國家標(biāo)準(zhǔn)-新城疫診斷技術(shù)【整理版】-文庫吧資料
2025-07-20 19:33本頁面
【正文】 S對照孔紅細(xì)胞呈明顯鈕扣狀沉到孔 底時(shí)判定結(jié)果。d)在第1孔～第11孔各加入0．025 mL含4HAU抗原，輕叩反應(yīng)板，使反應(yīng)物混合均勻，室溫下 (約20℃～25℃)靜置不少于30 min，4℃不少于60 min。b)取96孔V形微量反應(yīng)板，用移液器在第1孔～第11孔各加入0．025 mL PBS，第1z孔加入0．05 mL PBS。6 2 HI試驗(yàn)程序 HI試驗(yàn)操作程序如下： a)根據(jù)血凝試驗(yàn)結(jié)果配制4個血凝單位(4HAU)抗原。 方法舉例為：如病毒HA效價(jià)為91092，其4個血凝單位為71092，則將病毒稀釋128倍即可。6．1．3標(biāo)準(zhǔn)抗NDV血凝抑制抗體(血清)。6血凝抑制試驗(yàn)6．1材料與試劑6．1．1器材同5．1．1。b)如果沒有血凝活性或血凝效價(jià)很低，則采用SPF雞胚用初代分離的尿囊液繼續(xù)傳兩代，若仍 為陰性，則認(rèn)為新城疫病毒分離陰性。以完全凝集的病毒最大稀釋度為該抗原的血凝滴度。5．2血凝試驗(yàn)操作程序 血凝試驗(yàn)操作程序如下：a) 取96孔v形微量反應(yīng)板，用微量移液器在1孔～12孔每孔加0．025 mL PBS；b)吸取0．025mL病毒懸液加入第1孔中，吹打3次～5次充分混勻；c)從第1孔中吸取0．025 mL混勻后的病毒液加到第2孔，混勻后吸取0．025 mL加入到第3 孔，依次進(jìn)行系列倍比稀釋到第11孔，最后從第11孔吸取0．025 mL棄之，設(shè)第12孔為PBS3GB／T 165502008 對照；d)每孔再加0．025 mL PBS；e)每孔加入0．025 mL體積分?jǐn)?shù)為1％的雞紅細(xì)胞懸液；f)振蕩混勻反應(yīng)混合液，室溫20℃～25℃下靜置40 min后觀察結(jié)果，若環(huán)境溫度太高，放4℃ 靜置60 rain，PBS對照孔的紅細(xì)胞成明顯的鈕扣狀沉到孔底時(shí)判定結(jié)果。5．1．4標(biāo)準(zhǔn)新城疫病毒抗原、購入的標(biāo)準(zhǔn)新城疫病毒應(yīng)檢測其血凝效價(jià)并進(jìn)行無菌檢驗(yàn)，以檢查與所 標(biāo)HA效價(jià)是否相符。5．1．2 pH7．2磷酸鹽緩沖液(PBS)配制方法參見附錄A。4．4結(jié)果判定結(jié)果判定細(xì)則如下：a)MDT低于60 h為強(qiáng)毒型NDV，MDT在60 h～90 h為中等毒力型NDV，MDT大于90 h為 低毒力NDV；b)ICPI越大，NDV致病性越強(qiáng)，最強(qiáng)毒力病毒的ICPI接近2．0，而弱毒株毒力的ICPI為0；c)IVPI越大，NDV致病性越強(qiáng)，最強(qiáng)毒力病毒的IVPI可達(dá)3．0，而弱毒株的IVPI為0。一一10 d累計(jì)發(fā)病數(shù)；∑。圣癸!177。c)接種致病指數(shù)(IVPI)測定：1)HA滴度高于41092(大于1／16)的新鮮尿囊液(不超過24 h～48 h，細(xì)菌檢驗(yàn)為陰性)，用 無菌等滲鹽水作10倍稀釋；2)靜脈接種六周齡的SPF小雞，接種10只，每只雞接種0．1 mL；3)每天觀察1次，共10 d，每次觀察要記分，正常雞記作o，病雞記作1，癱瘓雞或出現(xiàn)其他神 經(jīng)癥狀記作2，死亡雞記作3(每只死雞在其死后的每日觀察中仍記作3)；4) IVPI是指每只雞10 d內(nèi)所有每次觀察數(shù)值的平均值，計(jì)算方法見式(3)。b)接種致病指數(shù)(ICPI)測定：1)HA滴度高于41092(大于1／]6)以上新鮮感染尿囊液(不超過24 h～48 h，細(xì)菌檢驗(yàn)為陰 性)，用無菌等滲鹽水作10倍稀釋；2)腦內(nèi)接種出殼24 h～40 h之間的SPF雛雞，共接種10只，每只接種0．05 mL；3)每24 h觀察一次，共觀察8 d；4)每天觀察應(yīng)給雞打分，正常雞記作0，病雞記作l，死雞記作2，(每只死雞在其死后的每日2GB／T 1 65502008 觀察中仍記2)；5)ICPI是每只雞8 d內(nèi)所有每次觀察數(shù)值的平均數(shù)，計(jì)算方法見式(2)。4．3致病指數(shù)測定經(jīng)確定存在新城疫病毒繁殖的情況下，應(yīng)根據(jù)下列指標(biāo)之一進(jìn)行毒
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