【正文】 置有關(guān)。 1)黃酮類(lèi)成分的基本母核可以認(rèn)為是2苯基色原酮凡具C6C3C6結(jié)構(gòu)的成分被廣義稱(chēng)為黃酮類(lèi)成分2)黃酮類(lèi)成分在自然界的分布規(guī)律可歸納為 一．人參的質(zhì)量分析 P333二．甘草的質(zhì)量分析 P336三．黃芪的質(zhì)量分析 P338四．重樓的質(zhì)量分析 P340由于ELSD僅對(duì)不揮發(fā)被分析物質(zhì)產(chǎn)生響應(yīng)，即使是在梯度洗脫時(shí)也能提供平穩(wěn)的基線(xiàn)。所得分析檢測(cè)的物質(zhì)顆粒通過(guò)一狹窄光束散射光，由光電倍增管收集。 三．高效液相色譜法 現(xiàn)今蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）的應(yīng)用使得皂苷類(lèi)成分的分析更為便利。所用顯色劑多為強(qiáng)氧化性的強(qiáng)酸試劑，皂苷與這些強(qiáng)酸試劑發(fā)生氧化、脫水、脫羧、縮合等一系列化學(xué)反應(yīng)，生成具多烯鍵結(jié)構(gòu)的縮合物而顯色。 皂苷類(lèi)成分如加入適當(dāng)?shù)娘@色劑，使其呈色，可在可見(jiàn)光區(qū)進(jìn)行測(cè)定，這種測(cè)定方法是測(cè)定樣品中總皂苷或總皂苷元的含量。這些顯色劑在應(yīng)用上各有優(yōu)缺點(diǎn)（1）25%磷鉬酸乙醇溶液（2）硫酸 甲醇（1：1）（3）氯磺酸 醋酸（1：2）溶液（4）碘蒸氣常用的溶劑系統(tǒng)有：氯仿 甲醇 水（65：35：10，下層）、正丁醇 醋酸 水（4：1：5，上層）等3．顯色劑 2．展開(kāi)劑1．吸附劑皂苷進(jìn)行薄層色譜分析所用的吸附劑主要有硅膠和氧化鋁，有時(shí)為了分離的需要加入一定的硝酸銀。 取含皂苷類(lèi)成分中藥粉末1g，加水10m1，煮沸10min后過(guò)濾，將濾液于試管內(nèi)強(qiáng)烈振搖，如產(chǎn)生持久性泡沫（15min以上）即為陽(yáng)性反應(yīng)。皂苷類(lèi)化合物常見(jiàn)的顯色反應(yīng)有：醋酐 硫酸反應(yīng)、三氯醋酸反應(yīng)、氯仿 濃硫酸反應(yīng)、冰醋酸 乙酰氯反應(yīng)、苯肼反應(yīng)、芳香醛 硫酸或高氯酸反應(yīng)等。（4）冰醋酸一乙酰氯反應(yīng)（Tschugaefb反應(yīng)）（5）五氯化銻反應(yīng)（Kahlenberg反應(yīng)）（6）與苯肼反應(yīng)（7）芳香醛硫酸或高氯酸反應(yīng) 3．常用的皂苷顯色反應(yīng) 含有甾體皂苷的常用中藥有穿山龍、綿萆薢、粉萆薢、重樓、土茯苓、知母、麥冬、天冬等。 1)甾體皂苷元多數(shù)無(wú)共軛系統(tǒng)，因此在近紫外區(qū)無(wú)明顯吸收峰，但與濃硫酸作用后，則在220600nm范圍內(nèi)出現(xiàn)最大吸收峰，可以作為甾體皂苷定性、定量分析的依據(jù)。 第十章 一. 黃連的質(zhì)量分析 (P306)三．延胡索的質(zhì)量分析 (P310)這樣就限制了硅膠G作固定相的HPLC在分析生物堿方面的應(yīng)用。3） 在流動(dòng)相中加入緩沖液也能改善分離效果，如磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液等。 于流動(dòng)相中加入低濃度的長(zhǎng)鏈銨可使所分析的堿性化合物的色譜峰變得完美。生物堿的HPLC分析中，碳酸銨、醋酸鈉、磷酸鈉均是常用的離子抑制劑。改善分離效果方法：1） 采用封端的固定相（游離硅醇基越少越好）2）使用堿性的流動(dòng)相: 為了減少生物堿在反相固定相上的拖尾，可以使用堿性流動(dòng)相，但是，化學(xué)鍵合相的穩(wěn)定性又限制了流動(dòng)相的pH值不能超過(guò)8。最為關(guān)鍵（2）酸性染料的種類(lèi)（3）有機(jī)溶劑的選擇二．薄層色譜法 三．高效液相色譜法 （1）離子交換 HPLC（2）反相HPLC 3）顯色劑 碘化鉍鉀試劑是最通用的生物堿顯色劑，但它與植物中一些非生物堿物質(zhì)如蛋白質(zhì)、氨基酸、某些苷、糖、嘌呤、甲基化胺、鞣質(zhì)及銨鹽等特別是具有共軛羰基（酮或酸）或內(nèi)酯的非含氮物質(zhì)如香豆素、黃酮、查耳酮、強(qiáng)心苷產(chǎn)生正反應(yīng)而被誤認(rèn)為生物堿，干擾檢出。 可在涂鋪硅膠薄層時(shí)用稀堿溶液使成堿性硅膠薄層，用中性展開(kāi)劑分離生物堿。 吸附劑本身的酸堿性可影響生物堿的分離。（6）雷氏銨鹽試劑（Ammonium reineckate），酸性溶液和稀醇液中生成紅色無(wú)定性沉淀。 （4）磷鉬酸試劑（Sonnenschein），酸性溶液中生成白色或黃色沉淀，加入氨水變成藍(lán)色。（3）碘碘化鉀試劑（Wagner），生成褐色至暗褐色沉淀。 2）常用的沉淀試劑（1）碘化汞鉀試劑（Mayer），生成白色或黃色沉淀。 （一）化學(xué)定性分析1）沉淀反應(yīng)： 中藥樣品細(xì)粉用水或稀酸溶液溫浸，濾液滴加下列沉淀試劑，應(yīng)有3種以上試劑顯陽(yáng)性反應(yīng)。 該法操作簡(jiǎn)單、快速、萃取效果可與索氏提取法相媲美，樣品可提取完全，而且萃取液不經(jīng)過(guò)濾就可直接進(jìn)樣分析，對(duì)不穩(wěn)定成分的測(cè)定更顯其優(yōu)越性。2）色譜法3）離子對(duì)方法4）超臨界流體萃取法 1）萃取法基于這種特性，可用不同的溶劑將生物堿從中藥中提出。少數(shù)化合物的鹽酸鹽、氫碘酸鹽則難溶于水（如鹽酸小檗堿）。生物堿的無(wú)機(jī)酸鹽雖易溶于水，但溶解度的大小有區(qū)別。 生物堿和其鹽類(lèi)的性質(zhì)在這一點(diǎn)是相反的。3．溶解度游離生物堿極性較??；能溶于乙醇、氯仿、丙酮、乙醚等有機(jī)溶劑，不溶或難溶于水。 叔胺 ＞ 仲胺 ＞ 伯胺 ＞ 氨 2）季胺堿由于以離子形式存在，因此堿性更強(qiáng)3）N原子以酰胺形式存在時(shí)，堿性幾乎消失 生物堿分析異喹啉衍生物類(lèi): 黃連、罌粟、吐根、 錫生藤、延胡索、防已、石蒜 吲哚衍生物類(lèi)： 番木鱉、毒扁豆、 麥角、蘿芙木莨菪烷衍生物類(lèi)：古柯、顛茄、洋金花 （4）能夠快速、準(zhǔn)確地報(bào)告測(cè)定結(jié)果。（2）專(zhuān)屬性強(qiáng)，能排除中藥有效成分代謝產(chǎn)物及機(jī)體內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。酸水解通常使用無(wú)機(jī)酸，如鹽酸等，酶水解可用β葡萄糖醛酸酶或芳基硫酸酯酶等。 （2）尿液除去蛋白質(zhì)的方法有：；；、透析方法除去蛋白質(zhì)。 血樣取后，要經(jīng)過(guò)提取、凈化分離才能進(jìn)行有效的分析測(cè)定。在全血中加入肝素或其他抗凝劑，離心后得到血漿。 5. 藥物代謝作為特殊條件下的有機(jī)化學(xué)反應(yīng)，有一定的特點(diǎn)，歸納如下：（略，P257）（1）氧化反應(yīng)為主 （2）反應(yīng)底物種類(lèi)多（3）代謝物水溶性增加（4）藥物轉(zhuǎn)化的多樣性（5）藥物代謝是多種因素作用的結(jié)果：6．生物體內(nèi)檢測(cè)樣品的選擇 （1）血液：采血部位因動(dòng)物不同而異，兔常取耳靜脈血，狗宜取胰靜脈血，取血量為12ml。 4）藥物代謝的結(jié)合反應(yīng)1）藥物代謝的氧化反應(yīng)氧化反應(yīng)是藥物代謝中最常見(jiàn)、最重要的反應(yīng)。結(jié)合反應(yīng)稱(chēng)為藥物代謝的第二相（phase II） 反應(yīng)。 （一）中藥成分的腸內(nèi)菌生物轉(zhuǎn)化 從腸內(nèi)菌對(duì)中藥成分結(jié)構(gòu)進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化的現(xiàn)有研究成果，可將腸內(nèi)進(jìn)行的生物轉(zhuǎn)化反應(yīng)的主要類(lèi)型敘述如下：1）水解反應(yīng) 2）氧化反應(yīng) 3）還原反應(yīng)4）異構(gòu)化反應(yīng)5）含氧化合物向含氮化合物的轉(zhuǎn)化（7）樣品的穩(wěn)定性：生物利用度研究的測(cè)定樣品經(jīng)常需貯存待測(cè)，因此需要考察樣品在室溫、冰凍和凍融等貯存條件與時(shí)間對(duì)穩(wěn)定性的影響。（6）定量檢測(cè)限（limit of quantitaion）：表示可檢測(cè)符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低藥物濃度。（5）靈敏度（sensitivity）：檢測(cè)靈敏度可通過(guò)比較已知低濃度被測(cè)試藥物樣品與空白樣品的測(cè)定信號(hào)，確定可被檢測(cè)的最低濃度?？疾炀芏戎辽龠x擇三個(gè)濃度進(jìn)行，最低濃度選擇在定量檢測(cè)限附近，最高濃度選擇在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的上限附近，每個(gè)濃度重復(fù)5個(gè)樣品?？疾鞙y(cè)定方法的準(zhǔn)確性，應(yīng)在空白生物樣品中加入已知量藥物，使成高、中、低三個(gè)濃度，每個(gè)濃度重復(fù)5次測(cè)定。（3）準(zhǔn)確性（accuracy）：準(zhǔn)確性是指測(cè)得的樣品濃度與真實(shí)濃度的接近程度。內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)的代謝產(chǎn)物不干擾樣品的分析。樣品中測(cè)定的是原型藥物或活性代謝產(chǎn)物，常用色譜法測(cè)定，所測(cè)物質(zhì)與代謝產(chǎn)物及內(nèi)源性物質(zhì)的分離度要達(dá)到要求。3．生物樣本中藥物濃度分析方法體內(nèi)生物利用度測(cè)定方法是在受試者用藥后定時(shí)測(cè)定其體液（血、尿、唾液等）中的藥物濃度或藥理效應(yīng)的強(qiáng)度。第八章 體內(nèi)中藥分析及藥代動(dòng)力學(xué)研究（中藥及其制劑）吸收進(jìn)入體內(nèi)大循環(huán)的相對(duì)數(shù)量、出現(xiàn)的相對(duì)速率和代謝物的測(cè)定。high performance capillary electrophoresis ,HPCE） 毛細(xì)管電泳的特點(diǎn)：毛細(xì)管電泳的突出優(yōu)勢(shì)可概括為三高二少，即高靈敏度、高分辨率、高速度、進(jìn)樣少、溶劑用量少等。還可以用多種梯度技術(shù)來(lái)優(yōu)化色譜條件。操作溫度主要決定于所選用的流體，常用的有二氧化碳及氧化亞氮。超臨界流體色譜兼有氣相色譜和液相色譜的特點(diǎn)。 supercritical fluid chromatography；SFC以超臨界流體做流動(dòng)相是依靠流動(dòng)相的溶劑化能力來(lái)進(jìn)行分離、分析的色譜過(guò)程，是20世紀(jì)80年代發(fā)展和完善起來(lái)的一種新技術(shù)。用強(qiáng)光或激光照射氣溶膠，產(chǎn)生光散射，用光電二極管檢測(cè)散射光。這就是：樣品結(jié)構(gòu)不需要具備紫外發(fā)色團(tuán)和合適的折射率，對(duì)梯度洗脫和流動(dòng)相系統(tǒng)溫度變化不敏感；對(duì)各種物質(zhì)的響應(yīng)因子很近；在一次的分析中可以同時(shí)檢測(cè)主要成分和雜質(zhì)等。吸收光譜用于組分的定性，色譜峰用于定量，在中藥成分的研究中有廣泛的應(yīng)用。一般是一個(gè)二極管對(duì)應(yīng)的接受光譜上一個(gè)納米譜帶寬的單色光。4)廢液管的出口末端應(yīng)與進(jìn)樣口水平，以防樣品倒流或產(chǎn)生虹吸。）2)進(jìn)樣動(dòng)作：在Load狀態(tài)推針，動(dòng)作要平緩，以防樣品沖出，進(jìn)樣后先切換到Inject狀態(tài)，再拔針，以防倒吸而產(chǎn)生氣泡。避免溶劑瓶直接日照。用濾膜過(guò)濾溶劑去除微生物。第六章：高效液相色譜：HPLC 級(jí)過(guò)濾 ( um, um最好)脫氣，尤其在低流速時(shí)相溶： 不干凈的溶劑或在溶劑瓶中長(zhǎng)菌的溶劑會(huì)阻塞溶劑過(guò)濾器，降低泵的操作性能。火焰中生成大量碳正離子，被收集計(jì)算后形成檢測(cè)器信號(hào)。 氫火焰離子化檢測(cè)器 (FID)TCD 是一個(gè)非破壞性的濃度型檢測(cè)器。以此作為檢測(cè)器質(zhì)量的指標(biāo)。 FID碳?xì)浠衔?0100 pgTCD除載氣外的其他所有物質(zhì)5 100 ngECD 靈敏度范圍 檢測(cè)器類(lèi)型:柱溫選擇的基本原則是：在使最難分離的組分有盡可能好的分離度的前提下，盡可能采用較低柱溫。比其規(guī)定的最高使用溫度低50~100℃。但在實(shí)際應(yīng)用中要考慮固定液的最低和最高使用溫度。 3. 操作溫度的確定（1）柱溫的選擇應(yīng)根據(jù)樣品的沸點(diǎn)、固定液的配比、進(jìn)樣量和檢測(cè)器的靈敏度來(lái)綜合考慮。2. 為了評(píng)價(jià)柱效和選擇操作條件，氣相色譜有兩個(gè)基本理論：塔板理論和速率理論。第五章 氣相色譜分析（Gas Chromatography,GC）是以氣體為流動(dòng)相的色譜方法。應(yīng)用過(guò)程中既能分析又能夠樣品制備，可以讓多個(gè)樣品在高壓和恒定流速的多元配比展開(kāi)劑情況下快速展開(kāi)，保證了極高的板效率，達(dá)到很好的分離效果；在任意時(shí)間內(nèi)可中斷展開(kāi)過(guò)程，觀(guān)察展開(kāi)效果，不影響進(jìn)一步展開(kāi)。一般以高壓汞燈或氙燈為光源。以氘燈為光源。但只適用于反射法。: 薄層斑點(diǎn)中的物質(zhì)對(duì)紫外光有吸收，用紫外光掃描。A 可見(jiàn)光: 薄層展開(kāi)后的斑點(diǎn)本身有顏色，或噴以顯色劑使斑點(diǎn)顯色，斑點(diǎn)的吸收曲線(xiàn)在可見(jiàn)光區(qū)。若利用兩束不同波長(zhǎng)的單色光λS和 λR交替照射在同一位置上，測(cè)定其吸收值差△A來(lái)計(jì)算樣品含量的方法稱(chēng)為雙波長(zhǎng)測(cè)定法。 （一）測(cè)定原理薄層掃描儀的單色光透過(guò)薄層板上的斑點(diǎn)，此時(shí)部分單色光被斑點(diǎn)吸收，使透射光的強(qiáng)度減弱，通過(guò)直接測(cè)量透射光的強(qiáng)度來(lái)測(cè)定的方法稱(chēng)為透射法。（2）展開(kāi)劑應(yīng)對(duì)被分離物質(zhì)有一定的溶解度，如被分離的物質(zhì)不能溶解于展開(kāi)劑中，就不能隨展開(kāi)劑向前移動(dòng)。10. 吸附劑的活化主要是通過(guò)一定溫度烘烤，除去顆粒中的水分 ：（1）展開(kāi)劑對(duì)被分離物質(zhì)應(yīng)有一定的解吸能力，但又不能太大。9. 吸附劑的選擇 在薄層色譜中吸附劑與展開(kāi)劑的選擇，是色譜分離能否獲得成功的關(guān)鍵。 （1）吸附是可逆的、吸附與解吸附處于一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡中；8. 應(yīng)用最廣泛的是吸附薄層色譜，主要是利用吸附過(guò)程的兩個(gè)規(guī)律：當(dāng)展開(kāi)劑流過(guò)薄層時(shí)，混合組分按分子大小的不同，在葡聚糖凝膠薄層上反復(fù)進(jìn)行擴(kuò)散和排阻，從而使混合物達(dá)到分離。（3）離子交換薄層色譜：用離子交換劑制作薄層。（1）硅膠（2）氧化鋁（3）大孔樹(shù)脂（4）硅藻土（5）Sephadex LH 20（6）C18,C86. 薄層色譜的優(yōu)點(diǎn)是：（1）設(shè)備簡(jiǎn)單；（2）展開(kāi)時(shí)間短；（3）分離效果好；（4）顯色方便，也可噴灑腐蝕性顯色劑、加熱等；（5）靈敏度高。（7）毛細(xì)管電色譜法（capillary electro chromatography，CEC）分離機(jī)制是靠色譜與電場(chǎng)兩種作用力，依據(jù)樣品組分的分配系數(shù)及電泳速度的差別使之分離的色譜法稱(chēng)為毛細(xì)管電色譜法。（5）親和色譜法（affinity chromatography）用具有生物活性的配位基（如抗體、酶等）鍵合到非活性載體或基質(zhì)表面構(gòu)成固定相，利用生物分子與固定相表