【正文】 助的人致以深深的謝意！沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文承諾書論文（設(shè)計(jì)）題目 弱光脅迫下鈣對番茄葉片鈣組分和活性氧的影響完成人姓名 湯灣 專業(yè) 園藝指導(dǎo)教師姓名 李天來 職稱 教授本畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）的創(chuàng)新點(diǎn)： 本論文是通過培養(yǎng)液，研究不同鈣水平對弱光脅迫下番茄葉片鈣組分和活性氧代謝的影響，進(jìn)一步為明確 Ca2+耐弱光提供了理論依據(jù)。在學(xué)習(xí)中,老師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、豐富淵博的知識、敏銳的學(xué)術(shù)思維、精益求精的工作態(tài)度以及侮人不倦的師者風(fēng)范是我終生學(xué)習(xí)的楷模，導(dǎo)師的高深精湛的造詣與嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的治學(xué)精神，將永遠(yuǎn)激勵著我。弱光脅迫下鈣對番茄葉片鈣組分和活性氧的影響14參考文獻(xiàn)[1]董彩霞,周健民,范曉暉花期減少施鈣量對不同鈣效率番茄果實(shí)鈣形態(tài)和含量的影響[J].植物生理學(xué)通訊,2022，39(3)：128130．[2][J].植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào),2022,10(1)：143146．[3]、鉀與鈣配合對保護(hù)地番茄鈣吸收的影響[J].植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào),2022,11(2)：240243．[4]、鈣形態(tài)及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)影響[J].生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào),2022,19(9)：276278．[5]張燕，李天飛，方力，等．鈣對高溫脅迫下煙草幼苗抗氧化代謝的影響[J]．生命科學(xué)研究．2022，4(6)：356361．[6]劉劍鋒,唐鵬,[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2022,23(5)：247249．[7]李天來,李益清．鈣對弱光脅迫下番茄葉片保護(hù)酶活性及可溶性蛋白含量的影響[J]．園藝學(xué)報(bào)，2022，35(11)：16011606．[8]高洪波，陳貴林．鈣調(diào)素拮抗劑與鈣對茄子幼苗抗冷性的影響[J]．園藝學(xué)報(bào)，2022，29(3)：243246．[9]戴高興,彭克勤,[J].(03)：156159[10]高洪波,[J].(01)：263274[11]楊春祥，李憲利，高東升．鈣對低溫脅迫下油桃花果膜脂過氧化和保護(hù)酶活性的影響[J].落葉果樹，2022(6)：13．[12]林多,楊延杰,范文麗等．低溫對番茄幼苗葉片活性氧代謝的影響[J]．遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，(5)：14．[13]胡澤友，鄧小渡，彭喜旭，等．外源鈣對鎳脅迫下水稻幼苗抗氧化酶活性及膜脂過氧化的影響[J]．中國水稻科學(xué)，2022，21(4)：367371．[14]鄒再集,[J]．西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)．1994，3(3)：5156[15]張春梅,鄒志榮,張志新等．外源亞精胺對模擬干旱脅迫下番茄幼苗活性氧水平和抗氧化系統(tǒng)的影響[J]．應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2022，15（3）：301307．[16]羅黃穎,高洪波,夏慶平等．γ－氨基丁酸對鹽脅迫下番茄活性氧代謝及葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響[J]．中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2022，44（4）：735761．[17]張會慧,張秀麗,許楠等．外源鈣對干旱脅迫下烤煙幼苗光系統(tǒng)Ⅱ功能的影響[J]．應(yīng)用生態(tài)學(xué)沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文15報(bào)，2022，22(5)：1195 1200．[18] Knight H.,Brand S.,Knightm history of stress alters drought calcium signaling pathways in Arabidopsis. 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Scientia Horticulture, 1997( 6) :27 35.[21]Salin M L1Toxic oxygen species and protective system of the chloroplast1Physiol Plant, 1987, 72: 681689弱光脅迫下鈣對番茄葉片鈣組分和活性氧的影響16致 謝本文是在導(dǎo)師李天來教授的悉心指導(dǎo)下完成的。4 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)論是：①弱光脅迫下鈣降低了番茄葉片中的總鈣含量，葉片中H2OCa 的變化是總鈣濃度改變的主要原因，說明水溶鈣可能在調(diào)節(jié)光合方面發(fā)揮著重要的作用。與前人研究結(jié)果一致。SOD和APX的活性顯著增加，說明有害氧離子基本被清除(ChangHyo Goh et al., 2022)。其中有研究認(rèn)為，用27 mM 的CaCl 2和鈣沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文13加IAA處理處理弱光下( 50%自然光強(qiáng)) 番茄葉片發(fā)現(xiàn)，可顯著提高SOD的活性（李天來和李益清，2022）。 Huahua Wang et al., 2022）等。3種保護(hù)酶協(xié)同作用，可以清除體內(nèi)一定數(shù)量的過剩O 2—，從而使膜系統(tǒng)減輕自由基引發(fā)的過氧化傷害，使植物的抗逆性得到提高。SOD是存在于植物細(xì)胞中最重要的抗氧化酶之一，其主要功能是清除O 2—，而POD具有分解H 2O2。研究表明，MDA是膜脂過氧化分解的主要產(chǎn)物之一，其含量與植物受傷害程度呈正相關(guān)。弱光條件下，植物細(xì)胞抗氧化酶系活性、同功酶酶譜的變化說明保護(hù)酶系不僅受遺傳特性決定，而且在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平上還受弱光脅迫強(qiáng)度和脅迫時(shí)間的影響，構(gòu)成復(fù)雜的多酶調(diào)控系統(tǒng)，目前對這一系統(tǒng)運(yùn)作的詳細(xì)機(jī)制還不清楚（王明等，2022）。王美平(2022)在不同生態(tài)型黃瓜上的研究表明，同一溫度下隨著光強(qiáng)的降低，MDA 含量增加，CAT和POD活性增加，SOD 活性下降。種培芳（ 2022）在甜瓜上的研究發(fā)現(xiàn)，弱光下葉片MDA 含量、POD、CAT活性增加，中度弱光脅迫下，耐弱光品種的POD 、CAT增幅更大，減輕了自由基對葉片細(xì)胞膜的傷害，但SOD活性變化較復(fù)雜。、H 2O2)和MDA不能被及時(shí)清除，細(xì)胞膜質(zhì)產(chǎn)生過氧化，細(xì)胞膜系統(tǒng)的傷害導(dǎo)致黃瓜植株生長發(fā)育受抑制。此時(shí)，對自由基有清除作用的SOD、POD和CAT活性，代表細(xì)胞膜受傷害程度的膜脂過氧化產(chǎn)物MDA的含量等都會發(fā)生變化，這些變化又會進(jìn)一步影響到植物的光合作用。 而本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，葉片中H 2OCa的變化是總鈣濃度改變的主要原因。邢尚軍等人研究證明噴鈣處理使櫻桃的全鈣、水提取鈣(H 2OCa)、乙醇提取鈣(ALcCa)的含量均有不同程度增加 [4]。董彩霞和周健民等人研究表明，花期減少施鈣量后，番茄果實(shí)中果膠酸鈣含量和比例顯著降低，水溶性鈣含量和比例顯著增加，果實(shí)底端比例高于頂端，磷酸鈣含量降低 [2]。還有人發(fā)現(xiàn)，在營養(yǎng)液中加鈣及在花期、幼果期分別向番茄花、葉、幼果噴施20mg/L萘乙酸（NAA ）% CaCl2混合液能夠顯著增加果實(shí)鈣含量，果實(shí)增鈣主要是增加了果膠酸鈣含量（董彩霞等，2022）。研究表明，用離子鈣、熬合鈣和納米鈣噴鈣處理冬棗果實(shí)，冬棗果實(shí)中的鈣主要以80%乙醇提取鈣(ALcCa)的形式存在，貯藏至 60d時(shí)，NaCl 溶液提取鈣和醋酸提取鈣含量下降，ALcCa 的含量有所上升。而在弱光處理下，鈣起作用的時(shí)間較正常光下晚，10d時(shí)才起作用。表明 Ca2+可以顯著提高弱光脅迫下番茄葉片 POD 活性，增強(qiáng)了植株對過氧化物的清除能力。表明弱光降低了番茄葉片的 SOD 活性，Ca 2+可以顯著提高弱光脅迫下番茄葉片 SOD活性, 增強(qiáng)植株對過氧化物的清除能力。在正常光照和弱光兩種處理中，SOD 活性都隨溶液 Ca2+濃度升高而升高，高鈣和無鈣處理的幼苗葉片 SOD 活性差異顯著。不同光照處理下，隨鈣離子濃度增強(qiáng)，MDA 含量降低，表明 Ca2+可以降低番茄葉片 MDA 的含量，可明顯減緩 MDA 對細(xì)胞膜的傷害。弱光條件下，MDA 含量變化更顯著。而無鈣處理 MDA 含量隨著處理時(shí)間的延長而升高，整體上 MDA 含量顯著增加。由圖 2 還可以看出，在自然光下，鈣處理對超氧陰離子的產(chǎn)生速率的影響更為顯著，這說明在自然光下鈣處理對番茄葉片超氧陰離子的產(chǎn)生速率的影響更大。弱光脅迫下鈣對番茄葉片鈣組分和活性氧的影響8 2024028032036040408010120220160180035791406080101201401601800357914050560570580ccc aaa bbb 水溶鈣(pm)A abc 醇溶鈣(pm) Lg z LwCbcddbcd dcdbcdbcccaabaaa酸溶鈣(pm) Treatment daysB bacba總鈣(pm) Treatment daysD 圖1 鈣對弱光下番茄葉片鈣組分含量的影響Fig. 1 Effects of calcium treatments on the forms of calciumin in leaves under low light stress Ca2+對弱光脅迫下番茄葉片超氧陰離子產(chǎn)生速率的影響由圖 2 可以看出，不同處理的番茄葉片隨著處理時(shí)間的延長超氧陰離子產(chǎn)生速率均呈下降趨勢，并且在自然光照和弱光下，超氧陰離子的產(chǎn)生率隨溶液 Ca2+濃度升高而降低，高鈣和無鈣處理的幼苗葉片超氧陰離子產(chǎn)生速率差異顯著（P） 。這表明鈣對弱光下番茄葉片中的鈣組分的影響不同。鈣顯著降低了葉片中水溶鈣，處理第五天最為明顯（圖 1A） 。 數(shù)據(jù)處理和分析運(yùn)用 Microsoft Excel 應(yīng)用程序和 SPSS 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。取試管，加入 25mmol/L K2HPO4KH2PO4 緩沖液（pH ，內(nèi)含 ）和 200μL %愈創(chuàng)木酚，攪拌，待愈創(chuàng)木酚溶解混合均勻后，再加入 200μL H2O2（10mmol/L）和 200μL提取液，于470nm 波長下測定 12min 內(nèi)的 OD 值變化[愈創(chuàng)木酚過氧化物酶在 470nm 下的消光系數(shù)為 (L取試管，在較暗光下加入 3mL 反應(yīng)液[ 由 50mmol/L 磷酸（pH ） ，13mmol/L 甲硫氨酸，63μmol/LNBT ，黃素和 ，用時(shí)現(xiàn)配] 和 25μL酶提取液，在 25℃的光照箱內(nèi)進(jìn)行光照反應(yīng) 17min，然后于 560nm 波長下進(jìn)行光密度測定(以抑制 NBT 光化還原50％為一個酶活性單位)。參照鄭炳松(2022)的方法，取1mL 樣品提取液，加入 3mL 27%的硫代巴比妥酸（TBA）和 12%的三氯乙酸（TCA） ，混合液在 95℃的水浴中保溫 30min 后，立即置于冰浴中冷卻，在 15000g 離心力下離心10min，然后分別在 532nm 和 660nm 波長下測定 OD 值。取 樣品提取液，加入 50mmol/L 磷酸緩沖液(pH )， 1mL 1mmol/L 鹽酸羥胺，充分搖勻，然后放入 25℃恒溫箱中保溫 1h，之后加入 1mL 17mmol/L 對氨基苯磺酸（以冰醋酸與水按 3:1 的比例配制）和 1mL 7mmol/L α–萘胺（以冰醋酸與水按 3:1 的比例配制） ，混合后放入 25℃恒溫箱中保溫20min，測定 530nm 波長下的 OD 值。磷酸緩沖液中含 ，%(W/V)Triton X沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文7100，4%(W/V) 聚乙烯吡咯烷酮(PVP) 。 超氧自由基(O 2)產(chǎn)生速率測定方法按鄭炳松（2022）年的方法進(jìn)行測定。每次提取都在 30℃的恒溫水浴中震蕩提取 18h，8000r/min 離心，傾出上清夜，再用此種浸提液按上述步驟連續(xù)提取 2 次，每次 2h，最后將提取液定容至 25mL，殘?jiān)?jīng)干灰化后，用鹽酸溶解。L1 的鹽酸。所用的五種提取液分別為 80%的乙醇、蒸餾水、l mol隔兩天取一次樣，單株取樣，3 次重復(fù)。s1）為遮光處理區(qū)，處理 11d。s1）為無遮光區(qū)，用遮陽網(wǎng)遮光至自然光強(qiáng)的25%（ ～在進(jìn)行不同供鈣水平處理的同時(shí)進(jìn)行遮光處理，溫室內(nèi)自然光強(qiáng)（～當(dāng)番茄苗生長至 4 葉 l 心時(shí)，選取生長狀態(tài)較一致穴盤苗，將根系洗凈后移入 29 號溫室內(nèi)用日本山崎配方營養(yǎng)液進(jìn)行水培，先用山崎配方營養(yǎng)液預(yù)培養(yǎng) 4d，清水處理 1d，然后轉(zhuǎn)移到不同供鈣水平的山崎配方營養(yǎng)液中培養(yǎng)10d。供試番茄為耐弱光品種“W” 。因此研究弱光脅迫下鈣對番茄葉片鈣組分和活性氧代謝的影響具有重要意義。研究番茄弱光生理的很多，但研究弱光下鈣對番茄鈣組分和活性氧代謝的較少。試驗(yàn)結(jié)果還表明，外源鈣促進(jìn)弱光脅迫下番茄葉片光合作用可能與其提高葉片抗氧化酶活性有關(guān)。李天來,李益清在外源鈣及鈣抑制劑對番茄耐弱光特性的調(diào)控作用中指出Ca 2+可在一定程度上可提高弱光脅迫下番茄葉片POD、CAT和SOD等防御酶活性，增強(qiáng)植株對活性氧的清除能力。楊春祥等人研究在萌芽期、花蕾期和盛花末期噴施CaCl 2溶液，可以降低低溫脅迫后油桃花和幼果的細(xì)胞膜透性及含量，可以提