雜交中稻廣兩優(yōu)476品種與純度的鑒定-文庫吧資料
2024-08-17 16:23本頁面
【正文】 量有所下降，但提取時間大大縮短，由數(shù)十小時縮短為僅２．５ ｍｉｎ，且不影響與多態(tài)性引物的結(jié)合及擴增［１０］。ｓｓｒ標記鑒定雜交種子純度要求簡便、快捷、成本低。因此，鑒定結(jié)果更準確可靠。同時商業(yè)制種基地大多集中分布，在實際生產(chǎn)過程中可能會有含相同優(yōu)良基因的不同親本串粉，這樣通過檢測單一優(yōu)良基因的基因型就無法辨別串粉所造成的偽雜交種。該方法的好處在于不需要大批量篩選引物，減少了工作量。對于含有抗性或其他優(yōu)良基因的品種，通常使用檢測該基因的共顯性標記來檢測其雜交種子的純度。余下種子同時在海南冬播進行田間純度鑒定，２０１０年春鑒定結(jié)果為９８．３％，結(jié)果基本相符，證明該標記的分子生物學(xué)鑒定結(jié)果準確可靠。２．４ 廣兩優(yōu)４７６及含有相同抗病基因株系抗病基因的ｐｃｒ結(jié)果從圖4與圖5可以看出，含有抗白葉枯病基因ｘａ２１的兩個親本ｉｒｂｂ２１和ｒ４７６帶型相同，含有抗褐飛虱基因ｂｐｈ１４的兩個親本ｂ５和ｒ４７６帶型相同。其中ｒｍ２０９的引物擴增出的雜種片段較為清晰，親本兩條帶型較為明顯，可適用于實際雜交種純度的檢測和鑒定（圖３）。pcr產(chǎn)物使用６％非變性聚丙烯酰胺凝膠進行電泳檢測，發(fā)現(xiàn)標記ｒｍ２０９和ｒｍ１７的引物在廣兩優(yōu)４７６中擴增出的條帶都涵蓋了父本r476和母本廣占63s擴增的條帶（圖１、圖２）?？梢钥闯鲞@２４對引物較好地表現(xiàn)出了親本材料的遺傳多樣性。２ 結(jié)果與分析２．１ dna指紋圖譜的構(gòu)建對當前育種工作中常用的７個親本材料使用２４對引物進行ｐｃｒ擴增，均可以擴增出穩(wěn)定的條帶（表1）。銀染顯色參照ｓａｎｇｕｉｎｅｔｔｉ等［６］的方法略作改進，方法如下：凝膠經(jīng)去離子水漂洗２次后在１ g/l ａｇｎｏ３中染色５～１０ ｍｉｎ，去離子水漂洗２次后，在15 g/l ｎａｏｈ＋5 ml/l甲醛中顯色，最后用去離子水漂洗１次。１．２．３ pcr產(chǎn)物的檢測 pcr產(chǎn)物使用６％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，具體方法為取混合有染料指示劑的擴增產(chǎn)物２ μｌ加樣于６％的非變性聚丙烯酰胺凝膠中，以１ｔｂｅ作電泳緩沖液，３００ ｖ恒壓電泳，電泳在雙板夾芯式電泳槽（北京六一儀器廠）上進行，根據(jù)染料指示劑的位置終止電泳。反應(yīng)在ａｂｉ公司９７００熱循環(huán)儀中進行。１．２．２ ｐｃｒ反應(yīng)體系 ｐｃｒ反應(yīng)體系為１５ μｌ，含有１０ ｍｍｏｌ／ｌ ｔｒｉｓ－ｈｃｌ（ｐｈ ８．３），５０ ｍｍｏｌ／ｌ ｋｃｌ，１．５ ｍｍｏｌ／ｌ ｍｇｃｌ２，ｄｎｔｐｓ各０．２ ｍｍｏｌ／ｌ，１０ ｎｇ左右的ｄｎａ模板，引物各０．２ μｍｏｌ／ｌ，ｔａｑ酶１ ｕ。含抗白葉枯病基因ｘａ２１品系ｉｒｂｂ２１來自國際水稻研究所，抗褐飛虱基因ｂｐｈ１４和ｂｐｈ１５品系ｂ５由武漢大學(xué)何光存教授提供，其他材料來自湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院糧食作物研究所分子育種課題組。本研究擬
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