小，但價格昂貴。從而避免HindIII或EcoRI酶切造成的粘性接頭導(dǎo)致的片段連接不規(guī)則或條帶信號弱等現(xiàn)象。需要注意的是Marker的電泳同樣也要符合DNA電泳的操作標準。Marker應(yīng)該選擇在目標片段大小附近ladder較密的，這樣對目標片段大小的估計才比較準確。TIANGEN公司DNA分子量標準每次上樣6ul即可得到清晰均勻的條帶。 DNA的上樣 正確的DNA上樣量是條帶清晰的保證。注意變性的NA樣品可能導(dǎo)致條帶模糊和缺失，也可能出現(xiàn)不規(guī)則的DNA條帶遷移。 DNA樣品的純度和狀態(tài) 注意樣品中含鹽量太高和含雜質(zhì)蛋白均可以產(chǎn)生條帶模糊和條帶缺失的現(xiàn)象。注意如果電泳時電壓和溫度過高，可能導(dǎo)致出現(xiàn)條帶模糊和不規(guī)則的DNA帶遷移的現(xiàn)象。注意電泳緩沖液多次使用后，離子強度降低，PH值上升，緩沖性能下降，可能使DNA電泳產(chǎn)生條帶模糊和不規(guī)則的DNA帶遷移的現(xiàn)象。 適合的電泳緩沖液 常用的緩沖液有TAE和TBE，而TBE比TAE有著更好的緩沖能力。低濃度膠易碎，小心操作和使用質(zhì)量好的瓊脂糖是解決辦法。注意巨大DNA鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導(dǎo)致缺帶。瓊脂糖凝膠電泳準備手冊 準備干凈的配膠板和電泳槽 注意
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