小鼠腎臟細胞系的建立doc-文庫吧資料
2025-07-24 02:32本頁面
【正文】 法，分別是組織塊培養(yǎng)法和分散細胞培養(yǎng)法。3） 用酒精燈火焰消毒后的手術剪刀在小鼠胸腔部位附近環(huán)行剪開皮膚。 三．實驗步驟1. 取材1） 將小鼠引頸殺死。最后裝入鋁盒內(nèi)高壓消毒，烘干備用。3） 膠帽，離心管帽烘干后只能在2％氫氧化鈉溶液中浸泡612小時（切記時間不能過長），自來水洗凈，烘干。然后再泡入鹽酸液30分鐘，再用自來水，蒸餾水，三蒸水洗凈，烘干。注意在超凈臺內(nèi)取出使用時應該立即將螺旋旋緊。6）高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，打開開關和安全閥，當蒸氣成直線上升時，關閉安全閥，當指針指向15磅時，維持2030分鐘。4）泡酸、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml）浸泡12小時，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次，最后蒸餾水沖洗35次和用雙蒸水過3次。 2）烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀鹽酸中12小時以除去臟物、鉛、砷等物。照射期間關閉接種室的門窗。消毒后通風換氣，等氣味散盡后再出入。實驗前，無菌室及無菌操作臺用紫外燈照射20到30分鐘滅菌，關閉紫外燈并打開無菌操作臺風機運轉10分鐘，然后用70%乙醇擦拭無菌操作臺臺面及四周，并開始實驗。2） 紫外線滅菌：細菌吸收紫外線后，蛋白質和核酸發(fā)生結構變化，引起細菌的染色體變異，造成死亡。一般在103137kPa壓力下，1530分鐘，所有微生物包括芽孢在內(nèi)都可被殺死。1） 高壓蒸汽滅菌：也稱濕熱滅菌，適用于對一般培養(yǎng)基、玻璃器皿、布類、橡膠制品、金屬器械等的滅菌。還有化學方法主要包括熏蒸消毒和藥劑噴霧消毒。胰蛋白溶液:1） 用少量的DHanks液把胰蛋白酶粉末調成糊狀2）補足DHanks液，震蕩搖勻，置4℃冰箱內(nèi)過夜3）次日，等胰蛋白酶溶解后用濾紙過濾4）5）分裝小瓶放到冰箱內(nèi)低溫保存6）使用時，%臺盼藍母液：稱取4克臺盼藍，加入少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾，4℃保存。%EDTA溶液的配置：、%酚紅4ml，加入蒸餾水定容至1000ml。2）移入溶液瓶內(nèi)待消毒：將DHanks倒入溶液瓶（大的吊針瓶）內(nèi)，蓋上膠帽，并插上針頭放入高壓鍋內(nèi)8磅消毒20分鐘。所以本次實驗采用濕熱滅菌DHanks液的配制：1）溶解定容：將藥品（NaCl：，KCl：，Na2HPO4二 準備工作1. 實驗所需的試劑與材料健康小鼠、火柴、酒精燈、青霉素、鏈霉素、胰蛋白酶、EDTA、稀鹽酸、蒸餾水、20%新潔爾滅、70%乙
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