【正文】 萌發(fā)。對(duì)于地上害蟲的防治來說，影響最大的是濕度和紫外線。歷史上曾經(jīng)因?yàn)榉佬Р环€(wěn)定使綠僵菌的應(yīng)用陷入停頓(樊美珍和李增智，1994)。作為商業(yè)產(chǎn)品其貨架壽命(shelflife)應(yīng)該達(dá)到 18 個(gè)月(Couth ， Ignoffo， 1981)。液固兩相法生產(chǎn)球孢白僵菌的成功，使我國成為世界上唯一能成批量生產(chǎn)真菌高孢粉的國家。綠僵菌孢子粉的規(guī)模化生產(chǎn)迄今沒有突破。80 年代開始噴灑干菌絲粉防治水稻葉蟬綠僵菌抗藥性菌株的馴化選育10和飛虱。 討論綠僵菌用于防治農(nóng)林害蟲已有近百年的歷，史但制劑的商品化進(jìn)展卻十分緩慢。本實(shí)驗(yàn)在研究綠僵菌菌對(duì)嘧霉胺的抗藥性遺傳穩(wěn)定性顯示，4 株抗藥性菌株的EC50 值逐漸減小，第零代與第三代減小幅度明顯快于第三代與第六代的減小幅度。研究發(fā)現(xiàn)這些綠僵菌的抗藥性菌株的生長速率明顯慢與敏感菌株，而抗性菌株之間生長速率沒有明顯的差別，這說明室內(nèi)誘導(dǎo)的高抗突變體不能正常生長，菌落直徑與菌株的敏感性沒有相關(guān)性，而是由菌株本身決定的。mL1)R1R2R3R43 結(jié)論與討論 結(jié)論本試驗(yàn)通過用一系列不同濃度的嘧霉胺誘導(dǎo)綠僵菌病原菌產(chǎn)生抗性菌株，經(jīng)過誘導(dǎo)后的抗藥性菌株具有良好的生長狀態(tài)，具有一定強(qiáng)度的抗藥性。mL1)EC90(181。mL1)EC50(181。mL1)EC90(181。mL1)EC50(181。mL1)EC90(181。沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文9表 4 綠僵菌連續(xù)轉(zhuǎn)代培養(yǎng)后 EC50 和 EC90 的變化第 0 代 第三代 第六代菌株 EC50(181。試驗(yàn)表明經(jīng)轉(zhuǎn)代培養(yǎng)后，其抗藥性水平下降，但至第六代各抗藥性菌株仍表現(xiàn)出對(duì)嘧霉胺的很好的抗藥性。是適應(yīng)其生存的一種需要。由此我們可一清楚的知道綠僵菌病原菌抗藥性的改變對(duì)孢子產(chǎn)量的影響無顯著性差異。gRRRR5 的 EC50 值近而計(jì)算出其抗性指數(shù)，說明經(jīng)嘧霉胺誘導(dǎo)的 4 株抗性菌株對(duì)嘧霉胺的使用已經(jīng)存在很大的風(fēng)險(xiǎn)。從表 1：可以清楚的看出這四株綠僵菌對(duì)嘧霉胺的抗性菌株已經(jīng)有高等程度的抗性。抗性指數(shù)越大的則表明藥劑對(duì)這種菌株的毒殺作用越小，相反，抗性指數(shù)越小則表明藥劑對(duì)這種菌株的毒殺作用越大。圖1 是綠僵菌株和抗藥性菌株在嘧霉胺濃度為 1000ug/ml 時(shí)的生長狀況的比較，從圖中可以看出，敏感菌株 S 生長明顯受到抑制，抗性菌株 RRRR4 生長狀況良好，即獲得綠僵菌對(duì)嘧霉胺的抗藥性菌株。2 結(jié)果與分析 綠僵菌對(duì)嘧霉胺抗藥性菌株的誘導(dǎo)用直徑 5mm 的打孔器從培養(yǎng)好的綠僵菌的菌落邊緣打孔，然后將菌碟接種到含嘧霉胺亞致死劑量的 Lasp 平板上，25℃ 黑暗培養(yǎng)，然后逐步提高含藥平板的藥劑濃度，自下一代菌落邊緣挑取菌碟接種到含毒平板上培養(yǎng)。測定第0、第3和第6代的菌絲直徑。測量不同菌絲直徑，對(duì)比抗性菌株與敏感菌株的生長速率。每個(gè)菌株重復(fù)3次，比較不同菌株產(chǎn)孢量的區(qū)別。根據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）抗性倍數(shù)大于 10 的為高等抗性，抗性倍數(shù)在 510為中等抗性。25℃培養(yǎng) 7 綠僵菌 5d，采用十字交叉法測量菌落直徑。將綠僵菌敏感菌株 S 及獲得的抗藥性菌株 RRR3 和R4 分別在 PDA 培養(yǎng)基上 25℃ 預(yù)培養(yǎng) 5d，用直徑 5mm 的打孔器在靠近菌落邊緣打取菌餅。 儀器及用品移液槍、培養(yǎng)皿、膠頭滴管、試管架、玻璃棒、孢子測微器、酒精燈、試管、移植針、漏斗、凹玻片、紗布、濾紙、250ml 三角瓶、顯微鏡、計(jì)數(shù)器、恒溫箱、高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱 試驗(yàn)方法 綠僵菌對(duì)嘧霉胺抗藥性菌株的誘導(dǎo)將綠僵菌菌株接種到含亞致死劑量的嘧霉胺PDA平板上， 25℃培養(yǎng)5d，于菌落邊緣挑取菌絲接種到另一含嘧霉胺的平板上，逐漸提高嘧霉胺濃度，直至綠僵菌在含1000ug/ml的嘧霉胺平板上能正常生長，即獲得抗嘧霉胺的抗藥性菌株。培 養(yǎng) 基 在 使 用 時(shí) 也 可 以 做 成 不 含 瓊 脂 的 液 體 培 養(yǎng) 基 ， 用 于 菌 類 的 震 蕩 培 養(yǎng) 。 如 果 培 養(yǎng) 基 偏 酸 或 偏 堿 時(shí) ， 可 用 lmol／ LNaOH 或 lmol／ LHCL 溶 液 進(jìn) 行 調(diào)節(jié) 。PDA 培 養(yǎng) 基 一 般 不 需 要 調(diào) pH。將馬鈴薯洗凈去皮切塊，加水煮沸半小時(shí)，用雙層紗布過濾薯塊，補(bǔ)足水量，加入瓊脂，加熱溶化，再加糖，待完全化后，乘熱用雙層紗布過濾到 1000ml 的塑料燒杯中，乘熱分裝到三角瓶中，每瓶裝量不超過三角瓶容量的 2/3，塞好棉塞，121℃高壓濕熱滅菌25min。mL1 母液，供本試驗(yàn)使用?！」┰囁巹? 20% 嘧霉胺懸浮劑，吸取 1ml 20%嘧霉胺懸浮劑，用無菌水稀釋至 10ml，配制成 20220181。本試驗(yàn)通過室內(nèi)化學(xué)藥劑誘導(dǎo)，初步獲得了對(duì)嘧霉胺的抗性菌株，研究了抗藥性菌株的生物學(xué)性狀，評(píng)估其抗藥性，以期為嘧霉胺的合理推廣應(yīng)用提供依據(jù)。將不同作用機(jī)制的殺菌劑復(fù)配或交替使用，在復(fù)配或交替使用時(shí)可以使用與嘧霉胺無交互抗性的藥劑：多菌靈或者腐霉利，避免使用有正交互抗性的嘧菌環(huán)胺。在生產(chǎn)中注意IPM即對(duì)病害的綜合防治，采用生態(tài)防治等多種方法減輕病害壓力。目前，嘧霉胺在遼寧省及全國范圍對(duì)作物的防治中使用范圍比較廣。嘧霉胺在遼寧省目近前仍是防治中的有效藥劑。年已有多篇關(guān)于對(duì)嘧霉胺產(chǎn)生抗藥性的報(bào)道。嘧啶胺類殺菌劑嘧菌環(huán)胺目前尚未在遼寧省大面積推廣使用，從其與同類殺菌劑嘧霉胺之間存在正交互抗性結(jié)果看出。嘧霉胺使用較多的沈陽市、遼陽市、大連市和鞍山市抗藥性頻率較高。嘧霉胺作用位點(diǎn)單一，屬高抗藥性風(fēng)險(xiǎn)殺菌劑，它的作用機(jī)理獨(dú)特，即抑制病原菌蛋白質(zhì)分泌，降低某些水解酶水平，而這些水解酶與病原菌引起寄生組織壞死有關(guān)。嘧霉胺(pyrimet hanil) 是近幾年出現(xiàn)的新一代嘧啶胺類殺菌劑，20 世紀(jì) 90 年代初，嘧霉胺率先在歐洲大面積推廣，1998 年嘧霉胺在我國首次獲得農(nóng)藥登記。在綠僵菌劑中加入少量化學(xué)農(nóng)藥，有增效作用。每株桉樹增加 2 分錢的成本，就能使 95％以上的桉樹逃脫白蟻的摧殘。田間大規(guī)模應(yīng)用試驗(yàn)的結(jié)果顯示，綠僵菌能適用于室內(nèi)外，在防治桉樹白蟻方面具有用量少、成本低，保證苗木成活率 95％以上的特點(diǎn)。 目 前 ， 重 慶 大 學(xué) 基 因 研 究 中 心 完 成 了 殺 蝗 綠 僵 菌 生 物 農(nóng) 藥 的 研 制 ，取 得 了 重 要 的 研 究 成 果 ， 生 產(chǎn) 的 產(chǎn) 品 已 在 國 內(nèi) 多 個(gè) 省 份 示 范 試 驗(yàn) 。綠 僵 菌 制 劑 屬 于 活 體 類 微 生 物 ， 其 防 效 在 很 大 程 度 上 受 到 外 界 環(huán) 境 條 件 的 制 約 ，尤 其 是 溫 度 、 濕 度 和 紫 外 線 的 影 響 ， 為 了 解 決 這 一 難 題 ， 必 須 依 賴 劑 型 的 開 發(fā) 和改 進(jìn) ， 添 加 促 進(jìn) 孢 子 在 低 溫 、 低 濕 條 件 下 萌 發(fā) 的 助 劑 和 紫 外 保 護(hù) 劑 。就病原來說，昆蟲對(duì)真菌易被感染，因?yàn)檎婢峭ㄟ^孢子產(chǎn)生芽管而直接穿透體壁進(jìn)行感染的，而其它微生物如病毒、細(xì)菌和原生動(dòng)物主要是經(jīng)口傳染。 是 自然界中一類有效而且極其重要的自然控制因子，不需要人類的干預(yù)就能造成許多害蟲周期性的大量死亡。能 夠 寄 生 于多 種 害 蟲 的 一 類 真 菌 ， 通 過 體 表 或 取 食 作 用 進(jìn) 入 害 蟲 體 內(nèi) ， 在 害 蟲 體 內(nèi) 不 斷 增 繁 殖通 過 消 耗 營 養(yǎng) 、 機(jī) 械 穿 透 、 產(chǎn) 生 毒 素 ， 并 不 斷 在 害 蟲 種 群 中 傳 播 ， 使 害 蟲 致 死 。 biological characteristics。 pyrimethanil。關(guān)鍵詞：綠僵菌；嘧霉胺；抗性菌株；生物學(xué)特性；遺傳穩(wěn)定性沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文1Abstract Metarhizium anisopliae of imperfect fungi， bacteria present stem bundle， bundle pullulans Branch， Metarhizium genus， with a broad spectrum. Metarhizium anisopliae on the host and pathogen invasion of host physiological and biochemical roles between the bined result of ， through the body wall， valves， and other ways to infect the host alime