【正文】 0）為使不同時間測定的數(shù)據(jù)具有可比性，你認為需要控制什么環(huán)境條件？為什么？（11）寫出實驗時間按排和操作流程圖（12）與水勢測定實驗結(jié)合在一起寫出實驗時間按排和操作流程圖[實驗后思考題（挑戰(zhàn)題）]（1）如果甲烯藍濃度過大，其濃度和光密度還成線性關(guān)系嗎？為什么？（2）如果有甲烯藍吸光系數(shù)，還需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線嗎？為什么？（3）為什么在用分光光度計測定物質(zhì)含量時，有時用吸光系數(shù)，有的需要做標(biāo)準(zhǔn)曲線？Section 4（6h）五、植物抗逆性鑒定外滲電導(dǎo)法 植物生存的環(huán)境條件是經(jīng)常變化的，在植物的一生中，約有90％的時間是處在不利的環(huán)境條件下。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的濃度，最后算出每杯溶液中剩余甲烯藍的毫克數(shù)。然后放入第一個盛有甲烯藍溶液的小燒杯里，將根系上多余的甲烯藍液控回到原燒杯中去，取出后，同樣控凈溶液，取出控凈溶液。記住，取潔凈的比色皿，在比色時先用少量溶液清洗比色皿數(shù)次。 2．測定體系體積：取待測小麥5株，將根系洗凈控干后，浸在事先裝有一定體積水的10ml或25ml量筒里(或用體積計)，用排水法測定根系體積。甲烯藍標(biāo)準(zhǔn)溶液配制試管號12345670123456加蒸餾水量ml10987654甲烯藍溶液濃度mg/ml 把各試管中的溶液混勻后，利用分光光度計測定在波長660nm下的吸光度，測定時以1號試管(蒸餾水)為空白對照調(diào)透光率100%。3．藥品：(1) ；（2）。 [材料、儀器、藥品] 1．材料：用高溶度NaCl處理的以及沒有處理的對照小麥幼苗根系，在取樣時應(yīng)十分小心，以免將根系折斷或損傷。當(dāng)根系在甲烯藍溶液中已達吸附飽和而仍留在溶液中時，根系的活躍部分能把原來吸附在表面的物質(zhì)吸收到細胞中去，因而可繼續(xù)吸附甲烯藍。一般常用甲烯藍作為被吸附物質(zhì)，其被吸附的數(shù)量可以根據(jù)供試溶液濃度的變化用比色法準(zhǔn)確地測出。本實驗學(xué)習(xí)用甲烯藍法測定根系表面積和根系活力。四、植物根系活力測定甲烯藍法 植物的根系是吸收水分和礦質(zhì)營養(yǎng)的主要器官，又是物質(zhì)合成和轉(zhuǎn)化的器官，因此根系的生長發(fā)育狀況和活力直接影響植物體的生命活動。6．其他問題記載：[實驗前思考題](1) 通過水勢測定你能夠解決什么理論和實踐問題？(2) 說明水分的生理意義以及水勢測定的重要性？(3) 請簡述各種水勢測定方法的基本原理？比較各種方法的優(yōu)缺點？(4) 在取樣時，為什么將所取葉片全部疊在一起用切成切段，然后分別放入不同的試管并保證每個試管中來自每個葉片的切段數(shù)量一致？(5) 在本實驗中蔗糖起什么作用？(6) 為什么實驗中所用的試管、滴管都要洗凈烘干？(7) 葉切段在蔗糖溶液中保持時間長短對測定結(jié)果會產(chǎn)生什么影響？為什么？(8) 浸泡液數(shù)量多少對實驗有什么影響？(9) 為什么向浸泡葉切段的蔗糖溶液中加入甲烯藍溶液？又為什么不能多加？(10) 在用滴管從浸泡液中取溶液前為什么要充分混勻？（11）為什么從滴管中擠出液滴時要輕輕擠壓？(12) 有色液滴為什么會在原濃度溶液中上升、下降或靜止不動？(13) 在測定時為什么要在試管上加蓋以防止水分蒸發(fā)？(14) 為了使不同時間測定的數(shù)據(jù)具有可比性，你認為需要控制什么環(huán)境條件？為什么？(15) 寫出實驗時間按排和操作流程圖[實驗后思考問題題（挑戰(zhàn)題）](1) 你認為在實驗的那一步最容易產(chǎn)生誤差？為什么？(2) 什么溶液可代替蔗糖作為浸泡液？選擇浸泡溶液的標(biāo)準(zhǔn)是什么？(3) 從原理上講，小液流法還可用于何種生理活動的測定？請說明其原理。7．結(jié)果計算：將確定的蔗糖溶液濃度帶入公式Ψπ ＝一iCRT中計算植物組織的水勢。觀察有色小液滴的升降情況并做好記錄。將浸泡液充分混勻。5．溶液平衡：葉切段浸泡30min，期間輕輕搖動試管數(shù)次，以加速水分平衡。 4．向浸泡液中加待測樣品：取10個待測小麥葉片，用毛刷清潔葉表面，將基部和項部切掉。配制好的溶液要充分混勻。L1的8種濃度。本實驗采用蔗糖溶液。但也可用無機鹽溶液，以9份NaCI與1份CaCl2混合而成的平衡溶液較好。 [方法]1．準(zhǔn)備器具：將試驗所需要試管和滴管洗凈烘干。 3．藥品：（1） 甲烯藍粉末；(2) 蔗糖溶液，濃度為lmol浸泡液的液滴不動時，植物組織的水勢（MPa）Ψw＝Ψπ＝一iCRT [材料、儀器、藥品] 1．材料：高濃度NaCl處理的以及沒有處理的對照小麥幼苗葉片。如果液滴下降，說明浸泡液的滲透勢高于植物組織的水勢；若液滴上升，說明浸泡液的滲透勢低于植物組織的水勢；如果液滴不動，則表示植物組織與浸泡液的水分交換處于動態(tài)干衡中，浸泡液的滲透勢等于植物組織的水勢。當(dāng)兩個不同濃度的溶液相遇時，稀的溶液由于比重小而上浮，濃的溶液比重大而下沉。如果植物組織的水勢低于外液的滲透勢，則植物組織吸水而使外液濃度變大；反之，植物組織失水而使外液濃度變??；若二者相等，則外液濃度不變，此時外界溶液的滲透勢等于植物組織的水勢。該方法是前蘇聯(lián)學(xué)者夏爾達科夫(Chardakov)提出的，經(jīng)過多次改進，成為一個簡單而實用的方法。前者要求精密的儀器設(shè)備，靈敏度高，如熱電偶溫濕度計法；后者要求設(shè)備簡單，操作方便，但靈敏度低，如小液流法和折射儀法。在栽培生產(chǎn)上水勢也是了解植物體內(nèi)水分狀態(tài)，制訂灌溉計劃的重要指標(biāo)。植物組織的水勢愈低，吸水能力愈強，反之則愈弱。這種水分運動的動力是相鄰部位的水勢差。（13）寫出光合速率測定和葉綠素含量測定實驗的統(tǒng)一時間安排和實驗流程圖。[實驗結(jié)果記錄]1．實驗材料：植物名稱：種植地點：發(fā)育時期：試驗處理：植物的生長狀況：取樣時間：取樣部位及數(shù)量：2．測定地點：3．測定時間： 年 月 日 時 分 至 時 分4．測定條件記錄： 5．?dāng)?shù)據(jù)記錄及結(jié)果記載：表1 測定數(shù)據(jù)記錄及計算結(jié)果重復(fù)光密度葉綠素含量 mg/g FW 或mg/dm2645nm652nm663nmchlachlbChla+b公式（5）Chla+b公式（6）Chla/chlb綠葉123平均值標(biāo)準(zhǔn)差黃葉123平均值標(biāo)準(zhǔn)差 注：本實驗中由于數(shù)值都來自同一樣品，所以平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差計算只做為練習(xí)。 4．結(jié)果計算：將6466652nm處測得的吸光度代入公式（3）、（4）、（5）、（6）中計算葉綠素a、b濃度和總濃度。每個樣品重復(fù)測定3次。第一個位置放盛有80%丙酮的比色皿，做為空白對照。3．讀取吸光度：取厚度為lcm的潔凈比色皿，注意不要用手接觸比色皿的光面，先用少量色素提取液清洗2~3次，注意清洗時要使清洗液接觸比色皿內(nèi)壁的所有部分，然后將色素提取液倒入比色皿中，液面高度約為比色皿高度的4/5，將撒在比色皿外面的溶液用濾紙吸掉（注意不能擦），再用擦鏡紙擦干擦凈。如果需要計算葉片干樣葉綠素含量，另取一份相同樣品置于烘箱中烘干，用于測定干重。（在正規(guī)實驗中應(yīng)各重復(fù)3次，本實驗為減少丙酮向環(huán)境中的排放，故不設(shè)重復(fù)）。 2．儀器：(1) 分光光度計；（2）天平；(3) 研缽；(4) 濾紙；(5) 漏斗；(6) 5ml移液管；(7) 打孔器；（8）滴管；（9）剪刀；（10）25ml容量瓶；（11）毛刷；（12）擦鏡紙。[材料、儀器、藥品] 1．材料：植物綠色葉片。L1）或mgg1或mg 但Inskeep等（1985）認為葉綠素a和b吸光系數(shù)相等時的波長位于吸收光譜斜率很陡的位置上，因此儀器波長很小的偏差都可能導(dǎo)致很大的測定誤差。L1），的關(guān)系可分別用下列方程式表示：A663=+ （1）A645=+ （2）解方程（1）和（2）得：Ca= A663— A645 (3)Cb= A645— A663 (4)Ca十b＝ A645— A663 (5) 從公式（3）、（4）、（5）可以看出，只要測得葉綠素溶液在663nm和645nm處的吸光度，就可計算出提取液中的葉綠素a、b濃度和葉綠素總濃度（a+b）。L1時的吸光度）；。葉綠素a、b的丙酮溶液在可見光范圍內(nèi)的最大吸收峰分別位于66645nm處。利用分光光計測定葉綠素含量的依據(jù)是LambertBeer定律，即當(dāng)一束單色光通過溶液時，溶液的吸光度與溶液的濃度和液層厚度的乘積成正比。[原理]葉綠素不溶于水，溶于有機溶劑，可用多種有機溶劑，如丙酮、乙醇或二甲基亞砜等研磨提取或浸泡提取。在植物光合生理、發(fā)育生理和抗性生理研究中經(jīng)常需要測定葉綠素含量。葉綠體色素的提取、分離和測定是研究它們的特性以及在光合中作用的第一步。二、植物葉綠素含量測定丙酮提取法高等植物光合作用過程中利用的光能是通過葉綠體色素(光合色素)吸收的。（3） 根據(jù)光合作用的反應(yīng)方程式，光合作用涉及到二氧化碳、水、氧氣、有機物質(zhì)和光能的吸收，哪些因子可作為光合作用測定的指標(biāo)？為什么？請簡述各種光合作用測定方法的基本原理？比較各種方法的優(yōu)缺點？（4） 為什么選擇葉齡、葉色、著生部位和受光一致，以及主脈兩側(cè)對稱的葉片？（5） 為什么將待測葉片編號？（6） 在改良半葉法中為什么要殺死韌皮部？（7） 三氯乙酸在本實驗中起什么作用？為什么？ （8） 有三種殺死韌皮部的方法，各適用何種試材？（9） 在取樣稱重時，為什么將同號葉片的兩個半葉疊在一起用打孔器打取葉圓片？（10）烘干時為什么樣品放入稱量瓶，在烘箱中不加蓋，而從烘箱取出時需要加蓋，并放入干燥器中？（11）如果將先取回的半片立即打孔取樣烘干，對最后的測定數(shù)據(jù)將會產(chǎn)生什么樣的影響？為什么？（12）在烘干過程中，為什么需要用105℃的高溫10min殺死細胞？如若不然，將對實驗數(shù)據(jù)產(chǎn)生什么樣的影響？（13）測定時間過短對所測定的光合作用速率會產(chǎn)生什么樣的影響？為什么？測定時間過長又會產(chǎn)生什么樣的影響？為什么？（14）為使不同時間測定的數(shù)據(jù)具有可比性，你認為需要控制什么環(huán)境條件？為什么？（15）寫出實驗時間安排和操作流程圖。[實驗記錄]1．實驗材料：植物名稱：種植地點：發(fā)育時期：試驗處理：植物的生長狀況：取樣部位及數(shù)量：2．實驗時間： 年 月 日 時 分 至 時 分3．實驗條件記錄項目實驗開始時實驗結(jié)束時平均值時間溫度光強風(fēng)速二氧化碳濃度4．測定數(shù)據(jù)記錄重復(fù)葉圓片數(shù)量葉圓片總面積m2暗中半葉干重mgW1照光半葉干重mgW2光合速率mgDW ，便可得CO2的同化量，以mgC02 5．結(jié)果計算： W2W1At光合速率(mgDW將稱量瓶中疊在一起的葉圓片分散，開蓋置于105℃烘箱中烘10min以快速殺死細胞，然后將溫度降到70~80℃，烘干至恒重(2~4h左右)。打孔器直徑根據(jù)葉片面積大小進行選擇，盡可能多的打取葉圓片。每5 個葉片打下的葉圓片放入一個稱量瓶中，做為一個重復(fù)。注意兩次剪葉速度應(yīng)盡量保持一致，使各葉片經(jīng)歷相同的光照時間。2~3h后，再按原來的順序依次剪下葉片的另一半。 3．剪取樣品：葉柄處理完畢后即可剪取樣品，并開始記錄時間，進行光合作用的測定。選用何種方法處理葉柄，視植物材料而定。本實驗統(tǒng)一使用三氯乙酸。對于韌皮部較厚的果樹葉柄，可用融熔的熱蠟燙傷一圈。(2) 燙傷法：用棉花球或紗布條在90℃以上的開水中浸一浸，然后在葉柄基部燙半分鐘左右，出現(xiàn)明顯的水浸狀就表示燙傷完全。(1) 環(huán)割法：用刀片將葉柄的外層(韌皮部)。增加葉片的數(shù)目可提高測定的精確度。 [方法] 1．取樣：在戶外選擇較綠和較黃的同種植物葉片各15片，要注意葉齡、葉色、著生節(jié)位、葉脈兩側(cè)和受光條件的一致性。 2．儀器及用品：(1) 剪刀；(2) 4塊濕紗布；（3）帶蓋磁盤；(4) 30個小紙牌，去戶外之前用鉛筆編號（1~15；1~15）；(5) 鑷子；(6) 打孔器；（7）鉛筆；（8）記號筆；(9) 12個稱量瓶；(10) 烘箱；(11) 分析天平；（12）干燥器。乘以系數(shù)后還可計算出C02的同化量。一定時間后，測定光下和暗中葉片的干重差，即為光合作用的積累的干物質(zhì)量。用物理或化學(xué)方法處理葉柄或莖的韌皮部，保留木質(zhì)部，以阻斷葉片光合產(chǎn)物的外運，同時保證正常水分供應(yīng)。本次實驗學(xué)習(xí)光合速率測定最經(jīng)典的方法之一改良半葉法。光合速率可根據(jù)植物對CO2的吸收量，O2的釋放量或干物質(zhì)(有機物質(zhì))的積累量來進行測定。光合作用強弱與環(huán)境條件變化密切相關(guān)。