【正文】 進(jìn)攻磷酸基，在斷開磷酯鍵的同時(shí)形成 環(huán)狀磷酸二酯， 再在堿的作用形成水解產(chǎn)物。 例如，在 mol/L NaOH溶液中， RNA幾乎可以完全水解，生成 2′ 或 3′ 磷酸核苷； DNA在同樣條件下則不受影響。 ： ? DNA對(duì)堿穩(wěn)定，不易被水解。 : CN糖苷鍵對(duì)酸不穩(wěn)定 ,常溫下稀酸溶液中 ,嘌呤堿基首先被水解下來 ,產(chǎn)物稱“無嘌呤核酸”。 凝膠中 DNA片段的相對(duì)位置在轉(zhuǎn)移到濾膜的過程中保持不變 ⑤ 附著在濾膜上的 DNA與 32P標(biāo)記的探針雜交 ⑥ 利用 放射自顯影術(shù) 確定探針互補(bǔ)的每條 DNA帶的位置 ， 從而可以確定在眾多酶解產(chǎn)物中含某一 特定序列的 DNA片段的位置和大小 。 ? 主要方法：菌落原位雜交、斑點(diǎn)雜交、狹縫雜交、Southern印跡雜交、 Northern印跡雜交、組織原位雜交和夾心雜交等。如果兩種生物 DNA分子之間存在互補(bǔ)的部分 ,就能形成雙鏈區(qū)。 分子雜交的方法 基本步驟 ? ①先將兩種生物的 DNA分子從細(xì)胞中提取出來 , ? ② 通過加熱或提高 pH的方法 ,將雙鏈 DNA分子分離成為單鏈 ,這個(gè)過程稱為變性。 。 ?在核酸雜交分析過程中 ， 常將已知順序的核酸片段用放射性同位素或生物素進(jìn)行標(biāo)記 。 ? 利用核酸的分子雜交 ， 可以確定或?qū)ふ也煌锓N中具有同源順序的 DNA或 RNA片段 。 ? 核酸雜交可以是 DNADNA， 也可以是DNARNA雜交 。 B、 DNA濃度： 溶液中 DNA分子越多，相互碰撞結(jié)合的機(jī)會(huì)越大，有利于復(fù)性。復(fù)性時(shí)溫度下降必須是一緩慢過程，若在超過 Tm的溫度下迅速冷卻至低溫 (如 4℃ 以下 )，復(fù)性幾乎是不可能的，核酸實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常以此方式保持DNA的變性 (單鏈 )狀態(tài)。 ?將變性 DNA經(jīng)退火處理 ， 使其重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程 ， 稱為 DNA的復(fù)性 。 3）介質(zhì)中離子強(qiáng)度：其它條件不變，離子強(qiáng)度高， Tm高。 影響 Tm的因素 1） G+C的含量越高 ， 則 Tm越高 。 ? DNA的變性發(fā)生在一個(gè)很窄的溫度范圍內(nèi)，通常把熱變性過程中 A260達(dá)到最大值一半時(shí)的溫度稱為該 DNA的 熔解溫度，用 Tm表示。 ? 利用紫外吸收的變化，可以檢測(cè)核酸變性的情況 。鏈內(nèi)堿基配對(duì) ? DNA變性后的性質(zhì)改變： ① 增色效應(yīng) ：指 DNA變性后對(duì) 260nm紫外光的光吸收度增加的現(xiàn)象； ②旋光性下降； ③粘度降低； ④生物學(xué)功能喪失或改變。 ? 引起 DNA變性的因素主要有： ① 高溫 ，② 強(qiáng)酸強(qiáng)堿 ， ③ 有機(jī)溶劑等 。 2)含量計(jì)算 (p195) 天然 DNA 變性 DNA 核苷酸總吸收值 1 2 3 220 240 260 280 波長（ nm） 光吸收 1 2 3 3)、 增色效應(yīng)與減色效應(yīng) 增色效應(yīng)：在DNA的變性過程中，摩爾吸光系數(shù)增大 減色效應(yīng)：在 DNA的復(fù)性過程中，摩爾吸光系數(shù)減小。 純 RNA的 A260/A280應(yīng)為 。核酸的紫外吸收是核酸定量測(cè)定的基礎(chǔ)。 沉降系數(shù)（ s）與相對(duì)分子量（ Mr）的關(guān)系 : Mr = RTs D(1??) Svedberg方程 : d? /dt ?2 ? s = UV吸收 核酸分子中含有嘌呤堿和嘧啶堿，因而具有紫外吸收的的性質(zhì)。 即沉降系數(shù)是微顆粒在離心力場(chǎng)的作用下 ， 從靜止?fàn)顟B(tài)到達(dá)極限速度所需要的時(shí)間 。（如用苯酚抽提） 沉降特性 （ DNA） 不同構(gòu)象的核酸 （ 線形 、 環(huán)形 、 超螺旋 ） ， 浮力密度和沉降速率不同 ， 用 CsCl密度梯度離心就可以將它們區(qū)分開來 ， 這一方法常用于質(zhì)粒 DNA的純化 。 ? DNP溶于水和濃鹽溶液，在 1mol/L的 NaCl溶液中溶解度比純水高 2倍，但在 中溶解度最低，僅為水的 1%，幾乎不溶解； ? RNP在鹽溶液中其溶解度受鹽濃度的影響較小，在 。 ? 在生物細(xì)胞內(nèi)都與蛋白質(zhì)結(jié)合成 核蛋白 。 溶解性： ? RNA和 DNA是極性的化合物都微溶于水不溶于乙醇乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑。 Section 5 DNA的理化性質(zhì)及其應(yīng)用 一、核酸的一般理化性質(zhì) ? 性狀： RNA及其組分核苷酸、核苷、嘌呤堿、嘧啶堿的純品都呈白色的粉末或結(jié)晶； DNA則為疏松的石棉一樣的纖維狀固體 。 其中 ， 18S的 rRNA參與構(gòu)成核蛋白體小亞基 ， 其余的 rRNA參與構(gòu)成核蛋白體大亞基 。 其中 ， 16S的 rRNA參與構(gòu)成核蛋白體的小亞基 ， 而 5S和 23S的 rRNA參與構(gòu)成核蛋白體大亞基 。 rRNA與蛋白質(zhì)一起構(gòu)成核蛋白體 ， 作為蛋白質(zhì)生物合成的場(chǎng)所 。 ? tRNA的 “ 三葉草 ” 形結(jié)構(gòu)包括： 氨基酸臂 、 DHU臂 、 反密碼臂 、 可變臂和 Tψ C臂五部分 。 ? tRNA是單鏈核酸 ， 但其分子中的某些局部也可形成雙螺旋結(jié)構(gòu) 。 ? mRNA分子中每三個(gè)相鄰的核苷酸組成一組 ， 在蛋白質(zhì)翻譯合成時(shí)代表一個(gè)特定的氨基酸 ， 這種核苷酸三聯(lián)體稱為 遺傳密碼 （ coden） 二、 tRNA的結(jié)構(gòu)與功能 ? tRNA是分子最小 ， 但含有 稀有堿基最多的 RNA， 其稀有堿基的含量可多達(dá) 20%。 ?大多數(shù)真核成熟的 mRNA分子具有典型的5’端的 7甲基鳥苷三磷酸 （ m7GTP） 帽子結(jié)構(gòu)和 3’端的 多聚腺苷酸 (polyA)尾巴結(jié)構(gòu) 。 一、 mRNA的結(jié)構(gòu)與功能 ?mRNA可形成局部雙螺旋結(jié)構(gòu)的二級(jí)結(jié)構(gòu) 。 ? RNA分子的種類較多 ， 分子大小變化較大 ，功能多樣化 ?；蚪M的大小與生物的復(fù)雜性有關(guān)，如病毒SV40的基因組大小為 103bp，大腸桿菌為 106bp，人為 3 109bp。 ? DNA分子中具有特定生物學(xué)功能的片段稱為基因（ gene）。 核小體結(jié)構(gòu)屬于 DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu) 。如果再進(jìn)一步盤繞則形成麻花狀的超螺旋三級(jí)結(jié)構(gòu) 。糖環(huán)平面與中心 軸平行 。 B型雙螺旋 DNA的結(jié)構(gòu)特征 堿基配對(duì)及氫鍵形成 B型雙螺旋 DNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： （ 兩條鏈的走向?yàn)?5’→ 3’和 3’→ 5’） ， 圍繞一中心軸 （ 假想軸 ） 構(gòu)成 右手雙螺旋結(jié)構(gòu) 。 ?1953年由 Wilkins研究小組完成的研究工作 ， 發(fā)現(xiàn)了 DNA晶體的 X線衍射圖譜中存在兩種周期性反射 ， 并證明 DNA是一種螺旋構(gòu)象 。 ?一 、 DNA分子模型建立 堿基組成規(guī)律