【正文】 0sec,酒精脫水，二甲苯透明封固。（2）滴少許蘇木素染液于切片上于酒精燈上加熱染色，當見有蒸汽時即可中止染色，快速水洗、分化、用熱水促其藍化、伊紅對比染色、酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。當切片時，如果發(fā)現(xiàn)組織冰凍過度時，可將冰凍的組織取出來，于室溫中停留片刻，以利于軟化組織，使其不致于過度冰凍。臨床快速冰凍切片不須要預先固定，一是為了爭取時間，二是固定了的組織反而增加了切片的難度。冰凍組織前組織放于組織支承器上應視組織的走勢來給予放置，然后四周加上包埋劑，保持周邊的整齊，如出現(xiàn)凹凸不平的地方，可用刀子將其修平，才不致于影響切片。使切片不能完整切出。因為包埋劑常常貼在上述的地方。切帶有脂肪的組織如乳腺組織，應調在25℃左右，如為大量的脂肪組織時，應調至30℃。冷凍箱中冷凍度的高低，主要根椐不同的組織而定，不能一概而論，例如：切未經固定的腦組織，肝臟組織和淋巴結組織等，冷凍箱的溫度可調在10℃～15℃左右。如果用冷藏的載片附貼切片，就沒有這種現(xiàn)象發(fā)生。因為當附貼切片時，從室溫中取出的溫差，當溫度較高的載片附貼上溫度低的切片時，由于兩種物質溫度的差別，當它們碰撞在一起時，分子間的彼此轉移而產生了一種吸附力。這時便可掀起防卷板，取一載片，將其附貼上即可。（5）調好厚度，根椐不同的組織而定，一般在510um.（6）調好防卷板，制作冰凍切片的調節(jié)，關建在于防卷板的調節(jié)，這就要求要細心，準確，將其調校，調校至適當的位置，此時切片。（3）取出組織支承器，放平擺好組織周邊滴上包埋劑，速放入冷凍臺上冰凍，小組織應先取一組織支承器滴上包埋劑讓其凍成一個小臺再放上細小組織，滴上包埋劑。（2）切片取末經固定的組織不能太大太厚，厚者冰凍費時，大者難以切完整。三、冰凍切片的操作（1）本室現(xiàn)有ShandonAS620E型冷凍切片機的主要性能。神經病理學中的某些染色法。顯示組織中的脂肪類物質。對于已確定惡性腫瘤的病人則需要了解其手術范圍是否足夠，上下切緣是否有殘存的腫瘤細胞。突然發(fā)現(xiàn)病人的病變與原診斷不相符合或者懷疑時需要病理給予確定。石蠟切片時切片刀的最宜角度是 5℃30℃1一般所稱呼的標準室溫是20℃1組織浸蠟的溫度最好為1石蠟溶點的最高度高23℃即65℃。組織切片常見的人為性色素沉著物是福爾馬林色素，常見的器官是肝、脾。包埋蠟中含有二甲苯。石蠟切片出現(xiàn)波浪狀的原因是組織塊太硬或骨組織末完全脫鈣。石蠟切片出現(xiàn)的皺折的原因是石蠟溶點低，純度不足。石蠟切片?？沙霈F(xiàn)的問題石蠟切片不能形成帶狀的原因是室溫低，蠟塊周邊不整齊。每切完一塊，裱于載片后應隨時刻上編號，以防止差錯或混亂的現(xiàn)象發(fā)生，減少差錯的苗頭。對于多塊細小的組織，原則上是每一細小的組織都應有一個切面。裱片的水溫不能過高或偏低，高者可溶化所切出的切片，低者則展不開切片，使切片留有皺紋，最適的水溫應是比石蠟的溶點低25℃，如石蠟的溶點為6062℃，裱片的水溫則可達5557℃，余者類推。刀一定要保持無口、鋒利，一次性刀片做到這一點較容易，大刀片要做到上述要求就比較困難。冰凍切片法：? 常用低溫冷凍切片機? 快速將新鮮組織固定在冷凍切片機中，冷凍數分鐘即可切片，數分鐘即可完成，稍后進行快速染色。切下的切片帶，一端用鑷子輕輕拉起，應盡可能將切片帶拉直展開，用毛筆將切片帶從刀口向上挑起，拉下切片帶，然后輕拖鋪于水箱內展平，水溫4555℃為宜。切片的步驟：搖動切片機手輪先進行修整切片，直到切出完整的最大組織切面后，再進行切制。，一般35181。包埋 （六） 組織切片切片機類型： 旋轉式切片機 滑動式切片機（六） 組織切片? 石蠟切片的步驟：，將修好蠟塊置冰箱冷凍后放在切片機上，調整到稍離開切片能夠切到的位置上，注意蠟塊組織切面與切片刀口成510度夾角。浸蠟1－2分鐘（7）二甲苯1分鐘（6）正丁醇1/3丙酮2/3混合液1分鐘（5）無水酒精1分鐘（4）（3）先取病變組織于AAF中固定3－5分鐘。? 制作快速石蠟切片時，切取組織應該薄小，從固定、脫水到浸蠟的全過程都要加溫，一般是先將各種試劑在超聲波快速石蠟脫水儀中預熱，恒溫下操作，整個過程大約在10－15分鐘即可完成? 快速石蠟包埋法操作過程（1）? 快速切片診斷是在數十分中或半小時左右制成切片并作出診斷的一種手段，主要用于手術中決定手術的切除范圍和手術方式。浸蠟（Ⅱ）2小時。12.二甲苯（Ⅱ）。10.100％酒精（Ⅱ）2小時。8.95％酒精（Ⅱ）2－4小時。6.85％酒精2－4小時。4.組織流水沖洗6－12小時。2.例如一張載片要裱兩塊組織時，修切好的蠟塊，就能使它們擺得整齊。減少損傷刀口延長刀口的壽命，以利多切蠟塊。修切蠟塊 應用包埋框包埋的組織塊，切片前一定要將其切好，才有利于切片。包埋時組織塊不能使其冷卻凝固，應保持組織塊上的蠟處于熔化狀態(tài)，這樣包埋時才能和包埋蠟溶為一體。細小多塊的組織，可包埋在一個蠟塊，但應保持在同一平面上，以免影響切片。對于管腔的組織如血管、腸、氣管等應豎起來包埋對于皮膚及胃、腸、等組織應辯認好方向。 每包埋完一塊，應附上標簽，以免出差錯或張冠李戴。包埋時的注意事項：所使用的鑷子，包埋框，最好放于37的恒溫箱內，以免這些物質過冷（在冬天時）而過早冷卻包埋的石蠟，影響包埋的質量，這種現(xiàn)象在沒有石蠟包埋機的單位較為明顯。（五） 包埋? 包埋，就是將已經經過固定，脫水，透明，浸蠟的組織塊從最后的蠟浴取出置入充滿熔融石蠟的包埋框內，包埋成塊，使組織和包埋劑相熔一體并迅速冷卻，這個程序稱為包埋。浸蠟時間1－4小時，或更長，并使之過夜則較易切割 。注意 ? 為了盡可能排除透明劑，浸蠟可以分兩級或三級進行。②真空負壓浸蠟法 將透明好的組織放入浸蠟缸中，然后移入真空負壓箱內，或者脫水機自身配有的真空負壓裝置進行浸蠟。使組織保持原有的形狀，也使包埋后蠟塊保持平整，便于切片。因而遺留下許多腔隙，妨礙了切片。2. 組織經過透明后要浸入石蠟內,目的是去除組織中的透明劑(二甲苯)而代之以石蠟,并滲入組織內部,把軟組織變?yōu)橛羞m當的硬度的蠟塊以便切片. ,石蠟的溶點為5460度左右,浸蠟作用可起到填充、支撐的作用。： 透明時間不夠，石蠟不能完全進入組織，影響到包埋切片 ；但是如果透明過度，組織發(fā)硬發(fā)脆影響切片質， .： 第一次組織脫水后透明； 第二次切片染色透明。（三） 透明? 透明的目的: 因為大多數脫水劑不能和石蠟相混合,組織內的水份脫干凈后,必須通過透明劑的作用,才能便于浸蠟包埋. ↓ ↓ 既能溶于乙醇又能溶于石蠟 ↓ 因在此過程中，組織中的乙醇被透明劑取代，使其折光率接近組織蛋白的折光率，組織呈不同程度的透明狀光線可以透過，故稱透明。4．流水沖洗24小時（除酸）。2．固定：再以10%福爾馬林固定2天。? 脫鈣時間視組織大小和含鈣多少而定，以大頭針可輕松刺入為準。100ml。5－10ml 和蒸餾水? 常用脫鈣劑是5%10%硝酸溶液。（二）脫鈣? 骨和其他鈣化組織制片時應先脫鈣再切片。但一般情況下,多用在無水酒精的補充脫水。 ,必須靈活掌握,根據本實驗室情況,定時更換脫水劑.? 可用作固定液,也是一種比較好的脫水劑。脫水方法及注意事項:。脫水過程可使用真空負壓和加熱。全部密閉，試劑不易揮發(fā)，保護了環(huán)境。 電腦屏幕可顯示時間、溫度、所需時間、是否用真空負壓等，可根據不同的時間要求，編制9套不同的組織脫水程序。（2）可避免細小的組織經受不必要的脫水時間,防止組織的硬脆．（３）可靈活掌握，隨時進行觀察和調整．人工脫水法的不是之處：（1）需耗人力；（2）必須在白天完成，晚上無法進行換液；（3）如機器發(fā)生故障，組織塊被擱置在外邊，致使組織干涸，影響了制片的質量。脫水后組織收縮、變脆。C 包埋：溶解蠟（一）脫水? 脫水就是利用脫水劑將組織內的水分置換出來，以利于有機溶劑石蠟的滲入，這一過程稱為脫水。價格昂貴?？擅撊ツ承┮阎厩衅念伾？沙恋戆椎鞍?，球和核蛋白。7 、可用來消毒?？膳涑苫旌瞎潭ㄒ?。能溶解苯類物質，為染色法中的橋梁試劑。酒精的優(yōu)點：可以保存糖原和尿酸結晶。應當注意的是，組織脫水時應根據組織的大小、器官或部位、取材的大小來確定脫水時間，一般認為濃度越低，脫水時間可以相對延長，如70%可用來長期保存標本，但如果在100%的酒精里時間就不能太長，否則組織易脆不利于切片。H2O　　 4g